Farinha de milho. Fundação, preparação e uso

Ele Ágar de farinha de milho É um meio de cultura sólido, baixo poder nutricional, útil para a subcultural Candida Albicans. Em inglês, é conhecido como ágar de refeição de milho.

A farinha de milho convencional médio tem uma composição muito simples, contém farinha de milho, ágar e água. Devido ao seu baixo nível nutricional, é ideal usá -lo na manutenção de cepas de fungos por períodos moderados, especialmente fungos pretos.

PARA. Representação gráfica do complexo Candida albicans em ágar de milho. B. CLAMOSDOSPORAS DA CANDIDA ALBICANOS Vista complexo para o microscópio, formado em farinha de milho. Fonte: a. Grahamcolm [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/3.0)]/ b. Por: CDC/DR. William Kaplan, cortesia: Biblioteca de Imagens de Saúde Pública.

Esporulação complexa Candida Albicans É preferido neste meio, se 1% de Tween 80 for adicionado durante a preparação do ágar. A formação de clamidosporores é característica dessa espécie e praticamente a única que afeta o ser humano.

Existem outras espécies que formam clampostoporos, mas é improvável que elas afetem o humano, como Candida australis, presente no excremento de pinguins, ou C. Clausenii, que é um saprófito raramente encontrado. Além disso, excepcionalmente a espécie C. Estellatóide e C. tropicalis Eles poderiam formá -los.

Por outro lado, a adição de glicose à farinha de milho médio favorece a formação de pigmentos em cepas de Trichophytom rubrum.

É importante destacar que existem fungos que não formam hifas, nem pseudohifas na farinha de milho, como Cryptococcus neoformans, diferenciando de outros gêneros.

O ágar de farinha de milho pode se preparar em laboratório ou mídia comercial também pode ser usada.

[TOC]

Base

A farinha de milho é substrato, o ágar é o agente solidificante e a água é o solvente.

Agar de farinha de milho pode ser suplementado com Tween 80 (monoolato de poliéster 80 sorbitita ou polissorbato). Este composto diminui a tensão superficial do meio ambiente por seu poder emulsificante.

Pode atendê -lo: fosfatidilinositol: estrutura, treinamento, funções

Ele também cria uma atmosfera hostil que inibe a multiplicação de células exageradas e estimula o crescimento de hifas, também favorecendo a produção de clamidosesporos; O último considerou estruturas de resistência. Esta estrutura ajuda na identificação das espécies de Candida Albicans.

Por sua parte, a glicose neste meio aumenta a capacidade de formação de pigmentos de alguns fungos.

Deve -se notar que a farinha de milho médio com glicose não serve para a demonstração de clamidosesporos em cOmplejo candida albicans.

Preparação

Farinha de milho caseira

Pese 47 gr de farinha de milho amarela e se dissolve em 500 ml de água destilada. Aqueça a 60 ºC, enquanto a preparação é agitada em um período aproximado de 1 hora. Em seguida, filtre através de um pedaço de gaze e algodão, opcionalmente, ele pode ser filtrado novamente através de um papel de filtro Whatman No. 2.

Complete o volume a 1000 ml com água destilada. Adicione 17 gr de águas de ágar, calor para dissolver. Autoclavar por 15 minutos a 121 ° C.

Sirva em placas estéreis de Petri. Salvar em uma geladeira.

A cor do meio preparado é esbranquiçado com aparência irregular.

Se você quiser preparar farinha de milho com glicose para a preparação descrita acima para adicionar 10 gr de glicose.

Ágar comercial de farinha de milho

Pesar 17 gr do meio desidratado e se dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura pode ser aquecida, mexendo suavemente para se dissolver completamente. Esterilize em autoclave a 121 ºC, 15 lb, por 15 minutos.

Despeje em placas estéreis de Petri. Deixe solidificar. Invista e salve na geladeira até usar. Temperamento antes de usar.

O pH deve ser de 6,0 ± 0,2 a 25 ºC.

