Caldo de uréia o que é, fundamento, preparação, usa

Ele Caldo de uréia É um meio de cultura líquido, usado para demonstrar a presença de enzima UreASA em certos microorganismos. UreASA é uma enzima microbiana que ocorre de maneira constitutiva, ou seja, é sintetizada independentemente ou não por ser o substrato em que age.

A função da UreASA está relacionada à decomposição de compostos orgânicos. Nem todos os microorganismos são capazes de sintetizar essa enzima; portanto, sua determinação no laboratório permite identificar certas cepas bacterianas e até diferenciar entre espécies do mesmo sexo.

Existem dois tipos de teste de uréia: Stuart e Christensen. Eles diferem em sua composição e sensibilidade. O primeiro é especial para mostrar uma grande quantidade de ureasa produzida por espécies do gênero de proteínas.

O segundo é mais sensível e pode detectar pequenas quantidades de UreASA ultimamente por outros gêneros bacterianos, como Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter e MyCobacterium.

O caldo de uréia de Stuart é composto de uréia, cloreto de sódio, fosfato de Dipotássio.

Enquanto o caldo ou a urra de Christensen são compostos de peptonas, cloreto de sódio, fosfato monoposico, glicose, uréia, vermelho fenol, água destilada e intestino de ágar. O último somente se for o meio sólido.

Base

A enzima UreASA hidrolisa a uréia para formar anidrido carbônico, água e duas moléculas de amônia. Esses compostos reagem para formar o produto final chamado amônio carbonato.

Uréia de stuart caldo

O caldo de uréia de Stuart é mais tamponado com um pH de 6,8. Portanto, o microorganismo deve ser capaz de formar grandes quantidades de amônio para girar o vermelho do fenol. O pH deve subir acima de 8.

Portanto, o caldo de uréia de Stuart é seletivo para as espécies de proteus, fornecendo resultados positivos em 24 a 48 horas de incubação e não é eficaz para bactérias que produzem poucas quantidades de ureASA ou que lentamente hidrolisam a uréia.

Isso ocorre porque as espécies proteus são capazes de usar a uréia como fonte de nitrogênio. Por outro lado, outras bactérias produtoras de UreASA precisam de uma fonte adicional.

No entanto, Pérez et al. (2002) determinaram que o caldo de uréia de Stuart era tão eficiente quanto o ágar da uréia de Christensen, para determinar a uréia em cepas de levedura da sincera.

Os autores do estudo afirmam ter alcançado 100% de coincidência com a mídia (Stuart e Christensen) incubando por 24 e 48 horas; Estabelecendo a exceção de que as cepas que conseguiram transformar a mídia para uma forte cor rosa-fucsia foram positivas como positivas.

Esse explicativo é necessário, já que Lodder (1970) disse que quase todas as leveduras conseguem colocar o painel da uréia de Christensen Urea para pálido Rosado. Isso ocorre porque eles podem hidrolisar a uréia em quantidades mínimas e a formação de aminas por descarboxilação oxidativa de aminoácidos de superfície. Isso não deve ser interpretado como positivo.

Caldo ou ágar de uréia de Christensen

O caldo ou ágar de uréia de Christensen é menos tamponado, sendo capaz de detectar pequenas quantidades de amônio. Além disso, este meio é enriquecido com peptonas e glicose. Esses compostos fazem com que outros microorganismos produtores de ureasa que não crescem no caldo Stuart desenvolvem.

Da mesma forma, o teste de uréia de Christensen oferece resultados mais rápidos, especialmente para Proteus, sendo capaz de dar fortemente positivo em apenas 30 minutos como um tempo mínimo e até 6 horas como um tempo máximo.

O restante dos microorganismos produtores da UREASA consegue virar a cor do ambiente um pouco após 6 horas e fortemente após 24, 48, 72 horas ou mais, e até algumas linhagens podem dar reações fracas após 5 ou 6 dias.

Interpretação de ambas as mídias (Stuart e Christensen)

O meio é originalmente amarelo-laranja e uma reação positiva transformará a cor do meio para o rosa-fucsia. A intensidade da cor é diretamente proporcional à quantidade de amônio produzido.

Uma reação negativa deixará a cor original, exceto as leveduras, que podem dar um rosa pálido com o meio de uréia de Christensen.

