Caldo de soja tripticaseína o que é, fundamento, preparação, usa

Ele Caldo de soja tripticase É um meio de cultura líquido, muito nutritivo e não seletivo. Devido à sua grande versatilidade, é um dos meios de cultura líquidos mais usados ​​no laboratório de microbiologia.

Também é conhecido pelo nome da soja de soja triptic Triptic eu sou Caldo ou cst). Seus usos são muito variados devido à sua composição. É composto por tripta, peptona de soja, cloreto de sódio, dipotássio e fosfato de glicose.

Soy Soy Tripticaseicene semeada com uma tensão de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, onde a produção de pigmentos é observada. Fonte: Foto tirada pelo autor do MSC. Marielsa Gil.

É capaz de reproduzir bactérias patogênicas clinicamente importantes, incluindo aquelas que exigem do ponto de vista nutricional e bactérias anaeróbicas. Alguns fungos oportunistas e poluentes também podem se desenvolver neste meio.

Devido ao seu alto poder nutricional, ele tem alta sensibilidade para detectar a contaminação microbiana, por esse motivo, foi escolhido pelo Serviço de Inspeção de Saúde Animal e Plantal e Plant para a análise microbiológica de vacinas.

Da mesma forma, o caldo de soja tripticase Soy atende às demandas dos diferentes farmacopous (EP europeu, JP japonês e USP norte -americano) para o estudo microbiológico de produtos em nível industrial, como cosmético e alimentos.

Por outro lado, vale a pena mencionar que, apesar de seu ótimo uso, esse meio é relativamente econômico, por isso é acessível para a maioria dos laboratórios de microbiologia. Além disso, é muito fácil preparar.

Base

A tripta, peptona e glicose fornecem propriedades nutricionais essenciais para torná -lo um meio ideal para o desenvolvimento microbiano rápido.

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Aproximadamente 6 a 8 horas de incubação, você já pode apreciar o crescimento na maioria dos microorganismos. No entanto, existem linhagens de crescimento lento que podem durar dias para crescer.

O cloreto de sódio e o fosfato digotásico atuam como um equilíbrio osmótico e regulador de pH, respectivamente. A presença de crescimento é evidenciada pelo aparecimento de turbidez no meio; Se não houver crescimento, o meio permanece translúcido.

Devido à sua cor clara, é possível observar a produção de pigmentos, como o mostrado na imagem localizada no início do artigo, que corresponde ao pigmento produzido por Pseudomonas aeruginosa. 

Preparação

-Caldo de soja tripticase

Para preparar o caldo de soja tríptico, 30 gr de meio comercial desidratado devem ser pesados ​​em um equilíbrio digital. Depois se dissolve em um litro de água destilada contida em uma fixola.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e, posteriormente, leva uma fonte de calor para ajudar a dissolução média. Deve ser agitado com frequência enquanto ferve por 1 minuto.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos do tamanho apropriado, conforme necessário. Você pode usar tubos com tampa de algodão ou baquelita tapas. Posteriormente, os tubos são esterilizados na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O pH médio deve ser de 7,3 ± 0,2

Deve -se levar em consideração que a cor da cultura desidratada é clara e deve ser armazenada entre 10 e 35 ° C, em um local seco. Enquanto o caldo preparado é âmbar leve e deve ser armazenado na geladeira (2 a 8 ° C).

-Variantes de caldo de soja Tripticaseinna

O caldo de soja tripticasein modificado pode ser preparado adicionando sais biliares e novobiocina para fazê -lo seletivo para o isolamento de E. coli. Outra opção para o mesmo objetivo é preparar o caldo de soja de soja suplementado com vancomicina, cefixima e telurito (2,5 µg/ml).

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Por outro lado, mais glicose (0,25%) podem ser adicionadas ao caldo de soja tripticaseisína quando o objetivo é estimular a formação de biofilmes.

Usar

É nutritivo o suficiente para permitir o crescimento de bactérias exigentes ou irritantes, como Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp e Brucella sp, Não há necessidade de suplementar com sangue ou soro.

Da mesma forma, alguns fungos podem se desenvolver neste caldo, como Complexo Candida Albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Além disso, esse meio sob condições anaeróbicas é ideal para recuperar bactérias pertencentes ao clostridium de gênero, bem como bactérias anaeróbicas não esporuladas de importância clínica.

Se 6,5% de cloreto de sódio for adicionado, ele poderá ser usado para o crescimento de Enterococcus e outros estreptococos do Grupo D.

No nível da pesquisa, tem sido muito útil em vários protocolos, especialmente no estudo de biofilmes ou biofilmes que formam bactérias. Também é usado para preparar a suspensão bacteriana de Mac a 0,5% necessária para realizar o antibiograma pelo método Kirby e Bauer.

Nesse caso, 3 a 5 colônias de aparência semelhante são tomadas e emulsificadas em 4-5 ml de soja SOA Tripticasein. Em seguida, é incubado por 2 a 6 horas a 35-37 ° C e subsequentemente se encaixa na concentração desejada usando solução salina estéril. As acordos de soja tripticaseína não devem ser usadas de 18 a 24 horas de incubação.

Semeado

A amostra pode ser semeada diretamente ou colônias puras retiradas de meios seletivos podem ser sujeitos a. O inóculo deve ser pequeno para não obscurecer o meio antes da incubação.

Normalmente, é incubado a 37 ° C na aerobiose por 24 horas, mas essas condições podem variar dependendo do microorganismo que é procurado. Também pode ser incubado em condições de anaerobiose a 37 ° C por vários dias, se necessário. Por exemplo, ao exigir microorganismos ou crescimento lento, ele pode ser incubado por até 7 dias.

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Na análise microbiológica de substâncias farmacêuticas - como as vacinas - os protocolos são mais rigorosos. Nesses casos, o caldo sem crescimento não é descartado até que se encontre 14 dias de incubação contínua.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, 1 ou 2 tubos devem ser incubados para demonstrar sua esterilidade. Deve permanecer sem mudança.

Você também pode semear cepas conhecidas para avaliar seu comportamento. Entre as cepas que podem ser usadas estão:

Aspergillus Brasiliensis ATCC 1604, Candida Albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório nas condições da atmosfera e na temperatura adequada para cada microorganismo.

Limitações

-A fermentação da glicose causa a descida do pH médio pela produção ácida. Isso pode ser desfavorável para a sobrevivência de alguns microorganismos sensíveis à acidez.

-Não é recomendado para a manutenção de cepas, porque, além da acidez, as bactérias após alguns dias de escape nutrientes com o consequente acúmulo de substâncias tóxicas que tornam o ambiente inóspito.

-Você deve trabalhar cuidando de todos os protocolos de esterilidade, já que os caldos são facilmente contamináveis.

-Depois de preparar o caldo de soja tripticasein, não deve ser tentado transferir caldo para outro tubo estéril, porque esse tipo de manobra é muito vulnerável à contaminação.

Referências

1. Laboratório da Britânia. Caldo de soja tripta. Disponível em: Britanialab.com
2. MCD Laboratory. Caldo de soja tripticase. Disponível em: Sistemas Eletrônicos.com
3. Laboratório Neogen.  Caldo de soja tríptico. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com