Agar XLD Foundation, preparação e usos

Ele XLD Agar O ACHO XILOSA Lisina DeSoxicate é uma cultura sólida seletiva e diferencial para isolamento enteropatogênico. Taylor projetou a fórmula de ágar XL (xilose, lisina) para melhorar o isolamento do gênero Shigella.

Ele observou que esse gênero foi inibido na maioria dos meios destinados ao isolamento de enteropatogênio. Posteriormente, ele foi adicionado dexicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato amônico férrico para aumentar sua seletividade. Esta fórmula acabou sendo útil para Shigella e isolamento de Salmonella.

Diferenças das colônias de Shigella, Salmonella e Coliformes no Agar XLD. PARA. Shigella SP, B. Salmonella sp, C. Coliformes. Fontes: a. Por: CDC/ Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, cortesia: Biblioteca de Imagens de Saúde Pública B. https: // upload.Wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/salmonella_species_growing_on_xld_agar _-_ exibindo_h2s_production _-_ detalhe.JPG c. Por: CDC/DR. J. J. Agricultor, cortesia: Biblioteca de Imagens de Saúde Pública

O ágar XLD é composto de extrato de levedura, sódio, xilose, lisina, lactose, sacarose, tiossulfato de sódio, citrato de amônio férrico, cloreto de sódio, fenol vermelho e ágar e ágar. Na maioria dos laboratórios de bacteriologia, a dupla de ágar e ss de ágar é usada para o estudo de amostras fecais em busca de Shigella e Salmonella.

Outros laboratórios preferem a combinação de Chromagar Salmonella e Agar XLD, entre outras opções disponíveis. Essas duplas podem ser preparadas em pratos duplos de Petrie. De um lado, eles colocam o ágar xld e no lado oposto, o outro meio escolhido.

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Base

-Poder nutricional

O ágar XLD tem o extrato de levedura, que serve como fonte de nutrientes para os microorganismos que se desenvolvem neste ágar. Além disso, a presença de carboidratos (xilose, sacarose e lactose) fornece energia às bactérias que podem fermentá -las.

-Seletividade média

Como substância inibitória, apresenta layout de sódio; Isso impede o crescimento de bactérias grama positivas, dando ao caráter seletivo médio.

-Poder diferencial

Colônias típicas de Shigella

Como já mencionado, o ágar XLD contém xilose; Este carboidrato é fermentado por todas as bactérias que crescem neste meio, exceto pelo gênero Shigella.

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Essa é uma das características que seu personagem diferencial oferece, já que as colônias de Shigella distinguem o resto, desenvolvendo colônias vermelhas, enquanto as outras bactérias produzem colônias amarelas.

Colônias típicas de Salmonella

O gênero Salmonella também fermenta a xilose, gerando inicialmente colônias amarelas. No entanto, depois de esgotar o carboidrato de xilose, ataca a lisina por sua enzima lisina descarboxilase. A descarboxilação da lisina gera álcalis que fazem a cor da colônia e o vermelho original para o vermelho original.

Esse comportamento é realizado apenas por Salmonella, já que os coliformes que descarboxyle. Isso ocorre porque os coliformes também fermentam lactose e sacarose presentes; Portanto, a produção de ácido é muito alta, deixando a colônia amarela nessas bactérias.

Deve -se notar que o gênero Salmonella não fermenta a sacarose, nem a lactose.

H₂S

O ágar XLD também permite detectar as espécies de produtores de Salmonella de H₂S; Para fazer isso, possui a fonte de sulfeto representada pelo tiossulfato de sódio e um desenvolvedor de reação que é o citrato de amônio férrico.

O último reage com H₂S (gás incolor) e forma um precipitado preto visível sulfato de ferro insolúvel. Nesse sentido, as características das colônias de Salmonella ficarão vermelhas com um centro preto.

Deve -se notar que para a reação de H₂S, é necessário um pH alcalino. É por isso que outras enterobactérias que formam H₂Eles não podem fazer isso ou mal nesse ambiente, uma vez que a alta acidez que produz ao fermentar os carboidratos apresenta inibir ou dificultar a reação.

-Cloreto de sódio, ágar e fenol vermelho

Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico; O ágar é o agente solidificante e o vermelho do fenol detecta as mudanças de pH, girando a cor das colônias e o meio.

Preparação

Pesar 55 gr de xld desidratado e dissolver em 1 litro de água. Aqueça e agite a mistura até chegar ao ponto de ebulição. Não superaqueça, pois o calor danifica o meio e cria um precipitado que altera a morfologia das colônias típicas.

