Fundação Histoquímica, Processamento, Coloração

O Histoquímica É uma ferramenta muito útil no estudo da morfologia de vários tecidos biológicos (vegetais e animais), devido ao seu princípio de reação de componentes de tecidos, como carboidratos, lipídios e proteínas, entre outros, com substâncias coloridas colorindo.

Esta ferramenta valiosa permite não apenas identificar a composição e a estrutura dos tecidos e células, mas também as várias reações que ocorrem nestes. Da mesma forma, possíveis danos nos tecidos, causados ​​pela presença de microorganismos ou outras patologias.

Coloração histoquímica. Vírus do Nilo, bactérias gramas positivas e gram -negativas (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Fonte: Pixinio.com/wikipedia.Org/Nephron [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/3.0)]/CDC/DR. George p. Kubica [domínio público]

A histoquímica, desde os últimos séculos, forneceu contribuições importantes, como a demonstração da existência da barreira das células sanguíneas por Paul Ehrlich. Isso foi possível graças ao fato de que o cérebro do animal de experimentação usado por Ehrlich não tingiu com anilina, que é um corante básico.

Isso levou ao uso de vários corantes, como metileno e azul de indofenol, a fim de tingir os diferentes tipos de células. Esse achado deu origem à classificação de células em acidofílico, basofílico e neutrófilos, de acordo com sua coloração específica.

Estudos recentes aplicaram essa técnica para demonstrar a presença de vários compostos, incluindo fenóis, bem como carboidratos e lipídios não estruturais nas espécies da espécie Litsea glaucescens, Mais conhecido como Laurel. Sendo estes, tanto na folha quanto na madeira.

Da mesma forma, Colares et al, 2016, identificaram a planta de interesse medicinal Tarenaya Hassleriana, através de técnicas histoquímicas. Nesta espécie, a presença de amido, Mirosina, bem como compostos fenólicos e lipofílicos, foi evidenciada.

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Base

A histoquímica baseia -se na coloração de estruturas ou moléculas celulares presentes nos tecidos, graças à sua afinidade com corantes específicos. A reação de cor dessas estruturas ou moléculas em seu formato original é posteriormente visualizada no microscópio óptico ou microscópio eletrônico.

A especificidade da coloração é devido à presença de grupos de aceitação de íons presentes nas células ou moléculas de tecido.

Finalmente, o objetivo das reações histoquímicas é ser capaz de evidência através da coloração. Das maiores estruturas biológicas ao menor dos tecidos e células. Isso pode ser alcançado graças ao fato de que os corantes reagem quimicamente com as moléculas dos tecidos, células ou organelas.

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Acusação

A reação histoquímica pode levar a etapas anteriores à realização da técnica, como fixação, inclusão e corte do tecido. Portanto, deve -se levar em consideração que, nessas etapas, você pode danificar a estrutura que deseja identificar, lançando resultados falsos negativos, mesmo que esteja presente.

Apesar disso, a fixação anterior do tecido realizada corretamente é importante, pois ela impede a autólise ou a destruição celular. Por esta.

A inclusão do tecido é feita para que mantenha sua firmeza ao cortar e, assim, impedir que ele seja deformado. Finalmente, o corte é feito com um microtome para o estudo de amostras por microscopia óptica.

Além disso, antes de prosseguir para realizar coloração histoquímica, é recomendável incorporar controles positivos externos ou internos em cada lote de testes. Bem como o uso de corantes específicos para estruturas para estudar.

Coloração histoquímica

Desde o surgimento de técnicas histoquímicas até o presente, uma ampla gama de corantes foi usada, entre as quais o uso mais frequente, como: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen e Gram.

Da mesma forma, outros corantes têm sido usados ​​com menos frequência, como tinta chinesa, coloração tricromática de Orcein ou Masson, entre outros.

O ácido periádico de Schiff (PAS)

Com esta coloração, você pode ver moléculas com alto teor de carboidratos, como: glicogênio e mucina. No entanto, também é útil para a identificação de microorganismos, como fungos e parasitas. Além de certas estruturas (membrana basal) na pele e em outros tecidos.

