Características de coloração de hematoxilina-eosina, usos, técnicas

O Coloração de hematoxilina - eosina É uma técnica de coloração que usa a combinação de corantes de hematoxilina e eosina. Este par de corantes faz uma dupla perfeita, já que a hematoxilina atua como um corante básico e a eosina é um corante ácido.

A designação de corantes básicos ou ácidos não se refere ao pH que obtém em solução, mas fala da proporção que prevalece em termos de cargas aniônicas ou catiônicas que possuem ou pela localização do cromóforo.

Epitélio cilíndrico corado com hematoxilina - eosina (He) Fonte: Todd Straus e Vladimir Osipov [CC por 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/por/3.0)]

Nesse sentido, a hematoxilina é considerada um corante básico (catiônico) e, portanto, tem uma afinidade por estruturas ácidas, como o núcleo das células. Enquanto a eosina é um corante ácido (aniônico) tem uma afinidade por estruturas alcalinas ou básicas, como o citoplasma celular.

Por esse motivo, essa combinação de corantes é amplamente usada para manchar. Os núcleos são tingidos em azul escuro ou roxo e o citoplasma rosa.

A coloração de hematoxilina-eosina é uma das técnicas de coloração mais usadas na área de histologia e citologia, devido ao seu manuseio fácil e baixo custo. É usado para a visualização de células, fibras nervosas espessas e a presença de certos microorganismos de tecido, como: parasitas, fungos e bactérias, entre outros.

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Caracteristicas

Hematoxilina

Hematoxilina é um corante neutro. No entanto, o componente que fornece cores (cromóforo) está localizado no centro catiônico ou básico da molécula. Daí sua afinidade por estruturas ácidas. Sua fórmula química é C₁₆H₁₄QUALQUER₆ e seu nome científico 7.11b-di-hidroindeno [2,1-c] Chromeno-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Mantenha os centros das células principalmente, pois são muito ricos em ácidos nucleicos. Você também pode tingir inclusões citoplasmáticas de origem viral.

Para que a hematoxilina possa tingir deve estar em um estado oxidado e preso a um metal. Este último servirá para olhar para o tecido, ou seja, ele atuará como um mordente.

Quando a hematoxilina é oxidada, a hemateína é chamada. A oxidação é alcançada pela exposição ao oxigênio (envelhecimento) do reagente ou por substâncias que ajudam sua oxidação (oxidação química).

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Eosina

Eosina é um corante vermelho ou rosa. É insolúvel em água, embora exista uma versão hidrossolúvel. Geralmente, Eosina prepara a dissolução de álcool (etanol às 95).

Citoplasmos de manchas, fibras musculares, organelas citoplasmáticas e colágeno, mas não tingem centros celulares. Isso ocorre porque é carregado negativamente, portanto, tem uma afinidade por estruturas carregadas positivamente.

Existem dois tipos de eosina o "y" e o "b". Eosina "Y" é conhecida como Eosina amarela. Seu nome científico é fluoresceína tetrabrome e sua fórmula química é c_vinteH₈Br₄QUALQUER₅.

Por outro lado, Eosin "B" às vezes é chamado de eritrosina azulosa B. Seu nome científico é dibromodinitro -fluoresceína e a fórmula é c_vinteH₈Br₂N₂QUALQUER₉. Ambos são muito semelhantes e a diferença de usar um ou outro não é realmente perceptível. No entanto, o mais popular é Eosina "y".

A eosina tem a propriedade de distinguir entre uma célula viva e morta, porque só é capaz de atravessar a membrana para tingir seu citoplasma quando as células estão mortas, deixando o citoplasma da célula incolor se permanecer vivo.

Formulários

Coloração de fibra nervosa

Com hematoxilina-eosina, as fibras nervosas espessas podem ser tingidas e identificadas. No entanto, não é útil colorir as fibras nervosas finas, porque, para visualizar a última, é necessária uma coloração de prata.

Tiniões de cortes histológicos da pele

Nas manchas da camada da córnea da pele, o corante que age é eosina, pois neste nível as células não têm um núcleo.

Na camada de granulose da pele, manchas de hematoxilina fortemente para os grânulos de queratohialina que são encontrados dentro das células granulares. Pelo contrário, o estrato espinhoso da pele é fracamente tingido com hematoxilina, enquanto a camada basal ou germe se estiver bastante manchada.

A eosina mancha o citoplasma de todas as células e a intensidade da cor pode variar entre uma camada e outra.