Preparação

Uréia de stuart caldo

Pesar os gramas necessários de acordo com as indicações da casa comercial. Dissolva -se em água destilada preferencialmente estéril.  Não use calor para se dissolver, porque a uréia é sensível ao calor.

Para esterilizar o método de filtração da membrana é usado. Para isso, um filtro Millipor é usado com poros de 0,45 µ de diâmetro. Não use Autoclave. Depois que a solução é filtrada, ela é distribuída em tubos estéreis. Para obter resultados confiáveis, entre 1,5 ml deve ser transferido como um valor mínimo a 3 ml como uma quantidade máxima por tubo.

Mantenha na geladeira e temperamento antes de usar.

Se o método de filtração não estiver disponível, o meio deverá ser usado imediatamente para obter resultados confiáveis.

Outra maneira de preparar o caldo de uréia de Stuart é a seguinte:

Algumas casas comerciais vendem o meio base para o teste de uréia, sem incluir uréia.

A quantidade indicada pela casa comercial está pesando. Dissolve -se em água destilada e esterilizada na autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Vamos ficar um pouco e quando o meio estiver quente 100 ml de uma solução de uréia preparada a 20% e a filtragem por filtração é adicionada.

É distribuído em tubos estéreis, como descrito acima.

Caldo ou ágar de uréia de Christensen

-Preparação da solução de uréia

Pese 29 gr de uréia desidratada e dissolva em 100 ml de água destilada. Use o método de filtração para esterilizar. Não é autoclavado.

-Agar da base de uréia

Dissolva 24 gr de base desidratada em 950 ml de água destilada. Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe permanecer até atingir uma temperatura de 50 ° C e adicione a uréia anteriormente preparada de maneira asséptica.

Despeje 4 a 5 ml em tubos estéreis e incline até que eles solidifiquem. Um longo pico de flauta deve ser.

Este meio também pode ser preparado em forma de líquido.

Formulários

O teste de uréia é extremamente eficaz para distinguir o gênero proteus de outros gêneros da família Enterobacteriaceae, dada a rápida reação que o proteus fornece.

Se a composição de Christensen for usada, o teste ajuda a diferenciar entre espécies do mesmo gênero. Por exemplo, S. Haemolyticus e S. Warneri sSOBRE Staphylococcus Coagulase negativa e beta -hemolítica, Mas eles diferem no que S. Haemolyticus É negativo e S. Warneri É uréia positiva.

Por outro lado, McNulty usou com sucesso 2% de caldo de uréia de Christensen para estudar a presença de Helicobacter pylori Em amostras de biópsia retiradas da mucosa gástrica (região antral).

A presença de H. pylori É evidenciado com um teste de uréia positivo. A duração para observar os resultados é diretamente proporcional à quantidade de microorganismos presentes.

Como pode ser visto, é um método simples para o diagnóstico de Helicobacter pylori Em biópsias gástricas.

Finalmente, este teste também é útil para diferenciar espécies dos gêneros Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus e Mycobacteria.

Teste de uréia semeado

Os dois métodos requerem um forte inóculo microbiano para otimizar os resultados. As colônias bacterianas são preferencialmente retiradas de ágar de sangue e leveduras do ágar Sabouraud, exceto por algumas exceções. O inóculo é emulsificado no ambiente líquido.

Para o caldo de uréia de Stuart, 37 ºC é incubado por 24 a 48 horas, sabendo que está procurando apenas tensões do gênero de proteínas quando a tensão é uma bactéria. Para leveduras, você pode incubar a 37 ° C ou à temperatura ambiente por 24 a 48 horas de incubação.

No caso do caldo de uréia de Christensen, 37 ºC é incubado por 24 horas. Se o teste for negativo, pode ser incubado por até 6 dias. Se o teste dar positivo antes das 6 horas da manhã, indica que é uma tensão do gênero de proteínas.

No caso do ágar da uréia de Christensen, a moldura do ágar é fortemente inoculada, sem punção. O caldo é incuba e interpreta da mesma maneira.

Controle de qualidade

Para testar o meio, você pode usar controles controles, como Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 e Salmonella typhimurium.  Os dois primeiros devem fornecer resultados positivos e os dois últimos resultados negativos.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Christensen Media (ágar base de uréia). Disponível em: Britanialab.com