Caldo de lactosado

Caldo de lacto turbedidamente. Fonte: Foto tirada pelo autor do MSC. Marielsa Gil

O que é caldo de lactosado?

Ele Caldo de lactosado É uma cultura líquida, não seletiva, usada principalmente como um meio de pré-enriquecimento no isolamento de cepas de Salmonella, A partir da análise microbiológica feita a alimentos processados, produtos lácteos ou água. Isso é recomendado pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas para Alimentos (ICMPF).

O meio contém gelatina enzimática, carne e extrato de lactose, substâncias necessárias para o crescimento bacteriano. Além disso, a lactose é um carboidrato fermentável; portanto, alguns coliformes são capazes de desdobrá -lo com produção de gás.

Portanto, o caldo Lactosado é recomendado pela American Public Health Association (APHA) para o estudo presuntivo de bactérias coliformes totais e fecais. É descrito como uma excelente alternativa para substituir o caldo de Lauril Sulfate Triptose na técnica padrão do número mais provável (NMP), usado para a análise microbiológica de amostras de alimentos, leite e águas superficiais, subterrâneos, recreativos, residuais domésticos e industriais.

Base

Para a análise microbiológica de algumas amostras, a passagem de pré-enriquecimento é essencial para recuperar um microorganismo específico que pode estar em quantidade muito baixa ou em condições não favoráveis ​​que violam ou minimizam sua viabilidade. 

É o caso de alimentos secos e processados, possivelmente contaminados com Salmonellas sp. Nesses casos, se as bactérias estiverem presentes, elas sofreram abuso físico e químico durante o processo de produção de produtos.

De tal maneira que os microorganismos são expostos a fatores adversos, como desidratação, exposição a produtos inibitórios ou tóxicos e a sobreposição gerada pela presença de outras bactérias em maior quantidade, entre outros.

Nesse sentido, o caldo de lactosado tem um efeito de reparo das estruturas danificadas do microorganismo, fazendo com que ele se recupere e se reproduza, de tal maneira que possa ser detectado.

Da mesma forma, o caldo Lactosado tem a capacidade de diluir substâncias inibitórias que podem afetar sua viabilidade, permitindo seu desenvolvimento. Além disso, a composição nutricional do caldo lático é estratégico para favorecer o crescimento de Salmonella sp acima de outros microorganismos.

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Para a identificação final, deve ser subcultural em relação a outras culturas definitivas.

Por outro lado, a composição do meio também permite detectar microorganismos fermentários de lactose que produzem gás.

Preparação

Para preparar um litro de caldo de lactose, 13 gramas do meio desidratado devem ser pesados ​​e dissolvidos em 1.000 ml de água destilada.

Para ajudar a dissolução do meio na água, você pode aquecer um pouco a solução, mas não muito.

Uma vez homogêneo, a solução é preparada da seguinte forma: se o caldo será usado para a busca de coliformes, um choque com tubos de teste é preparado, que é introduzido um tubo de fermentação de Durham para baixo.

O tubo de Durham é um detalhe muito importante, porque permitirá a formação de gás, dados de grande valor na busca de coliformes.

Preparado os tubos, 10 ml do caldo de lactosado são distribuídos neles, quantidade que deve ser suficiente para cobrir todo o tubo de Durham.

Se o caldo Lactosado for usado como um caldo pré-enriquecimento, não é necessário colocar o tubo de fermentação de Durham. Nesse caso, é necessário mais médio (225 ml), que será servido em frascos de 500 ml, boca larga e com tampa de rosca resistente a térmicas.

Posteriormente, os tubos ou garrafas são levados para a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O meio deve estar em um pH final de 6.9 ± 0.2 a 25 ° C.

Os caldos são armazenados na geladeira até o uso. Antes de serem usados, eles devem estar temperando à temperatura ambiente.

Por outro lado, o caldo de lactosado também pode ser preparado com dupla concentração.

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Alguns laboratórios adicionam Brome. Nesse caso, o caldo toma uma cor roxa e se houver uma fermentação muda para amarelo.

Formulários

Nos laboratórios de microbiologia, o caldo de lactosado é amplamente utilizado porque é um meio relativamente econômico que oferece resultados confiáveis ​​e rápidos (24-48 horas).

Pode ser usado para a análise de coliformes totais e fecais em água e alimentos, ou como um caldo pré-enriquecido para Salmonella.

Pré-enriquecimento

A pré-enriquecimento é um passo antes do enriquecimento da amostra, o que melhora bastante a recuperação de bactérias de gênero Salmonella Em alimentos processados.

Para fazer isso, a amostra dos alimentos sólidos (25 gramas) ou líquido (25 mL) é semeada em 225 ml de caldo de lactosado, incubando por 24 a 48 horas. Posteriormente, será subcultural em um meio enriquecido como um caldo de selenito cistina ou caldo de tetrationato. Em seguida, vá para a mídia seletiva XLD e SS.

Análise coliforme total e fecal

É um excelente meio como um indicador de contaminação fecal.

Portanto, o caldo Lactosado é ideal para a fase presuntiva do estudo coliforme pelo método de número mais provável.

Para amostras em que suspeita de um grande número de coliformes, uma quantidade menor da mesma (1 mL) será inoculada, enquanto para amostras nas quais são suspeitas de menos coliformes, é inoculado mais volume de amostragem (10 ml).

Para a análise, 10 são feitos^-1, 10^-2, 10^-3, formando uma bateria de 3-5 para cada concentração usada.

De cada diluição, o mesmo volume é semeado para caldos de lactosado.

Os tubos são incubados por 24 horas. Os caldos negativos são incubados por 24 horas mais.

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A interpretação dos resultados é feita pela observação de duas características: a primeira é a presença ou ausência de turbidez e, como esse meio não contém indicador de pH, não haverá mudança de cor.

O segundo é a produção de gás. O gás é facilmente evidenciado no tubo de Durham, pela aparência de uma ou várias bolhas de ar dentro.

É considerado positivo se ambas as características forem observadas, ou seja, turbidez com produção de gás. Tubos positivos devem ser rejeitados em meios de confirmação (caldo verde de bile brilhante a 2% e caldo de CE).

Controle de qualidade média

• Na preparação do meio, é importante não esquecer de colocar os tubos de Durhams se o objetivo do mesmo for o estudo dos coliformes.
• Não superaqueça o meio antes de esterilizar.
• Distribuir nos tubos de teste antes de esterilizar, nunca depois.
• Não use se o meio tiver mais de 3 meses preparado.
• Não use se alguma mudança das características usuais do meio for observada.
• Ao preparar um lote de caldo de lactosado, você deve provar a qualidade das mesmas cepas de semeadura conhecidas como Escherichia coli, Enterobacter Aerogenes, Citrobacter Freundii e Klebsiella pneumoniae. Eles crescem muito bem, com produção de gás (controle positivo).
• Também pode incluir Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Typhimurium qualquer Enterococcus faecalis, Eles crescem bem, mas sem produção de gás (controle negativo).
• Deve estar pendente que a cor original do meio desidratado seja bege e a do meio preparado amarelo muito claro e transparente. Se a mudança de cor ou aparência for observada, pode haver deterioração do mesmo.

Referências

1. Acevedo r., Severiche, c., Castillo, m. Biologia Ambiental e Microbiologia. Universidade de Cartagena, Colômbia.
2. Laboratórios de Conde Pronadisa. Caldo de lactose Dupla concentração (European Pharm).