Fundação Orceinna e Preparação

O Orcein É um corante roxo natural, extraído de vários líquenes, como: Orchilla ou Urchilla, líquen frutífero, Rocella Tincoria e Parella Lecanora majoritariamente. O Rocella Tincoria É encontrado no continente africano e americano, embora possa ser substituído por outras espécies localizadas na Europa.

Este corante tem sido amplamente utilizado em estudos citogenéticos desde os tempos antigos. Nesse sentido, a preparação da Orcein que inclui ácido acético foi introduzida por Lacourt em 1941, por isso foi inicialmente chamada de técnica de Lacourt.

Estrutura química da solução de orqueína e orqueína. Fonte: Wikipedia.Org/ oguenther em.Wikipedia (dr. Guenther) [domínio público]

Da mesma forma, devido à sua simplicidade e baixo custo, ele foi usado para a fabricação de litmo (coloração extraída de líquenes) e em estudos histológicos (coloração celular e tecidual).

Vários estudos usaram essa coloração combinada com outros produtos químicos, como picrocarmina amoniacal e ácido acético, para tingir fibras e cromossomos elásticos, respectivamente. Atualmente, a Orceína permanece usada em estudos citogenéticos de animais e vegetais.

Recentemente, Silva et al. 2017 usou com sucesso esta coloração para observar as várias mudanças que ocorrem nas fibras elásticas da pele do polegar em adultos mais velhos chilenos. Este estudo revelou como as fibras do polegar são alteradas com o envelhecimento.

Nesse sentido, as fibras elásticas foram observadas da cor do negro marrom em indivíduos com mais de 80 anos; Enquanto estão no mais novo (de 60 anos), eles podem ser vistos com marrom avermelhado. Citoplasma e outras estruturas celulares se tornam verdes amareladas.

Isso permitiu corroborar a presença e o estado das fibras elásticas, em termos de disposição, quantidade e integridade. Por outro lado, também foi apontado que a Orcein é útil para identificar aneurismas e diagnosticar arterite, entre outras condições.

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Base

A Orcein faz parte do grupo de oxazina de corantes e a coloração é baseada em sua afinidade pelo DNA. O corante se junta à carga negativa desta molécula, representada pelo grupo fosfato. É por isso que os cromossomos são tingidos.

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No entanto, o restante das estruturas celulares toma outra cor. Especificamente, no caso de fibras elásticas, elas são coloridas de uma cor marrom avermelhada, núcleos celulares de um azul azul azul, enquanto o colágeno não é tingido.

Portanto, a orceína é usada para tingir cromatina e diferenciar o sexo em algumas moscas de moscas. Da mesma forma, núcleos e algumas inclusões hepáticas produzidas pelos antígenos da hepatite B podem ser coloridos.

As soluções Orcein têm funções específicas em manchas. Orcein A, tem a função de suavizar as membranas celulares, causando sua morte e paralisando o processo de divisão do mesmo. Enquanto isso, a Orcein B é responsável por concluir a cor por sua adesão aos cromossomos.

Preparação

1% de solução de aceita orceina

Para preparar uma solução de solução de 1%.

Então, é constantemente misturado para homogeneizar a solução, para deixar ficar em pé até esfriar. Finalmente, 4ºC é armazenado em potes escuros. Esta preparação foi usada por Flores 2012, para a observação das fases de maturação dos oócitos de vaca.

Nesse caso, por exemplo, a solução de aceita-orceína no tecido previamente fixada no ácido acético por 24 horas é colocada. Este processo de coloração é realizado por 30 minutos e, posteriormente, o tecido é submetido a descoloração.

Da mesma forma, isso pode ser usado na identificação de organelas em tecidos multicelulares. Nesse caso, uma mancha da mucosa oral com uma gota da solução de aceto-orceína é tingida, a cobertura é colocada na folha e imediatamente o núcleo celular pode ser observado com suas subestruturas.

Solução de proporção de lacto Orqueína 1%

Além disso, a Orceína pode ser preparada com outros produtos químicos, como ácido lático e ácido propiônico. Para fazer isso, um grama de orceína se dissolve em um ambiente pré -ambiental à temperatura ambiente de 23 ml de ácido lático e 23 ml de ácido propiônico; completando o volume com água destilada até 100 ml.

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Com esta solução lactopropiônica, orquena, você pode ver as diferentes fases da divisão meiótica das células vegetais. Nesse caso, a amostra preferida e hidrolisada preferida é colocada por 15 minutos na solução de orceína lactopropiônica e, em seguida, estende o tecido em fatias de slides.

No estudo de 2016 do Duke sobre cromossomos poli -tênicos, ele usou uma preparação de 2 gramas de orqueína diluída em ácido acético e 85%de ácido lático, diluindo com uma solução de ácido acético a 65%. Finalmente, ele observou os cromossomos nas glândulas salivares do Drosophila melanogaster.

Orcein a e orcein b

É importante ter em mente que, dependendo da amostra e do que você deseja avaliar, a solução orqueína adequada é preparada. Assim, por exemplo, a solução de orceína A é adicionada a 1n ácido clorídrico para a observação de células de divisão.

Enquanto a solução da Orcein B, acaba se dissolvendo em 45% de ácido acético. Esta técnica constitui um método abreviado de coloração e, em geral, é usado como um complemento para colorir estruturas cromossômicas.

Considerações finais

A partir dos últimos séculos, em países do continente americano como Argentina, você pode obter líquenes como: LECANORA, Parmelia e Umbilicária, que são ótimas fontes de Orcein. Também áreas européias como as Ilhas Canárias, eram grandes produtores da orquila na época.

Isso foi exportado para outras cidades desse mesmo continente, como Gênova e países como a Inglaterra, enquanto a Holanda. Portanto, este líquen foi posteriormente reduzido até que estivesse prestes a extinguir.

Isso levou à orquila foi substituído por outras plantas com propriedades de tingimento. No entanto, o surgimento de corantes sintéticos contribuiu para a conclusão desta fonte de orceína de licença.

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Isso foi possível graças a Cocq, que em 1812 descreveu a síntese da orcura, sabendo que isso é sintetizado por um composto fenólico chamado orcinol. No entanto, apesar disso, a Orqueína Natural ainda é a favorita.

Isso pode ser devido ao fato de que o orcinol é um composto de cheiro muito forte e cuja exposição prolongada pode levar a riscos à saúde, como a perda da capacidade de detectar odores. Esses danos à hipófise podem passar de temporário para permanente quanto maior a exposição.

Referências

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