Ágar de chocolate

Bactérias Yersinia pestis em uma placa de ágar de chocolate. Fonte: Departamento de Saúde e Serviços Humanos, Wikimedia Commons

O que é ágar de chocolate?

Ele Ágar de chocolate É um meio de cultura sólida, enriquecida, não seletiva e não diferencial. É usado principalmente para o isolamento de microorganismos exigentes do ponto de vista nutricional, embora qualquer tipo de bactéria possa crescer nele.

É por isso que sua utilidade aumenta especialmente em amostras de amostragem que normalmente são estéreis, como o CSF ​​e o líquido da articulação. Embora também esteja incluído na mídia escolhida para o plantio de amostras polimicrobianas, mas nesses casos é necessário adicionar antibióticos que inibem a flora concomitante.

Este meio tem uma cor marrom característica muito semelhante ao chocolate, daí o seu nome. A preparação é muito semelhante à do ágar do sangue, apenas neste caso o sangue deve ser aquecido para que os glóbulos vermelhos se quebrem.

Sua preparação, como o ágar de sangue, é muito delicada, porque é facilmente contaminável. Portanto, muitos laboratórios preferem adquirir este meio já preparado por casas comerciais que garantem sua qualidade.

Base

É composto por uma base de ágar rica em nutrientes e sangue aquecido. A hemólise dos glóbulos vermelhos fornece o fator médio X (Hemina) e o fator V (NAD), necessário para o crescimento de alguns microorganismos, como o gênero Haemophilus. Também é muito útil isolar Neisserias sp.

Como o ágar de sangue, diferentes mídias podem ser usadas como uma agência de base, dependendo da necessidade. Entre os meios de comunicação usados ​​estão o coração cerebro e a soja de esmagar, embora os mais recomendados sejam o Agar Columbia, Müeller Hinton, GC Agar e Thayer Martin Agar.

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Algumas variantes de ágar de chocolate incluem um suplemento enriquecido, disponível comercialmente, chamado Isovalex ou Polyvitex.

Esses suplementos contêm vitamina B₁₂, L-glutamina, adenina, cloridrato de guanina, ácido p-aminobenzóico, dinucleotídeo de adenina de nicotinamida (NAD), pirofosfato de tiamina, nitrato férrico, hidrato de tiamina, hidrocloredora de cisteína, lluglate-cistina e gluxina.

É importante destacar que o ágar de chocolate é mais enriquecido que o ágar no sangue, mas não permite padrões de hemólise.

Formulários

• Ágar de chocolate com ágar Columbia: Contém caseína e coração pancreáticos, carne digerida, péptica, cloreto de sódio, ágar, extrato de levedura e amido de milho. Além disso, é rico em vitaminas, minerais e aminoácidos essenciais. Esta base com sangue aquecido é ideal para isolar bactérias do gênero Neisseria. Por outro lado, se um suplemento for adicionado a Brucella, O microrganismo mencionado acima pode ser isolado. Os resultados são melhorados usando sangue de cavalo.
• Agar de chocolate com ágar base GC (para gonococos): Contém peptones, amido de milho, amortecedores monobásicos e dibásicos, cloreto de sódio e ágar. A maioria das apresentações de saída de chocolate preparada comercialmente vem com esta base e não contém sangue aquecido, mas uma mistura sintética de hemina e um suplemento químico de fatores de crescimento, vitaminas, minerais, aminoácidos, fator V e glicose.
• Agar de chocolate preparado com Müeller Hinton Agar: É usado para realizar o teste de suscetibilidade antimicrobiana de microorganismos exigentes, como Streptococcus pneumoniae, Usando 5% do sangue de RAM aquecido. Também serve para o isolamento primário de Neisseies e Haemophilus, mas no caso particular do isolamento de Haemophilus O uso de sangue de cavalo é preferido, por ser rico em fator X e V. Por outro lado, se a amostra a ser plantada vem de uma área não -esterileira, a adição de antibióticos é recomendada para inibir a flora normal da área. Exemplo: para amostras respiratórias onde suspeita a presença de bactérias de gênero Haemophilus A bacitracina é usada para inibir o crescimento de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus e Neisseies saprófitos. 
• Agar de chocolate com Thayer Martin Agar: É especial isolar Neisseria gonorrhoeae. Deve conter antibióticos para inibir a flora que o acompanha. O sangue de cordeiro é usado.

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Preparação

As indicações para a preparação do ágar base que serão usadas devem ser vistas. Geralmente, eles descrevem quanto você deve pesar para preparar um litro de meio de cultura. No laboratório, você pode preparar a quantidade exata necessária, que pode ser mais ou menos de um litro.

Cálculos

Uma regra de três é feita para calcular quanto você deve pesar para preparar o volume desejado. Exemplo:

Se, por 1 litro, for necessário pesar 40 gr e o laboratório exigir 800 ml, é dito:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

A fórmula será a seguinte:

X = 32 gr (quantidade apesar de 800 ml).

Pesar e dissolver

A quantidade necessária é pesada e colocada em uma felola com a água.

Ele aquece em fogo moderado e é misturado suavemente com movimentos rotativos até que o meio desidratado se dissolva completamente, deixando ferver por 1 minuto.

Esterilizar

O Fixola é introduzido na autoclave para esterilizar o meio a 121 ° C por 20 minutos.

Agregado sanguíneo

Ao sair da autoclave, é permitido permanecer até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 e 70 ° C para colocar o sangue e misturar até que o meio gire a cor marrom.

Se os suplementos forem adicionados, este é o momento de fazê -lo. Posteriormente, misture e sirva 20 ml a cada placa estéril de Petri.

Todo o procedimento deve ser realizado em um sino de fluxo laminar ou ao redor do isqueiro de Bunsen. Deixe ficar até que eles solidifiquem e salve de maneira invertida em uma geladeira.

Outra maneira de preparar o ágar de chocolate sem usar sangue

O meio base é preparado como descrito acima, a hemoglobina desidratada obtida comercialmente e esterilizada na autoclave é dissolvida na autoclave.

Pode servir você: Hemoolinfa

Ambas as soluções podem esfriar a 50 ° C, o suplemento é unido e adicionado. Misture em condições assépticas e depois sirva em placas estéreis de Petri.

Controle de qualidade

É importante que o sangue seja colocado à temperatura indicada, pois é o ideal para lisar os glóbulos vermelhos e, ao mesmo tempo.

Eles não devem estar bolhas na superfície do ágar. De cada lote de 100 placas, uma ou duas placas deve ser incubada no fogão a 37 ° C por 24 horas para verificar sua esterilidade.

Para melhores resultados, o ágar de chocolate deve ser usado logo após sua preparação.

Os controles de cepas bacterianas devem ser obtidas em laboratório para avaliar a eficácia do ambiente recém -preparado para o crescimento dos principais microorganismos exigentes de importância clínica.

Referências

1. Garcia, p., Paredes, f., Fernández del Barrio, M. Microbiologia Clínica Prática. Universidade de Cádiz. Serviço de Publicações da UCA.
2. Ágar de chocolate. Recuperado de.Wikipedia.org.