Coloração de coloração com hematoxilina-eosina

Gómez e colaboradores, em 2005, eles demonstraram que a coloração com hematoxilina -eosina foi mais eficaz na identificação de casos de amibíase por Entamoeba histolytica e Entamoeba díspar que o novo método de visualização (solução salina e Lugol) em pacientes com doença diarréica aguda.

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Também foi demonstrado que tem grande sensibilidade para detectar eritrofagocitose (amebas que possuem eritrócitos fagócitos).

Coloração de cortes histológicos para o diagnóstico de infecção

Walwyn e colaboradores, em 2004 eles propuseram o uso de manchas histológicas para detectar microorganismos causando infecções.

Usando a coloração de hematoxilina-eosina conseguiu visualizar infecções causadas por Clostridium, Actinomyces, Spirile ou Candida. Eles também conseguiram observar a presença do parasita Sarcoptes Escabiei Em cortes de couro e inclusões virais por citomegalovírus e herpes em cortes de diferentes tecidos.

Técnicas

Para amostras histológicas

A coloração de cortes histológicos passa por uma série de etapas. O primeiro é obter o corte histológico. Isso deve ser parafinado e depois obter os cortes (ultrafinos) com um microtomo. A técnica consiste nas seguintes etapas:

1 Malmação de excesso de parafina: Xilol ou hemo -d podem ser usados, submergir por 3-5 minutos.

2-Relief da amostra: Isso é conseguido imersão da amostra em diferentes concentrações de álcoois (etanol) em ordem decrescente (100 °, 90 °, 70 °). Em todos os casos por 7 minutos.

3-eliminação do excesso de álcool: Para fazer isso, está imerso em água por 7 minutos.

Coleta de 4 com hematoxilina: A amostra é submersa de 6 a 10 minutos em uma bandeja que contém hematoxilina. O tempo de exposição depende do tamanho e da espessura da amostra.

5-eliminação do excesso de hematoxilina: A água foi lavada por 5 minutos e, em seguida, uma passagem rápida (10-20 segundos) é feita por álcool ácido. Posteriormente lavado com água novamente por 5 minutos. Em seguida, imerso em etanol a 96 ° por 1 minuto.

6-Coloring com Eosina: Para fazer isso, a amostra por 5 minutos na bandeja Eosina está imersa.

7-Dishydration da amostra: Para fazer isso, as bandejas de álcool (etanol) são passadas novamente, mas desta vez em ordem crescente. (70 °, 90 °, 100 °). (Por 5 segundos, 5 segundos, 1 minuto, respectivamente).

Esclarecimento de 8 amostras: Isso é exposto ao xilol por 5 a 10 minutos e seca para selar permanentemente com o bálsamo do Canadá ou outro material semelhante.

Para amostras de fezes em busca de E. Histolytica

Em uma lamela, estendeu -se com as fezes do paciente e é fixado com 80% de álcool por 5 minutos. A folha é submersa em hematoxilina por 5 minutos e é imediatamente lavada com água.

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Posteriormente, está rapidamente imerso em álcool ácido e depois em água amoniacal. Lave com água. É colorido por 5 minutos em Eosina. A amostra é desidratada conforme explicado na técnica anterior e finalmente esclarecido com Xileno.

Preparação do reagente

- Hematoxilina

Em um litro de água destilada, dissolva 50 gramas de potássio ou sulfato de alumínio de amônio. Quando você estiver completamente dissolvido, adicione 1 grama de hematoxilina cristalizada. Ao se dissolver em sua totalidade, 1 gr de ácido cítrico é adicionado junto com 50 gr de hidrato de cloral e 0,2 gr de iodino de sódio.

A mistura é fervida por 5 minutos, então é permitido esfriar e filtrado para eliminar as partículas sólidas que permaneceram. O reagente assim preparado pode ser usado imediatamente.

- Eosina

Pode ser preparado com base alcoólica ou aquosa.

Eosina alcoólica

Em 100 ml de etanol a 95 ° dissolve 0,5 gramas de eosina "y". Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.

2% de eosina aquosa

Em 1250 ml de água destilada, dissolva 25 gramas de eosina “y” hidrossolúvel. Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.

Álcool ácido

Medir 0,5 ml de ácido clorídrico concentrado e completar 100 ml com álcool absoluto.

Água amoniacal

Medida 0.5 ml de amônia concentrada e 100 ml completos com água destilada.

Referências

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2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela ou.
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4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Utilidade de técnicas histológicas para o diagnóstico de infecção em peças anatômicas. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Disponível em: Scielo.SLD
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