Características de Safranina, Uso, Técnicas, Toxicidade

O Safranine É um corante meriquinóide, nomeado por possuir em sua estrutura química de 2 anéis de benzeno e 2 anéis quinóides, sendo este último os que fornecem a cor vermelha.

Também é chamado de safranina ou dimetil vermelho básico em sua forma de resumo, uma vez que seu nome científico é 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenil-fenile_vinteH₁₉N₄ Cl.

Estrutura química de safranina indicando os anéis benzeno e quinóide/ solução aquosa de safranina. Fonte: Neurotoger [Public Domain] Editado por MSC. Marielsa Gil/Lhchem [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/3.0)]

Existe uma variante chamada trimethyle-safranina, mas não há diferença significativa entre as duas substâncias.

A safranina é um corante monocromático e, de acordo com as características da fórmula química, é uma substância de carga positiva. Portanto, tem afinidade com estruturas carregadas negativamente. Essas estruturas serão tingidas em vermelho.

Esta propriedade fornece aplicabilidade em muitas técnicas histológicas para tingir várias estruturas celulares, tanto de organismos eucarióticos quanto de procarióticos.

A safranina é usada como um corante de contraste em técnicas de uso de rotina importantes e bem conhecidas em bacteriologia. Essas técnicas são: manchas de Gram-Hucker, coloração com Schaeffer Fulton para esporos ou coloração de cápsulas bacterianas, entre outros.

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Caracteristicas

A cor do açafrão (tempero obtido dos estigmas da flor de Açafrão sative) foi a inspiração para colocar o nome deste corante. Do termo açafrão vem o nome de safranina. Isso se deve à grande semelhança entre a cor do açafrão e a coloração que este corante fornece.

Safranine é alcançado como cristais ou pó, ambas as apresentações são solúveis na água. Dye de safranina não tem cheiro. Estruturas vermelhas da mancha. Estruturas que atraem o corante safranina são chamadas de safranófilos.

Estruturalmente, a safranina é complexa, possui dois anel benzeno nas pontas e no centro os dois anéis quinóides estão localizados onde o cátion n está localizado⁺. O centro da estrutura é o sistema responsável por fornecer cores. Por essa característica, este corante é classificado na categoria II.

Usar

Safranine é usado para tingir várias estruturas. Especialmente destaca as células de Kulchitsky presentes no trato gastrointestinal, também chamadas de células de enterocromofinas.

É capaz de tingir microorganismos pertencentes à família Rickettsiaceae. Da mesma forma, é usado em várias técnicas, como o método de Koster, um modificado usado para a coloração de bactérias de gênero Brucella.

Por outro. Em ambas as técnicas, a safranina funciona como um corante de contraste.

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No primeiro. No segundo, as bactérias gram -negativas perdem a cor do vidro violeta na etapa de descoloração, portanto a safranina é quem manche as bactérias gram -negativas do vermelho.

Além disso, a safranina é usada em bacteriologia para preparar o ágar Brucella com uma diluição de safranina de 1: 5000. Este meio serve para diferenciar a espécie Brucella Suis do resto da espécie. Brucella melitensis e Brucella abortus crescer neste meio, mas B. suis É inibido.

No campo agroindustrial, a safranina foi usada a 2,25% e diluída 1:10 para tingir amostras de haste da planta de cana -de -açúcar.

Esta planta é comumente afetada por bactérias Leifsonia xyli Subs. Xyli, que danifica o xilema da planta. As hastes tingidas são avaliadas para determinar a função dos vasos do xilema.

Técnicas na área de bacteriologia

Coloração de Castañeda para mancha RIckettsias

Um esfregaço de sangue ou tecido é colocado em uma solução tampão (amortecimento de fosfato pH 7,6). É permitido secar espontaneamente e depois coberto com azul de metileno por 3 minutos e contratado com safranina. Rickettsias cor azul, contrastando com o fundo vermelho.

Coloração de koster modificada para Brucella

Um mancha é realizado e flamea no isqueiro para fixação. Posteriormente, é coberto com uma mistura de 2 partes de safranina aquosa saturada com 3 partes de solução KOH 1 mol/L, por 1 minuto. Uma lavagem com água destilada é realizada e 1% de fenado de metileno azul.

Se a amostra contiver bactérias de gênero Brucella Estes serão observados laranja em um fundo azul.

Cápsulas bacterianas manchas

Uma mistura de suspensão bacteriana com tinta chinesa é realizada e a safranina é adicionada. Um halo avermelhado será observado no microscópio ao redor de cada cápsula bacteriana com um fundo preto.

