Fundação Hektoen, Preparação e Usos

Ele Agar Haktoen o Agar Hektoen entérico é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi criado no Instituto Hektoen por King e Metzger para o isolamento de bactérias enteropatogênicas dos gêneros Shigella e Salmonella.

O meio é composto de proteína peptona, extrato de levedura, sais biliares, lactose, sacarose, salicina, tiossulfato de sódio, cloreto de sódio, citrato de ferro, citrato de amônio, azul de bromol, fuchsina ácida e ágar e ágar. Esta formulação permite diferenciar os gêneros Shigella e Salmonella do restante das bactérias capazes de crescer neste meio.

PARA. Hektoen Virgen B -AGUE B. Haktoen Agar semeado. Fonte: Flickr.com/o uploader original foi Philippinjl na Wikipedia francesa. [CC BY-SA 2.0 FR (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/2.0/fr/ação.em)]

Embora existam outras mídias com a mesma função que o Agar Hektoen, isso tem uma vantagem maior em comparação com outras mídias, especialmente quando elas querem recuperar espécies de Shigella.

As espécies de ambos os gêneros produzem problemas gastrointestinais graves no ser humano devido ao consumo de alimentos contaminados; Portanto, a transmissão é fecal - oral. É por isso que o uso do Agar Hektoen é indicado principalmente na análise microbiológica de fezes e amostras de alimentos.

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Base

Hektoen Agar contém peptonos e extrato de levedura como fonte de nutrientes, fornecendo os elementos essenciais para o desenvolvimento microbiano.

No entanto, também possui sais biliares que inibem o crescimento de algumas bactérias, especialmente grama positiva e algum grama negativo. É por esse motivo que é considerado um meio seletivo.

Por outro lado, Hektoen Agar é um meio diferencial. Esta propriedade é conferida pela presença de carboidratos fermentáveis, como lactose, desenho e salicina, ao lado do sistema de indicadores de pH, representado por bromotimol azul e ácido fucsin.

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Todas as bactérias capazes de crescer neste meio que não pertencem ao gênero Salmonella e Shigella desenvolverão salmão ou laranja, exceto o gênero Proteus. Isso se deve à fermentação de um ou mais dos carboidratos presentes, o que acidifica o meio, o que faz com que o indicador de pH gire.

Por outro lado, o gênero Shigella e Salmonella não são capazes de fermentar nenhum dos carboidratos presentes, usando apenas peptonos como fonte de energia, que alcaliniza o meio e, portanto, suas colônias são azuis verdes-azulados.

Também neste meio, bactérias capazes de formar sulfeto de hidrogênio (gás incolor) podem ser distinguidas neste meio. O tiossulfato de sódio atua como uma fonte de sulfeto, enquanto o citrato de ferro é o agente revelador. Ambos os compostos possibilitam a formação de um precipitado preto de sulfeto de ferro que mostra a reação.

O precipitado negro no centro da colônia com um halo transparente ao redor dá uma aparência de olho de peixe. Este recurso sugere a presença do gênero Salmonella.

Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico e o ágar fornece consistência sólida ao ambiente.

Preparação

Pesar 76 gr de meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Assista à mistura e depois saia em repouso por 10 a 15 minutos. Pode ser aquecido e fervendo, dando movimentos rotativos até sua dissolução total. Este meio não é esterilizado em autoclave.

Quando o meio atinge uma temperatura aproximada de 45 ° C, um volume de 20 ml em placas estéreis de Petri é derramado diretamente.

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O ágar está solidificado. Naquela época, eles já estão prontos para uso. É aconselhável usá -los imediatamente. Se não for possível, eles são mantidos na geladeira até o uso deles.

As placas devem ser removidas com antecedência da geladeira antes de semeá -las para tomar a temperatura ambiente.

O pH médio deve ser de 7,5 ± 0,2. A cor do meio desidratada é roxa e a cor preparada é verde marrom.

Usar

O uso do Agar Hektoen é recomendado para a busca de bactérias do gênero Shigella e Salmonella em amostras de alimentos e alimentos.

A possibilidade de isolar essas bactérias aumenta consideravelmente se a amostra em caldos especiais for anteriormente enriquecida.

O inóculo deve ser forte e o plantio é feito por restrições. As placas são incubadas a 37 ° C por 24 a 48 horas em aerobiose.

A incubação por 48 horas é recomendada porque as características das colônias são mais claras para interpretação e diferenciação no momento.

Controle de qualidade

Para realizar controle de qualidade a esse meio, são usadas cepas bacterianas certificadas, como: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella Flexneri ATCC 12022 e Shigella Sonnei ATCC 25931.

Os resultados esperados são os seguintes: Salmonella typhimurium e  Salmonella enteritidis Eles devem desenvolver colônias verdes - azuladas com ou sem centro preto. Enquanto as espécies de Shigella crescerão como verdes - colônias azuladas.

Você também pode incluir cepas de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

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Nesses casos, as características observadas são as seguintes: E. coli e K. pneumoniae Eles se desenvolverão nessas colônias médias de cor salmão em laranja, com um precipitado da mesma cor ao redor. Enquanto Proteus desenvolverá colônias verde-azuladas com ou sem centro preto.

Enquanto que S. aureus e  E. Faecalis Eles devem ser inibidos, às vezes E. Faecalis consegue crescer como colônias amarelas e muito pequenas.

Por outro lado, porque esse meio não é esterilizado em autoclave, é importante avaliar a esterilidade do meio. Portanto, de cada lote preparado, eles devem ser incubados de uma a duas placas sem inocular 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Obviamente não há crescimento no prato.

Limitações

-As espécies proteus podem se desenvolver neste meio e as características de suas colônias podem ser confundidas com espécies de Salmonella ou Shigella. Por esse motivo, toda colônia suspeita deve ser confirmada com testes bioquímicos.

-É necessário acompanhar o uso deste meio com outras idades menos seletivas, porque se o microorganismo procurado estiver em baixas concentrações, não poderá se desenvolver neste meio.

-Não superaqueça durante sua preparação, pois o calor excessivo altera a composição do ambiente.

-Colônias extraordinariamente de lactose que fermentam Salmonella podem aparecer que podem passar despercebidos.

Referências

1. Colaboradores da Wikipedia. Agar de Hektoen. Wikipédia, a enciclopédia livre. 13 de março de 2019, 23:38 UTC. DISPONÍVEL EM: .Wikipedia.Org/ Acesso em 16 de março de 2019.
2. BD Laboratories. Bd hektoen gangue enterric (ele gank). 2013. Disponível em: BD.com
3. Laboratórios da Britânia. Agar Hektoen entérico. 2015. Disponível em: Britanialab.com
4. Difcco Laboratories Francisco Soria Melguizo. Agar Haktoen. Disponível em: F-Soria.é
5. Manual Difco & BBL, Hektoen Agar Orric. 2ª edição. Disponível em: BD.com/Europa