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Este meio não deve ser autoclavado. Ao se dissolver, você deve passar para um banheiro a partir de 50 ° C. Quando o resfriamento deve ser servido diretamente em placas estéreis de Petri. Eles podem ser mergulhados em placas simples ou placas duplas. Eles podem solidificar e manter na geladeira até o uso.

Temperamento antes de usar. Como é um meio não esterilizado, é recomendável prepará -lo perto da data de uso.

O pH final do meio deve estar em 7,4 ± 0,2. A cor do preparado é vermelho laranja, translúcido, sem precipitado.

Se houver um ágar lisina xilose (xl), sódio, tiossulfato de sódio e citrato de ferro amônico, poderá ser adicionado. Dessa maneira, a fórmula do agar XLD é obtida.

Formulários

O ágar XLD é usado para a recuperação de enteropatógenos, principalmente do gênero Shigella e secundariamente do gênero Salmonella. É útil para avaliar amostras de fezes, água e alimentos.

Tipos de amostras

Banco

As amostras de fezes podem ser semeadas diretamente no ágar XLD, fazendo uma boa distribuição do material para obter colônias isoladas.

Para melhorar a recuperação de Salmonella, o XLD concordou com os meios de enriquecimento para Salmonella pode ser semeada.

Comida

No caso de alimentos, os caldos de enriquecimento podem ser usados ​​para Salmonella e Shigella. Para Salmonella, você pode usar cistina de caldo de selenito, caldo de tetracionato verde brilhante, entre outros.

No caso de Shigella, pode ser enriquecido com o caldo Shigella com 0,5 µ/ml de Novobiocina, incubado a 42 ° ± 1 ° C por 16-20 horas.

Água

Na análise da água, a técnica de filtração da membrana e o uso de ágar XLD, entre outros, são recomendados.

Semeadas e condições de identificação

O meio semeado é incubado em aerobiose a 35 ° C por 24 a 48 horas.

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As colônias típicas de cada gênero são observadas, as colônias suspeitas devem ser realizadas testes bioquímicos para identificação.

Controle de qualidade

Para avaliar o controle de qualidade média, as seguintes cepas bacterianas podem ser usadas: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella aby DSM 4224, Shigella Flexneri ATCC 12022, Shigella Sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

O gênero Salmonella é caracterizado por se apresentar nesta média colônias vermelhas com centro preto ou colônias completamente pretas. Enquanto, no gênero Shigella, as colônias devem ser vermelhas, ou seja, a cor do meio.

Em caso de Escherichia coli Espera -se que seja total ou parcialmente inibido; Se as colônias crescem são amarelas. Para Proteus mirabilis Espera -se um crescimento escasso com colônias rosa com ou sem centro preto. Finalmente, o gênero Klebsiella crescerá como colônias amarelas.

Considerações finais

O Agar XLD é muito usado nos laboratórios de bacteriologia por sua alta eficiência para a recuperação de Shigella e também tem uma boa recuperação do gênero Salmonella.

Rall e Collaborators (2005) em seu trabalho intitulado "Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios sólidos para a detecção de Salmonella em aves" mostrou que do 3 clássico comprovado (ágar verde brilhante, ss agar e agar xld), ágar xld obteve a melhor taxa de recuperação.

As porcentagens de recuperação foram as seguintes: 13.8% para ágar verde brilhante, 27.6% para SS e 34.5% para XLD. Foi superado apenas por um ágar cromogênico Agar Rambach com 48% de recuperação e cromagar com 79.3%.

Referências

1. Doenças transmitidas por alimentos. Shigelosis. Disponível em: Anmat.Gov.ar
2. “Agar XLD." Wikipedia, enciclopédia livre. 9 de fevereiro de 2019, 11:46 UTC. 10 de abril de 2019, 19:25 Wikipedia.org
3. BBL Laboratories. Chromagar Salmonella / BD XLD Agar (Bipacca).2013 disponível em: BD.com
4. Laboratório. Neogen. XLD Agar. Disponível em: FoodSafety.Neogen
5. Laboratório Francisco Soria Melguizo. XLD Agar. Disponível em: http: // f-soria.É/informar
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Avaliação de três bruths de enriquecimento e cinco meios de revestimento para detecção de Salmonella em aves. Braz. J. Microbiol.  2005; 36 (2): 147-150. Disponível em: Scielo.Br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.