Fundação Peptonada, Preparação e Usos

Ele Água de Peptonada É um meio de enriquecimento líquido, não seletivo, usado principalmente como um diluente de amostras de alimentos ou outros materiais. Isso significa que do ponto de vista químico é muito simples, ele contém peptona de carne, cloreto de sódio e água.

Tem algum valor nutricional, permitindo enriquecer a amostra. Se houver bactérias agredidas, este meio tem a energia de reparar a viabilidade. É especialmente útil na recuperação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae.

Água peptonada em potes. Fonte: MSc. Marielsa Gil

No caso da recuperação de salmonelas, recomenda -se o uso da variante de água de Peptonada tamponada; Isso serve como um meio de pré-enriquecimento da amostra, neste caso contém outros elementos, como fosfato disálico e fosfato de Dipotássio.

Normalmente, a água de Peptonada prepara o pH neutro, no entanto, existem outras variantes em que o pH é necessário para ser 8,5 ± 0,2 (alcalino), porque as bactérias que se destinam a isolar são alcalofilos Vibrio cholerae.

Por outro lado, esse meio pode ser usado como meio base para testes de fermentação de carboidratos.

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Base

Peptonas fornece os nutrientes necessários para o desenvolvimento bacteriano, especialmente nitrogênio e aminoácidos de cadeia curta, enquanto o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico.

Além disso, o meio permite dispersar, homogeneizar e reparar células bacterianas que foram danificadas por submissão a processos industriais.

Como o diluente é ideal, substituindo efetivamente a solução fisiológica (SSF) ou a solução de amortecimento de fosfato (PBS).

O crescimento bacteriano se torna evidente pela observação da turbidez da mesma.

Preparação

Preparação caseira (não comercial)

Pese 1 gr de peptona e 8,5 gr de cloreto de sódio, dissolve -se em 1 litro de água destilada. O pH deve ser ajustado para 7.0. Para isso, você pode usar cloreto de sódio 1 n.

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Preparação usando meio comercial

Pesar 15 gr de meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Homogeneize a mistura. Se necessário, a mistura é fervida por 1 minuto para ajudar a solução total. Sirva em 100 ml de potes ou 10 ml de tubos conforme necessário. Autoclavar a 121 ° C por 15 minutos.

Esfriar e usar na geladeira. O pH final do meio é 7,2 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é leve e o bege preparado é claro âmbar.

Preparação para testes de fermentação

Para a preparação anterior - após a esterilização - o carboidrato deve ser adicionado a uma concentração final de 1%, mais o indicador de Andrade (fúcsina ácida) ou fenol vermelho (0.018 g/l). Os tubos devem ser colocados uma campainha de Durham para observação de formação de gás.

Outras variantes de água Peptonada

-Água de Peptonada tamponada

Isso contém caseína enzimática hidrolisada, cloreto de sódio, fosfato di -hidrogênico de potássio e hidrogênio dodeca -hidrato de sódio fosfato. O pH final é 7,0 ± 0,2.

Para se preparar, pesa 20 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água destilada. Sair por aproximadamente 5 minutos. Aquecer por 1 minuto até que completamente dissolvido.

Despeje sobre frascos adequados de acordo com a necessidade. Esterilizar usando a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

-Água alcalina peptonada

Pesar 25 gr do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. Prossiga como descrito acima. O pH varia de 8,3 a 8,7.

Usar

O inóculo é feito colocando a amostra diretamente.

É usado para diluir as amostras, especialmente quando se suspeita de que possa haver bactérias danificadas. Em geral, as diluições são 1:10 e 1: 100.

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É incubado por 24 horas em aerobiose a 35-37 ° C.

Amostras de fezes

Para amostras de fezes em busca de Salmonella, o uso de água tamponada ou tamponada é recomendada como um meio de pré-enriquecer.

Para fazer isso, prossiga da seguinte maneira:

Se as fezes forem formadas para levar 1 gr de amostra. Se eles forem líquidos, pegue 1 ml de fezes e suspenda em um tubo com 10 ml de água de Peptonada tamponada. No caso de swabs retais, faça o download do material contido no swab no tubo com água tamponada com Peptonada.

Em todos os casos, misture e homogeneize a amostra muito bem.

Incubar a 37 ° C por 18 a 24 horas. Posteriormente, subcultural em um caldo de enriquecimento como um caldo de selenito ou caldo de tetracionato a 37 ° C por 18-24 horas mais. Finalmente cresce em meios seletivos para Salmonella, como Agar SS, Agar XLD, Hektoen Agar, entre outros.

Amostras de comida

A água de Peptonada é usada como meio de enriquecimento ou como um simples diluente, mas se as espécies de Salmonella são procuradas, é usada como um meio de pré-enriquecer, como já descrito.

Na comida, prossiga da seguinte maneira:

Para alimentos sólidos, lamenta -se 25 gr da amostra e por alimentos líquidos, meça 25 ml do mesmo. Coloque esta parte em frascos contendo 225 ml de água peptonada. Misture e homogeneize a amostra.

Se houver suspeita de que a carga microbiana seja alta, diluições em série ou decimais podem ser realizadas para facilitar a contagem das colônias que formam unidades (UFC).

O número de diluições dependerá do tipo de amostra e da experiência analítica.

Se, pelo contrário, suspeita -se que a carga microbiana seja muito baixa, não é necessário realizar diluições. Posteriormente, subjetivo em mídia seletiva.

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No caso de comida do mar, como frutos do mar, peixes, entre outros, em busca de Vibrio cholerae ou outras espécies de Vibrio, a água de Peptonada ajustada a pH 8,5 (água alcalina peptonada) deve ser usada (alcalina peptonada).

Controle de qualidade

De cada lote preparado, é preciso incubar dois tubos sem inocular por 24 horas em aerobiose a 37 ° C. O tempo acabou, a turbidez ou a mudança de cor não deve ser observada.

Controles conhecidos também podem ser usados ​​para avaliar sua eficácia:

Para isso, você pode usar as seguintes cepas bacterianas: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Em todos os casos, é esperado um desenvolvimento microbiano satisfatório, o que é observado pela turbidez do ambiente.

Limitações

-O meio desidratado é muito higroscópico, por isso deve ser mantido longe da umidade.

-O meio não deve ser usado se algum tipo de deterioração for observado.

-O meio de cultura desidratado deve ser mantido entre 10 e 35 ° C

-O meio preparado deve ser mantido refrigerado (2-8 ° C).

Referências

1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B e Velázquez ou. Técnicas para análise microbiológica alimentar. 2009, 2ª ed. Faculdade de Química, UNAM. México. Versão para administrador manual e documentos (AMYD) da Faculdade de Química, UNAM 1. Disponível em: http: // DePa.Fquim.Unam.mx
2. Laboratórios da Britânia. Água de Peptonada tamponada. 2015. Disponível em: Britanialab.com
3. Laboratórios Neogen. Água de Peptonada. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com
4. Laboratórios da Britânia. Água de Peptonada. 2015. Disponível em: Britanialab.com
5. Merck Laboratories. Água tamponada com Peptonada. Disponível em: Merckmillipore.com
6. Laboratórios de Conde Pronadisa. Água alcalina peptonada. Disponível em: Condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.