Cromatograma

Cromatograma típico. Fonte: Heliagon, Wikimedia Commons

O que é cromatograma?

Ele cromatograma É um registro gráfico bidimensional obtido em um meio absorvente, que mostra a separação de substâncias através da cromatografia. No cromatograma, um padrão visível, picos ou pontos, que refletem a separação física dos componentes de uma mistura é formada.

A figura superior é um cromatograma com três picos, A, B e C, três componentes da amostra separados por cromatografia. Observa -se que cada um dos três picos tem altura e localização diferentes no eixo do tempo do cromatograma.

O eixo das ordenadas, ou e, registra informações sobre a intensidade do sinal (em MV milivolts neste caso). Representa o registro, dependendo do detector, de alguma propriedade física da substância ou componente separado da mistura.

A altura do pico é proporcional à concentração do componente separado da amostra em um sistema ideal. Assim, por exemplo, é fácil visualizar que o componente B está em maior proporção do que a e c.

Na abcissa, ou eixo x, o tempo de retenção dos componentes da amostra ou mistura é representado. É o momento em que passa da injeção da amostra até que ela pare, sendo diferente para cada substância pura.

O que é um cromatograma para?

Constitui o registro final de todo o processo de cromatografia. Dele são parâmetros obtidos de interesse analítico. Isso pode ser obtido como um arquivo eletrônico, um histograma impresso ou no suporte do processo (no papel, por exemplo).

O eixo y é gerado por detectores de sinal ou intensidade de resposta, como espectrofotômetros. Uma análise de tempo ideal, das características dos picos ou manchas obtidas, o tamanho, a localização, a cor, entre outros aspectos, é indispensável.

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A análise dos cromatogramas geralmente requer o uso de controles ou padrões, substâncias de identidade e concentração conhecida. A análise desses controles permite estabelecer em comparação com as amostras características dos componentes da amostra investigada.

No cromatograma, você pode fazer a observação e análise de como a separação dos componentes de uma mistura foi feita. Seu estudo ideal permite identificar uma substância, mostrar sua pureza, quantificar a quantidade de substâncias presentes em uma mistura, entre outros aspectos.

As informações extraídas podem ser qualitativas. Por exemplo, quando as substâncias são identificadas e sua pureza é determinada. Informações quantitativas estão relacionadas à determinação do número de componentes da mistura e à concentração do analito separado.

Identificação de substâncias

Analisando os resultados do cromatograma, várias substâncias podem ser identificadas comparando os tempos de retenção com os de substâncias conhecidas. Pode -se ver se as substâncias em estudo percorreram a mesma distância se tiverem o mesmo tempo que as substâncias conhecidas.

Por exemplo, o cromatograma permite detectar e identificar, na urina de atletas, metabólitos de drogas, como estimulantes e esteróides. É um apoio importante no estudo e pesquisa de alguns metabólitos produzidos por distúrbios genéticos no recém -nascido.

O cromatograma facilita a detecção de hidrocarbonetos halogenados presentes na água potável, entre outras substâncias. É indispensável na análise do laboratório de controle de qualidade, pois permite detectar e identificar os contaminantes presentes nos vários produtos.

Classificação da pureza das substâncias

Em um cromatograma, você pode distinguir entre substâncias puras e impuras. Uma substância pura produziria um único pico no cromatograma, enquanto uma substância impura produziria dois ou mais picos.

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Ajustando adequadamente as condições em que a cromatografia é realizada, duas substâncias podem ser evitadas.

Quantificação de substâncias

Por análise da análise dos picos do cromatograma, a concentração dos componentes da amostra pode ser calculada.

Portanto, a área do bico é proporcional à quantidade de substância presente na amostra. Esses dados quantitativos são obtidos em sistemas de alta sensibilidade, como os gerados por cromatografias de gases ou líquidos, por exemplo.

Pessoal

Uma das classificações dos cromatogramas está intimamente relacionada aos diferentes tipos de cromatografia, que geram o cromatograma correspondente.

Dependendo das condições de execução, os detectores, entre outros aspectos, o cromatograma variará em seu conteúdo e qualidade.

Cromatogramas no papel ou camada fina

O cromatograma pode ser gerado diretamente em papel ou camada fina, mostrando diretamente a distribuição ou distribuição dos componentes da amostra.

É muito útil para a separação e estudo de substâncias coloridas que possuem pigmentos naturais, como a clorofila. Pode estar sujeito a processos de desenvolvimento, caso as substâncias não tenham cores naturais e sejam úteis para estudos qualitativos.

Cromatogramas gerados por detectores

O cromatograma também pode ser obtido usando um detector que registra a resposta, saída ou sinal final de cromatografia. Como mencionado anteriormente, esse detector é geralmente um espectrofotômetro, um espectrômetro de massa, sequenciadores automáticos e eletroquímicos, entre outros.

Os cromatogramas gerados em colunas, de gases ou líquidos, bem como os de alta resolução em camada fina, usam detectores.

Dependendo do tipo de detector, o cromatograma pode ser classificado como diferencial ou integral, dependendo da forma de resposta do detector.

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Cromatograma diferencial

Um detector diferencial mede continuamente o sinal de resposta do cromatograma, enquanto detectores abrangentes acumula o sinal correspondente.

Um cromatograma diferencial é um cromatograma obtido por um detector diferencial. Entre esses detectores podem ser mencionados, por exemplo, espectrofotômetros e detectores de alterações na condutividade elétrica.

Esse tipo de cromatograma mostrou o resultado da separação de ânions de uma amostra, detectada por fotometria indireta. Os mesmos resultados também foram obtidos para o estudo de íons, por exemplo, com detecção final por comportamento.

Cromatograma diferencial. Fonte: Pixabay

O gráfico superior mostra o exemplo de um cromatograma diferencial, obtido por sequenciadores automáticos de DNA (ácido desoxirribonucleico). O gráfico mostra claramente quatro picos de cor, uma cor para cada uma das bases nitrogenadas do DNA.

Ao apoiar um programa computadorizado, a interpretação da sequência das análises de DNA é facilitada, bem como para analitos mais complexos.

Cromatograma integral

O cromatograma integral corresponde ao obtido por um detector integral. Este cromatograma mostra a saída de um único componente em estudo. Não há vários picos são obtidos como no diferencial.

No cromatograma integral, um registro é obtido com um formulário descrito como uma etapa. Este formulário é a parte do cromatograma que corresponde à quantidade de uma única substância que sai da coluna.

Referências

1. Bhanot, d. Como ler um cromatograma? Treinamento de laboratório recuperado.com.
2. O que é um cromatograma? Recuperado da cromatografia.com.
3. Mathias, J. Um guia para iniciantes: como interpretar os resultados da espectrometria de massa de cromatografia em relação à cromatografia. Recuperado do Inovatechlabs.com.
4. O cromatograma. Recuperado de Secyta.é.
5. Cromatografia em papel. Recuperado de.Wikipedia.org.