EMB

E LUNGERANGLULAR MANAJA. Coli no embrulh. Fonte: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Qual é o Agar EM?

Ele EMB É um meio de cultura sólido seletivo e diferencial usado para o isolamento de bacilos Gram -negativos, principalmente da família Enterobacteriacee e outros bacilos Gram -negativos que não são de queda. Também é conhecido com o acrônimo EAM, que significa Eosina-Azul de metileno.

Este meio foi criado por Holt-Harris e Teague em 1916. Ele contém peptona, lactose, sacarose, fosfato de dipotássio, ágar, eosina, azul de metileno e água. É muito parecido com o ágar MacConkey, especialmente se o Agar EMB por Levine for usado, o que não contém sacarose.

De fato, cada laboratório decide se funciona com um ou outro, pois eles cumprem a mesma função, embora biochemicamente sejam diferentes.

Ele até apresenta o mesmo inconveniente que o clássico Agar MacConkey na produção de Swarming para sexo Proteus. Portanto, para evitar esse fenômeno, a concentração do ágar pode ser aumentada em até 5%.

Base

Seletivo

O ágar EMP é sutilmente seletivo porque contém coloração anilínica (eosina e azul de metileno), que atuam como inibidores, impedindo o crescimento da maioria das bactérias gram -positivas e alguns bacilos exigentes exigentes exigentes.

No entanto, esse ágar tem a inconveniência de que algumas bactérias gram -positivas possam resistir à presença de substâncias inibitórias e crescer como pequenas pontuações incolores, como o Enterococcus faecalis e alguns Staphylococcus.

Certos leveduras também podem crescer, como Complexo Candida Albicans, que dará pequenas colônias rosa. Os clamidosesporos podem até se desenvolver a partir deste fermento se a amostra for semeada por profundidade.

Diferencial

Por outro lado, o Agar EMB também é um meio diferencial, uma vez que esses corantes juntos (eosina e azul de metileno) têm a propriedade de formar um precipitado no pH ácido; portanto, eles servem como indicadores da produção do mesmo.

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Portanto, bactérias fracamente fermentando ou sacarose produzem cores roxas em 24 a 48 horas. Por exemplo, gêneros Klebsiella, Enterobacter e Serratia.

Aquelas bactérias que fermentam fortemente lactose, como Escherichia coli, ou sacarose, como Yersinia enterocolítica qualquer Proteus Penneri, Eles formam um precipitado preto esverdeado, dando uma aparência de brilho metálico, característico nessas espécies.

Deve -se notar que, se o meio Levine do EMB, Yersinia enterocolítica e Proteus Penneri Eles vão produzir colônias transparentes.

As bactérias que não ferram lactose ou sacarose são nutridas pela presença de peptonas, que fornecem aminoácidos e nitrogênio necessário para o desenvolvimento bacteriano, e produzem colônias transparentes. Por exemplo, gêneros Salmonella e Shigella, entre outros.

Também é importante enfatizar que o gênero Acinetobacter Pode apresentar colônias azuis de lavanda, mesmo que não sejam férmé de lactose, ou sacarose, mas elas têm a propriedade de consertar o azul de metileno na parede celular. Isso também pode acontecer com outras bactérias oxidativas.

Preparação

O meio desidratado original é o bege leve. Para preparar esse meio de cultura, 36 gramas do meio desidratado devem ser ponderados e suspensos em uma correção que contém um litro de água destilada.

Depois de deixar a mistura 5 minutos em repouso, leve o Fixola a uma fonte de calor, misturando de uma maneira vigorosa e constante até ferver e dissolver completamente.

Posteriormente, o meio de cultura já dissolvido deve ser esterilizado usando a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Tempo terminado, ele é removido da autoclave e deixa ficar brevemente. Então ainda está quente (45-50 ° C) entre 15 a 20 ml de ágar em cada placa estéril de Petri. O meio deve ser titular azul.

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Depois de servido, as placas são deixadas ligeiramente descobertas até que o ágar esfrie um pouco. Então eles são cobertos e permitidos para solidificar completamente. Posteriormente, eles são ordenados em plaquetas invertidos e são armazenados na geladeira (8 ° C) até o uso.

Este procedimento é preferencialmente realizado em um sino de fluxo laminar ou em frente ao isqueiro de Bunsen para evitar contaminar.

É importante ter em mente que cada casa comercial indicará a quantidade que deve ser pesada para preparar o meio de cultura.

O pH final do meio deve ser 7.2 ± 0.2

Formulários

• Este meio é usado para semear urina e fezes ou qualquer tipo de amostras clínicas, especialmente se houver suspeita a presença de bacilos negativos para Gram -Decaning, como os bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae, que crescem muito bem neste meio.
• As bactérias enteropatogênicas dos gêneros Shigella e Salmonella Eles são distinguidos por suas colônias incolores ou levemente âmbares.
• Outros bacilos não -fermentadores crescem, como Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre outros.
• Além disso, esse meio é muito útil na análise microbiológica de alimentos e água, pois é ideal para a fase de confirmação completa da determinação de coliformes, isto é, para corroborar a presença de E. coli De caldos EC turvosos, da técnica de números mais prováveis ​​(NMP).

Controle de qualidade

Para verificar se o meio de cultura recém -preparado funciona bem, os controles podem ser semeados para observar as características das colônias e verificar se elas dão conforme o esperado.

Para fazer isso, você pode usar cepas de ATCC ou cepas bem identificadas de E. coli, Enterobacter Aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella Flexneri, Pseudomonas aeruginosa e algumas bactérias gram -positivas, como S. aureus.

Espera-se que E. coli gerar colônias negras azuladas bem desenvolvidas com brilho metálico verde. Em tanto que Enterobacter Aerogenes e Klebsiella sp Eles devem dar colônias mucosas bem desenvolvidas em preto azul.

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Por sua parte, Salmonella Typhimurium e Shigella Flexneri Eles devem desenvolver colônias grandes e incolores ou com uma cor âmbar leve.

Finalmente, o gênero Pseudomonas aeruginosa Cresce como colônias incolores de tamanho irregular, enquanto as bactérias gram -positivas devem ser totalmente inibidas ou crescer com colônias muito pequenas.

Considerações finais

Às vezes, a esterilização faz com que o azul de metileno reduza, observando um meio laranja. Para que o azul de metileno o óxido e recupere a cor roxa, ele deve ser misturado suavemente até que a cor se recupere.

Além disso, depois de esterilizado, o corante pode precipitar, então deve ser misturado bem antes de servir as placas de Petri.

Referências

1. Eosina e ágar azul de metileno. Recuperado de Calab.com.
2. Levine e.M.B. (Com eosina e azul de metileno). Recuperado do britanialab.com.