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Coloração de esporos Schaeffer Fulton

Um estendido com a suspensão bacteriano é realizado. Então é fixo para aquecer. É coberto com 5%de verde malaquita, frequentemente flamejando até a emissão de vapores. O processo é repetido por 6 a 10 minutos. Finalmente, é lavado com água e contratado com safranina a 0,5% por 30 segundos. Os bacilos são tingidos em vermelho e os esporos verdes.

Coloração de Gram-Hucker

Um estendido com suspensão bacteriano é realizado e fixado para aquecer. A lâmina com vidro violeta por 1 minuto é coberto. Em seguida, Lugol é colocado como uma solução mordente por 1 minuto. Posteriormente, é descolorido com álcool de acetona e finalmente contratado com safranina por 30 segundos.

Bactérias gram -positivas são tingidas de violeta azul e bactérias gram -negativas de vermelho.

Alguns laboratórios pararam de usar a técnica Gram-Hucker para adotar a técnica de Gram-Kopeloff modificada. Neste último, Safranine é substituído por Fuchsin básico. Isso ocorre porque safranine mancham fracamente espécies de gêneros Legionella, Campylobacter e Brucella.

Técnicas na área de histologia

Coloração de células Kulchitsky (enterocromofinas)

Os cortes de tecido do trato gastrointestinal com cloreto de prata são tingidos. Em seguida, é descolorido com tiossulfato de sódio e finalmente contratado com safranina.

As células Kulchitsky são distinguidas porque são apresentadas com grânulos marrons enegrecidos.

Coloração para detecção de osteoartrite

Safranina porque tem uma carga positiva, grupos carboxi e sulfato de glicosaminoglicanos se liga muito bem. Isso faz parte dos proteoglicanos que constituem cartilagem articular. Nesse sentido, ao tingir safranina ou, pode -se identificar se há ou não uma perda de cartilagem.

A perda de tecido cartilaginosa pode ser medida através da escala de Mankin ou também chamada de escala de osteoartrite.

A técnica é então explicada: o corte histológico é imerso em uma bandeja com a solução de hematoxilina férrica de Weigert, depois é passada por álcool ácido e lavada com água.

Continue o processo de coloração imergindo a folha em verde rápido, lavar com ácido acético e agora submerge em safranina ou. Para terminar o processo, ele é desidratado usando álcoois em diferentes concentrações em ordem crescente. A última etapa requer Xileno ou Xilol para a amostra esclarecer.

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Os lençóis estão condicionados com o bálsamo do Canadá ou similares a serem observados em um microscópio. 

Com esta técnica, os núcleos são tingidos de preto, o osso verde e a cartilagem onde os proteoglicanos vermelhos são encontrados.

Tincion para a identificação de macroalgas

Pérez et al em 2003 propuseram uma técnica simples e econômica para tingir as macroalgas. As amostras são preparadas em cortes histológicos com parafina. Os cortes são definidos com 1% de glicerina, deixando -se completamente secos. Em seguida, é colocado em xylol para eliminar parafina.

O corte é reidratado, fazendo -o passar por uma série de bandejas que contêm etanol em diferentes graus de concentração (ordem descendente), por 2 min em cada.

Posteriormente, é tingido por 5 minutos com uma mistura de 3: 1 de 1% de safranina com 1% de toluidina azul, ambos preparados com 50% de etanol. A mistura é adicionada três gotas de ácido picrico que atuam como um mordente.

Então fica desidratado novamente pelas bandejas de álcool, mas desta vez ascendente. Finalmente, é esclarecido com Xilol e a amostra é preparada com o bálsamo do Canadá para ser observado.

Toxicidade

Felizmente, Safranine é um corante que não representa um perigo para aqueles que o manipulam. É um corante inócuo, não é carcinogênico e também não é inflamável.

Em contato direto com a pele ou mucosas, pode causar uma leve vermelhidão da área, sem grandes complicações. Para isso, é recomendável lavar a área afetada com muita água.

Referências

1. Garcia h. Corante safranina ou. Técnica de saúde, 2012; 1 (2): 83-85. Disponível em: Medigraphic.com
2. Gil m. Coloração de grama: fundação, materiais, técnica e usos. 2019. Disponível em: Lofede.com
3. Gil m. Coloração de esporos: fundação, técnicas e usos. 2019. Disponível em: Lofede.com
4. Safranine." Wikipedia, enciclopédia livre. 7 de março de 2017, 10:39 UTC. Atrás de 2019, 20:49 é.Wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Técnica de coloração útil na interpretação anatômica de Tenuifrons da gracilíase e Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Ato de bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponível em: Scielo.org.
6. Igreja Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Proporção da funcionalidade dos vasos do xilema e a presença de Leifsonia xyli subp. Xyli. Rev. Proteção Veg. 2007; 22 (1): 65-65. Disponível em: Scielo.SLD