Agar Tsi o que é, fundamento, preparação, usa

Ele TSI Agar o Agar de ferro triplo de açúcar é um meio de cultura sólido que serve como um teste bioquímico para orientar a identificação inicial de bacilos gram -negativos. É baseado em evidências.

Sua composição e fundação são muito semelhantes ao teste de Kigler Hierro, com a diferença de que este contém apenas glicose e lactose. Por outro lado, -como o nome indica - o ágar triplo de ferro de açúcar contém três carboidratos fermentáveis: glicose, lactose e sacarose.

Além disso, o meio TSI possui quatro derivados de proteínas que o tornam um ágar muito nutritivo: extrato de levedura, extrato de carne, peptona e proteína peptona. Ele também contém sulfato de amônio ferroso, tiossulfato de sódio, cloreto de sódio, fenol vermelho e ágar.

A incapacidade de um microorganismo em fermentar a glicose presente no ambiente o exclui imediatamente de pertencer à família Enterobacteriaceae. Portanto, este teste é essencial para decidir qual rota de identificação deve ser tomada para determinar o gênero e a espécie.

Cada laboratório decide se funciona com TSI Agar ou com Kligler Hierro.

Base

Cada um dos compostos cumpre uma função dentro do meio.

Cloreto de sódio e ágar

O cloreto de sódio é necessário para manter o equilíbrio osmótico do meio. Enquanto o ágar lhe dá consistência sólida.

Indicador de pH (vermelho de fenol)

O pH médio preparado é equilibrado em 7.3 e o indicador de pH (vermelho de fenol) fica amarelo abaixo de 6.8. Isso significa que pequenas quantidades de ácidos produzidos pela fermentação de açúcares transformarão o meio laranja para amarelo.

Se não ocorrer fermentação, haverá alcalização do meio devido ao uso de peptones, passando de vermelho-laranja a vermelho forte.

Derivados de proteínas (extrato de levedura, extrato de carne, peptona e proteína peptona)

Quando as bactérias metabolizam as proteínas presentes no ágar TSI, são produzidas aminas que alcalizam o meio (principalmente no nível do painel), porque a reação precisa de oxigênio. As aminas transformam o painel em vermelho forte.

Mas isso dependerá da capacidade de fermentar bactérias ou não de carboidratos.

Fermentação de carboidratos (glicose, lactose e sacarose)

O estudo da fermentação dos açúcares pode dar várias imagens e cada uma é interpretada de maneira diferente. A interpretação do teste divide os microorganismos em 3 categorias: fermentadores não -glicose, fermentadores não -lactose e fermentadores de lactose/sacarose.

Deve -se notar que a quantidade de glicose no meio é limitada, enquanto a concentração de lactose e sacarose é 10 vezes maior.

Bactérias da família Enterobacteriaceae e outros microorganismos de fermentação de glicose começarão a fermentar esse açúcar, porque o carboidrato mais simples é obter energia para obter energia.

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Por outro lado, lactose e sacarose são carboidratos complexos que devem ser decompostos e se tornarem glicose para que possam entrar no ciclo embenadas-meyerhof.

-Microorganismos não fermentários

Quando o microrganismo inoculado não é capaz de fermentar a glicose, muito menos pode fermentar outros carboidratos. Portanto, os ácidos não são formados aqui, mas há formação de amina na moldura devido ao uso de peptones.

Nesse caso, o chanfro faz um forte.

Interpretação: k / k significa chanfro alcalino / alcalino ou fundo neutro

Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo D.

Este resultado indica que o microorganismo não pertence à família Enterobacteriaceae.

-Microorganismos não fermentários de lactose/sacarose

Se as bactérias forem capazes de fermentar a glicose, mas não a lactose ou a sacarose, o seguinte acontecerá:

As bactérias consumirão toda a glicose presente após aproximadamente 6 a 8 horas, sendo capaz de acidificar o painel e o taco; isto é, o ágar terá completamente amarelo. Mas quando a glicose está esgotada e dada a impossibilidade de usar lactose e sacarose, as bactérias começarão o metabolismo das proteínas.

Esta reação precisa de oxigênio, de modo que a degradação de Peptonas ocorre na superfície (moldura). As aminas produziram alkleinize o amarelo enrolado para vermelho para vermelho. Esta reação é evidenciada às 18 a 24 horas de incubação.

Interpretação: k/a significa moldura alcalina e taco ácido.

Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo B.

-Microorganismos fermentados/de sacarose

Microorganismos capazes de fermentar lactose e sacarose podem obviamente fermentar a glicose. Depois que a quantidade mínima de glicose presente no meio é esgotada, o piruvato formado começa a metabolizar para formar ácidos através do ciclo aeróbico de Krebs e, no período de 8 a 12 horas, todo o meio será amarelo.

Se as bactérias forem capazes de desdobrar lactose ou sacarose, os ácidos continuarão sendo produzidos e, após 18 a 24 horas, todo o tubo -bisel e taco- continuarão amarelos.

Deve -se notar que o uso de glicose leva.

Interpretação: A/ A significa chanfro ácido/ fundo ácido. Pode apresentar gás ou não.

Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo a.

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Produção de gás

Alguns microorganismos são capazes de produzir gás durante a fermentação dos açúcares. O gás é evidenciado no tubo devido à pressão que exerce dentro do ágar. A pressão causa a formação de bolhas ou o deslocamento do ágar. Às vezes, a formação de gás pode fraturar no meio ambiente.

É importante que, ao semear o meio TSI, a punção seja feita de maneira limpa pelo centro do ágar até chegar ao fundo. Se a punção se desviar das paredes do tubo, pode causar falsos positivos na produção de gás, pois escapará do canal formado erroneamente.

A produção de gás, bem como as reações que ocorrem no chanfro do ágar, precisam de oxigênio, portanto, recomenda -se que o tubo seja coberto com tampa de algodão e, se a tampa da baquelita for usada, não deve ser completamente ajustada.

A produção de gás é relatada como positiva (+) ou negativa (-).

Tiossulfato de sódio e sulfato de amônio ferroso (produção de sulfeto de hidrogênio)

Bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio (gás incolor), tome enxofre de tiossulfato de sódio presente no meio. Uma vez que o H for formado₂S reage com sulfato de amônio ferroso, produzindo sulfeto de ferro (claramente visível precipitado preto).

H₂S é relatado como positivo (+) ou negativo (-).

Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo C.

Preparação

Pese 62,5 gr do ágar de ferro meio -rugar (TSI) desidratado e se dissolve em um litro de água destilada.

Quente para dissolver o ágar. Ferver. Distribua 4 ml do meio em 13/100 tubos de teste com tampa de algodão.

Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Remova da autoclave e deixe inclinar o suporte. Deve -se tomar cuidado para que a base e o chanfro tenham a mesma distância.

Armazene em uma geladeira de 2-8 ° C. Deixe um temperamento antes de semear a tensão bacteriana.

A cor do meio desidratada é o bege claro e o meio preparado é vermelho-laranja

O pH final do meio preparado é de 7,3 ± 0,2.

Formulários

O teste TSI é amplamente utilizado no nível do laboratório de microbiologia. Este teste é indispensável para orientar o tipo de teste que deve ser aplicado para alcançar a identificação do gênero e da espécie. Sua boa execução e interpretação podem salvar material e trabalho.

Se o resultado for um tsi k/k k e o teste de citocromo oxidase fornece positivo, os testes devem ser usados ​​para a identificação de bacilos gram -negativos não fermentadores, como Pseudomonas, alcalinos, achromobacter, burkholderia, entre outros gêneros. Se for oxidase negativa, é orientado para o Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc.

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Por outro lado, se um tsi a/a ou k/a for obtido e o teste do citocromo oxidase for negativo, eles reduzem nitratos a nitritos, teremos certeza de que é um microorganismo pertencente à família Enterobacteriace. Nesse caso, a rota de identificação será orientada para testes específicos para este grupo de bactérias.

Por outro lado, se uma imagem k/a ou a/a for obtida e o teste do citocromo oxidase for positivo, os testes adicionais serão direcionados para a identificação de cepas de fermentação que não pertencem à família Enterobacteriaceae, como: aeromonas , Plesiomonas, Vibrio e Pasteurella.

Um TSI com sulfeto de hidrogênio, oxidase negativa, guiará os seguintes gêneros da família Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ou Salmonella.

Um TSI com sulfeto de hidrogênio escasso ou moderado na moldura alcalina com fundo alcalino e uma oxidase positiva, orientará os testes para a identificação de bacilos que não fermentam gramas de bacilos de H de H₂S, como Shewanella putrefaciens.

Finalmente, o TSI pode ser usado para a investigação da produção de sulfeto de hidrogênio em bacilos grama positivos, especialmente quando suspeito de Erysipelothrix rhusiopathiae.

Semeado

O meio TSI deve ser inoculado com colônias puras, isoladas em culturas primárias ou seletivas. Se a colônia for retirada de meios seletivos que foram semeados com amostras com flora mista, os cuidados devem ser tomados apenas da superfície, pois na parte inferior da colônia pode haver cepas viáveis ​​inibidas nesse meio.

Portanto, a alça nunca deve esfriar em um meio seletivo e depois pegar a colônia e inocular um meio tsi.

A semeada será feita com uma reta ou agulha. A punção será realizada, tomando cuidado para que seja através do centro do meio até chegar ao fundo e, em seguida, a semeada termina inoculando a superfície em forma de zigue -zague. Não faça duas perfurações.

Incubar a 37 ° C em aerobiose por 18-24 horas. Interpretar neste momento, nem antes, nem depois.

Limitações

O teste TSI deve ser lido entre 18 e 24 horas de incubação. Uma leitura antes deste tempo pode dar uma falsa fermentação a/a. Enquanto, uma leitura após esse período, pode levar a uma imagem falsa negativa do não -fermentador, devido ao consumo de peptonos que alcalinam o meio.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Agar TSI (Agar Triple Açúcar de Ferro). 2015. Disponível em: Britanialab.com
2. BD Laboratories. Agar de ferro triplo de açúcar (Agar TSI). 2003. Disponível em: BD.com