Agar de citrato Simmons

Pseudomonas fluorescens em agar de citrato de Simmons. Fonte: uma dúvida, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

O que é simmons citrato apar?

Ele Agar de citrato Simmons É um meio sólido usado como um teste bioquímico de identificação de microorganismos, especialmente bacilos negativos gram -gramados. O meio original foi criado por Koser em 1923.

O meio de citrato de Koser consistia em um caldo contendo fosfato de sódio, fosfato de amônio, fosfato monopotônico, sulfato de magnésio e citrato de sódio.

Como pode ser visto, a única fonte de carbono no meio é o citrato, e o nitrogênio é o fosfato de amônio, omitindo proteínas e carboidratos como fonte desses elementos, comumente presentes em outros meios.

Portanto, as bactérias inoculadas nesse meio só podem se reproduzir se for capaz de pegar o carbono do citrato. O teste foi positivo se houvesse turbidez no meio. No entanto, tive a inconveniência de que a turbidez não específica poderia ocorrer.

Este problema foi resolvido por Simmons adicionando ágar de bromotimol à fórmula original de Koser. Embora o princípio seja o mesmo, ele é interpretado de maneira diferente.

Base

Algumas bactérias têm a capacidade de sobreviver na ausência de fermentação ou produção de ácido lático, precisando obter energia através do uso de outros substratos. Neste teste, a única fonte de carbono oferecida é citrato.

As bactérias capazes de sobreviver nessas condições metabolizam o citrato rapidamente por uma rota alternativa para a tradicional, usando o ciclo do ácido tricarboxílico ou o ciclo de fermentação do citrato.

O catabolismo do citrato por bactérias inclui um mecanismo enzimático sem a intervenção da coenzima para. Esta enzima é conhecida pelo nome de Citrica (citrato oxalacetato-liasa) ou citrato demolase. A reação requer a presença de um cátion bivalente, que nesse caso é fornecido por magnésio.

Pode atendê -lo: tipos de respiração e suas características

A reação gera oxaloacetato e piruvato, que então dão origem a ácidos orgânicos no meio de um pH alcalino formado pelo uso da fonte de nitrogênio. Esses ácidos orgânicos são usados ​​como uma fonte de carbono que gera carbonatos e bicarbonatos, alcalinando ainda mais o meio.

Modo semeado

O meio citrato Simmons deve ser ligeiramente inoculado na cauda de peixe usando reta ou agulha e incubada por 24 horas a 35-37 ° C. Culminou o tempo que os resultados são observados.

A semeada é feita apenas na superfície do ágar, sem punção.

Interpretação

Se o meio é a cor original (verde) e não há crescimento visível, o teste é negativo, mas se o meio mudar de azul, indica a presença de produtos alcalinos, que é detectado pelo indicador de pH. Nesse caso, o teste é positivo.

Isso acontece porque se as bactérias usam o carbono do citrato, também é capaz de pegar o nitrogênio do fosfato de amônio com o qual libera amônia, alcalinando o meio.

Por outro lado, se o crescimento das bactérias for observado no meio, mas não há mudança de cor, o teste também deve ser considerado positivo, pois se houver crescimento, isso significa que as bactérias foram capazes de usar citrato como um Fonte de carbono, embora não haja mudança de pH na época (às vezes pode levar).

Se houver dúvida na interpretação da cor final, ela pode ser comparada com um tubo de citrato desoculado.

Preparação

Pesar 24,2 gr do meio desidratado para um litro de água. Misture e saia em aproximadamente 5 minutos. Termine de dissolver o aquecimento médio por 1 ou dois minutos, acenando com frequência.

Pode atendê -lo: qual é o nível macromolecular?

Sirva 4 ml em tubos de teste e autoclavar a 121 ° C por 15 minutos. Ao deixar a autoclave, inclinando -se com a ajuda de um apoio, para que o ágar seja solidificado na forma de um pico de flauta com pouco taco ou fundo e mais moldura.

O pH final do citrato médio é 6,9 (cor verde). Este meio é muito sensível à mudança de pH.

Um pH 6 ou menos, o meio se torna cor amarela. Esta cor não é observada no teste de bactérias.

E em pH 7,6 ou superior, o meio muda de azul da Prússia intensa.

Usar

O ágar citrato de Simmons é usado para identificar certos microorganismos, especialmente bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outros bacilos de glicose não -fermentadores.

Considerações finais

O meio citrato Simmons é um teste muito delicado, pois falsos positivos podem ser obtidos se alguns erros forem cometidos.

Os cuidados que devem ser tomados são os seguintes:

Inoculo

Um inóculo bacteriano muito grosso ou carregado não deve ser feito, porque pode causar uma cor amarela de cobre se desenvolver no lugar do semeado, sem afetar o resto do meio, mas pode fazer acreditar que existe um crescimento. Isso não significa positividade de prova. 

Da mesma forma, um inóculo espesso pode gerar um falso positivo, porque os compostos orgânicos pré -formados dentro das paredes celulares de bactérias morbundárias podem liberar carbono e nitrogênio suficientes para girar o indicador de pH.

Portanto, o ideal é semear usando a agulha em vez da alça de platina, para evitar o excesso de material.

Pode atendê -lo: cadeia alimentar da selva

Semeado

Por outro lado, quando a bateria de testes bioquímicos para a identificação do microrganismo em questão é semear, é importante que o teste de citrato seja o primeiro a inocular, a evitar o arrasto de proteínas ou carboidratos de outro meio.

Nesta circunstância, é possível obter um falso positivo, porque qualquer uma dessas substâncias introduzidas por erro será metabolizada e causará uma mudança de pH.

Outra maneira de evitar arrastar a substância é queimar a alça e fazer um novo inóculo entre um teste e outro.

Também deve ser tomado cuidado ao tocar na colônia para realizar o inóculo, pois deve ser evitado para arrastar parte do ágar da colheita a partir da qual as bactérias vêm, devido às explicadas acima explicadas.

Nesse sentido, Matsen, Sherris e Branson recomendam diluir o inóculo em solução fisiológica antes de inocular o teste de citrato para evitar a transferência de outras fontes de carbono.

Intensidade de cor

Deve -se levar em consideração que a intensidade da cor produzida quando o teste é positiva pode variar de acordo com a casa comercial.

Além disso, existem microorganismos que positivos em 24 horas, mas existem outras cepas que requerem 48 horas ou mais para produzir uma mudança de pH.

Referências

1. BBL Simmons Citrate Agar Slants. Bd recuperado.com.
2. Agar de citrato Simmons. Recuperado do britanialab.com.