Ágar de farinha de milho com Tween 80

Para cumprir com o padrão ISO 18416, o ágar da farinha de milho deve ser preparado da seguinte forma:

Pode atendê -lo: acetil coenzima para

Pesa 65 gr por litro e adicione 10 ml de Tween 80. Aqueça e ferva por alguns minutos até você se dissolver, tomando cuidado para não superaquecer muito. Esterilize a 121 ºC por 15 minutos.

Ágar de farinha de milho com glicose

Para melhorar o poder cromogênico das colônias de Trichophyton Rubrum e diferenciá -los de T. Mentagrophytes, 0,2% de glicose à fórmula original pode ser adicionada. Não precisa ter Tween 80, já que a glicose inibe a formação de clamidosesporos.

Usar

Principalmente o uso de ágar de farinha de milho destina -se ao estudo de cepas de Candida, ajudando sua identificação através da observação característica dos chloidosesporos nas espécies de Albicans. Isto é, o uso deste ágar serve como um método auxiliar de identificar essas leveduras.

Neste ágar, pode desenvolver espécies saprofíticas e patogênicas, mas cada formam estruturas miceliais características. Por exemplo, as espécies do gênero Torulopsis não produzem micélio e se reproduzem apenas por blastoconídeos.

Da mesma forma, as espécies de Trichhosporon e Geotrichum produzem artroconidia na farinha de milho e às vezes é difícil distinguir entre um e o outro.

A artroconidia de Genotrichum produz uma extensão das hifas semelhantes a um bastão de hóquei.

Também a produção de pigmentos usando ágar de farinha de milho suplementada com glicose é útil na identificação de Trichophytom rubrum.

Semeado

Na farinha de ágar a farinha das colônias suspeitas de sincera. O meio é semeado e incubado a 22 ºC por 24 a 48 horas. O tempo de incubação pode ser estendido, se necessário.

Demonstração de clamidosporos

Para esse fim, o ágar de farinha de milho com Tween 80 deve ser inoculado usando a técnica de Dalmau. Este método consiste em tomar com a alça de platina uma parte da colônia suspeita e fazer três cortes paralelos no meio, mantendo a alça a 45º. Os cortes devem ser separados a uma distância de 1 cm entre um e o outro.

Pode servir você: flora e fauna da África: espécies representativas

Posteriormente, um objeto anteriormente inflamado sobre as estrias semeadas é colocado, de modo que a metade coberta e a outra descoberta.

Incubar as placas plantadas a 30 ° C por 48-72 h e depois examine o microscópio através das tampas.

Manutenção de cepas de fungos

Para a manutenção de cepas, as placas plantadas e as inundações são armazenadas na geladeira (4 a 8 ºC). Dessa forma, eles podem durar várias semanas e ser usados ​​para fins de ensino ou pesquisa.

Controle de qualidade

Para o controle da esterilidade, uma placa sem inocular à temperatura ambiente é incubada, espera -se que não haja crescimento ou mudança de cor.

Para controle de qualidade, você pode semear cepas conhecidas, como: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida Albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Os resultados esperados são inibição parcial para S. aureus e E. coli. Embora o crescimento satisfatório seja esperado no restante das cepas.

Aspergillus niger Cresce com colônias negras e esporulou em um tempo aproximado de 5 dias de incubação.

Candida Albicans Colônias levaduriformes com produção de clamidosporos.

Saccharomyces cerevisiae produzir células de levedura grandes.

Limitações

Um precipitado amarelo é formado no fundo da placa que não deve ser confundido com colônias.

Referências

1. Laboratórios Neogen. Agar de farinha de milho. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com.
2. Mídia de cultivo de microkit. Agar de farinha de milho. Disponível em: cultura de mídia.com.
3. Linares M, Solís F. Guia identificação de leveduras. Disponível em: http: // www.guia.Eu vou reviver.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Peru Med.Exp. Public Health, 2002; 19 (4): 206-208. Disponível em: Scielo.com
5. Casa de casa g. Micologia geral. 1994.  2ª ed. Universidade Central da Venezuela, edições da biblioteca. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
8. Castelo e. Estudo comparativo de alguns métodos macro e microscópicos para o isolamento e reconhecimento do gênero Candida. Rev. Ciências químicas farmacêuticas colombianas. 1970; 3 (1): 33-57. Disponível em: Ciências.um i.Edu.co