Grande ágar, preparação e usos

Ele Grande ágar É um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi projetado para isolar e ajudar a identificação das principais espécies de Candida. Seu nome Biggy vem da sigla em inglês bismuto glicose glicina yeas.

A fórmula original foi criada por Nickerson, então esse meio também é conhecido como Nickerson Agar. Atualmente, é composto de extrato de levedura, glicina, dextrose, citrato de amônio, citrato de bismuto, sulfito de sódio e ágar.

Representação gráfica do grande ágar. Fonte: Flickr.com

Biggy Agar é formulado para a diferenciação de espécies complexas C. Albicans, c. Tropicalis, c. Krusei e c. Kefyr, Mas outras espécies, como Candida Glabrata, C. parapsilosis, c. Guilliermondii, Trichhosporun SP, Geotrichum candidum e Saccharomyces cerevisiae.

Tem boa sensibilidade e especificidade, no entanto, ao compará -la com outras mídias com função semelhante, isso é em segundo lugar, sendo superado por Chromagar. Por esse motivo, muitos laboratórios preferem o último, embora seja muito mais caro.

Deveria ficar claro que o uso do grande ágar, assim como outros meios semelhantes, ajude uma identificação presuntiva rápida, mas nunca confirmatório. Portanto, métodos de identificação adicionais devem estar disponíveis; Por exemplo, os sistemas de identificação Vitek 32 e API 20.

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Base

O grande ágar é considerado um meio parcialmente seletivo para o isolamento de leveduras, especialmente do gênero Candida, embora outros gêneros possam crescer.

Também é um meio diferencial porque, dependendo das espécies envolvidas, diferentes características serão observadas em aspecto, cor, forma e tamanho. É considerado um meio cromogênico, para o desenvolvimento de diversas cores nas colônias.

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A cor apresentada pelas colônias de leveduras é devido à presença de sulfito de bismuto no ágar. Nickerson percebeu que as leveduras do gênero. Isso origina colônias entre luz e preto.

Este ágar contém extrato de levedura e dextrose, que fornece a fonte de nutrientes básicos e energia para o desenvolvimento de leveduras. A glicina é estimulante do crescimento de leveduras, enquanto inibe o desenvolvimento de certas bactérias.

Nesse mesmo sentido, citrato de amônio e bismuto, bem como sulfito de sódio, atuam como inibidores do crescimento bacteriano. O ágar é o agente que dá consistência sólida ao meio ambiente.

Preparação

Pesa 45 gr de cultura desidratada e se dissolve em um litro de água destilada. Agite e aqueça a mistura, deixando ferver por 1 minuto à solução completa. Este meio de cultura não é esterilizado em autoclave.

Ao esfriar aproximadamente 45 ° C em maria, despeje 20 ml em placas estéreis de Petri.

A cor do meio desidratada é amarelada e o cinza preparado é um gel branco amarelado, no qual um ligeiro precipitado pode ser observado.

O pH deve ser 6,8 ± 0,2.

O meio preparado deve ser armazenado na geladeira (4 ° C) e proteger da luz. Como é um meio que não é a auto -escrava deve ser usada o mais rápido possível. Seu uso é recomendado antes de se encontrar 3 dias desde a sua preparação.

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Usar

As placas são incubadas à temperatura ambiente (25 ° C) por 24, 48 e 72 horas, o tempo de incubação pode ser estendido até 5 dias.

Cada espécie de candida desenvolve certas características que as fazem distinguir uma da outra. Os fabricantes médios descrevem as seguintes características para cada espécie:

-Complexo Candida Albicans: Ele se desenvolve nesse ágar como colônias suaves, redondas, marrons ou pretas, com uma ligeira borda micelial. Com a condição de que a cor escura não está espalhada para o meio ambiente.

-Candida tropicalis: As colônias brilhantes e pequenas e escuras, com borda micelial preta e clara. A cor escura se espalha em direção ao meio ambiente, característica típica dessa espécie, depois de ter sido incubada por 72 horas.

-Candida Krusei Desenvolva colônias ásperas e de aparência plana, com a borda entre marrom a negrosco.

-Candida Parakrusei: colônias de tamanho médio, na maioria das vezes com aparência áspera, plana. A cor pode variar entre café avermelhado escuro e brilhante para café avermelhado claro. A borda das colônias tem um extenso micélio amarelado.

-Candida Stellelatóide: Desenvolva colônias médias, planas, marrom escuro, quase preto. Desenvolvimento micelial é muito escasso.

Um estudo de Yücesoy e Marol em 2003 mostrou que o meio cromagar apresenta melhor sensibilidade e especificidade para a diferenciação e identificação de diferentes espécies de Candida do que o ágar grande.

Controle de qualidade

Para controle de esterilidade, as placas são incubadas sem inocular a 25 ° C, na escuridão por 24 a 48 horas, espera -se que não haja crescimento de qualquer tipo ou mudança de cor.

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As cepas recomendadas do ATCC para executar o controle de qualidade média são:

Complexo Candida Albicans  ATCC 60193, Candida Glabrata ATCC 2001, Candida Krusei ATCC 34135. Em todos eles, o crescimento é esperado como descrito acima.

Você também pode usar as seguintes cepas:

Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Nos dois primeiros, a inibição total é esperada, mas em caso de crescimento parcial das colônias será a cor creme.

Em caso de S. aureus Espera -se que seja totalmente inibido, mas se eles crescerem parcialmente, suas colônias são brancas.

Limitações

Algumas bactérias são capazes de se desenvolver neste meio e podem até ficar escuras, simulando um vizinho de Candida.

Tabela: características das colônias de algumas leveduras em Biggy concordaram de acordo com o trabalho de Yücesoy M e Marol S.

Fonte: Yücesoy M, Marol S. Desempenho de Chromagar Candida e Biggy Agar para identificação de espécies de YEAs. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7

Referências

1. Yücesoy M, Marol S. Desempenho de Chromagar Candida e Biggy Agar para identificação de espécies de YEAs. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7.
2. MCD LAB. Biggy Envelhing Technical File. Disponível em: McDlab.líquido/
3. LAB NEOGEN. Grande ágar. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com
4. Laboratórios de Conde Pronadisa. Grande ágar. Disponível em: Condalab.com
5. BD Laboratories. BD Biggy Agar (Bismuth Glicose Glycine Yaest Agar). 2011. Disponível em: BD.com