A base desta coloração é que a coloração oxida as ligações de carbono presentes entre dois grupos de hidroxilos próximos. Isso produz o lançamento do grupo aldeído, e isso é detectado pelo reagente Schiff, jogando uma cor roxa.

O reagente Schiff é composto de fucsina básica, metabisulfito de sódio e ácido clorídrico, sendo esses componentes responsáveis ​​pela coloração roxa, quando os grupos de aldeído estão presentes. Caso contrário, um ácido incolor é gerado.

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A intensidade da coloração dependerá da quantidade de grupos hidroxilos presentes nos monossacarídeos. Por exemplo, em fungos, membranas basais, mucinas e glicogênio a cor pode ir de vermelho para roxo, enquanto os núcleos são tingidos de azul.

Grocott

É uma das manchas que apresenta a maior sensibilidade na identificação de fungos em tecidos incluídos na parafina. Isso permite a identificação das várias estruturas fúngicas: hifas, esporos, endosporos, entre outros. Portanto, é considerado uma mancha de rotina para o diagnóstico de micose.

Especialmente é usado no diagnóstico de micose pulmonar, como pneumociose e aspergilose causada por alguns gêneros fungos Pneumocystis e Aspergillus, respectivamente.

Esta solução contém nitrato de prata e ácido crômico, sendo este último um fixador e corante. A fundação é que esse ácido produz a oxidação dos hidroxilos em aldeídos, pelos mucopolys presentes nas estruturas escolhidas, por exemplo, na parede celular dos fungos.

Finalmente, a prata presente na solução é oxidada pelos aldeídos, causando uma coloração negra, que é chamada de reação argentafin. Você também pode usar corantes de contraste, como verde claro e, portanto, estruturas fúngicas em preto com um fundo verde claro serão observadas.

Ziehl-Neelsen

Esta coloração é baseada na presença de resistência ao álcool ácido, parcial ou total, em alguns microorganismos, como os gêneros Nocardia, Legionella e Mycobacterium.

O uso desta coloração é recomendado, porque a parede celular dos microorganismos citados anteriormente, contém lipídios complexos que impedem a penetração da coloração. Especialmente em amostras do trato respiratório.

Corantes fortes como fenicada fucsin (corante básico) são usados ​​nele e o calor é aplicado para que o microorganismo possa reter o corante e não descolorir com ácidos e álcoois. Finalmente, uma solução azul de metileno é aplicada para colorir as estruturas que foram descoloridas.

A presença de resistência ao álcool ácido é observada em estruturas vermelhas, enquanto as estruturas que não resistem à descoloração são tingidas de azul.

Grama e tinta chinesa

Gram é uma coloração muito útil no diagnóstico de infecções bacterianas e fúngicas, entre outros. Essa coloração permite diferenciar entre os microorganismos grama positivos do grama negativo, evidenciando claramente as diferenças que existem na composição da parede celular.

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Enquanto a tinta chinesa é uma coloração usada para contrastar as estruturas que contêm polissacarídeos (cápsula). Isso ocorre porque um anel se forma no ambiente, sendo possível no Cryptococcus neoformans.

Orcein

Com esta coloração, fibras elásticas e cromossomos de várias células são coloridas, permitindo a avaliação do processo de maturação deste último. Por esse motivo, tem sido muito útil em estudos citogenéticos.

Isso é baseado na coleção do corante pela carga negativa de moléculas como o DNA, presente nos centros da grande variedade de células. Então estes são tingidos de azul a violeta escuro.

Tricômico de Masson

Esta coloração é usada na identificação de alguns microorganismos ou materiais que contêm pigmentos melláticos. Este é o caso da micose, causada por fungos dematíacos, ugohifomicose e em grão preto eumicetoma.

Considerações finais

Nos últimos anos, houve muitos avanços na criação de novas técnicas de diagnóstico, onde a histoquímica está envolvida, mas vinculada a outras fundações ou princípios. Essas técnicas buscam um propósito diferente, como é o caso da imuno -histoquímica ou enzimo -histoquímica.

Referências

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