Fundação, preparação e usos de caldo de Tioglicolato

Ele Tioglicolate caldo É um meio enriquecido de consistência do fluido. É conhecido com o acrônimo FTM). Foi criado por Brewer e modificado em 1944 por Vera, que o incorporou peptona de caseína.

Este meio possui uma redução de baixo potencial de oxidação, portanto, não é recomendado para o desenvolvimento de bactérias aeróbicas rigorosas, mas é ideal para recuperar bactérias aeróbicas opcionais, bactérias anaeróbicas rigorosas e microerofílicas.

Tioglicolate caldo sem indicador. Amostra uma secreção vaginal. Fonte: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/4.0)]

O alto desempenho observado com esse meio no isolamento e recuperação de uma ampla variedade de microorganismos, tornou -o aceito pela Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), pela Associação Oficial de Químicos Agrícolas (AOAC) e pela Farmacopeia Europeia (EP).

Essas organizações o recomendam para os testes de controle de esterilidade de produtos farmacêuticos e para o enriquecimento de vários tipos de amostras.

O tioglicolato Cado é composto de extrato de levedura, caseína digerática, dextrose anidra, L-cistina, cloreto de sódio, tioglololato de sódio, descanso e pico em uma pequena quantidade em uma pequena quantidade.

Existem várias versões deste meio, entre elas: caldo de tiglicolato com indicador, caldo de tiglicolato sem indicador, caldo Tioglicolato com indicador mais rigoroso com hemina e vitamina K_1, E caldo Tioglicolato com carbonato cálculo.

Deve -se notar que a variante do caldo Tioglicato enriquecido com hemina e vitamina K serve para melhorar o crescimento de anaeróbios rigorosos e a variante do caldo de tiglicolato que contém carbonato de cálcio é útil para neutralizar os ácidos produzidos durante o crescimento microbiano.

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Base

O caldo de Tioglicolato é considerado um enriquecimento, não seletivo, pois permite o desenvolvimento da maioria das bactérias que não são de queda. Os requisitos nutricionais são fornecidos por extrato de levedura, digerido pancreático e glicose.

Por outro lado, esse meio, apesar de ser um caldo, contém uma pequena quantidade de ágar; Isso causa um baixo potencial de redução de óxido, porque os freios de entrada de oxigênio, de modo que o oxigênio está diminuindo à medida que se aprofunda dentro do tubo.

É por isso que esse meio é ideal para o desenvolvimento de bactérias aeróbicas opcionais, microaerófilos e anaeróbicos rigorosos, esses últimos 2 sem incubar nessas condições. O mesmo meio regula a quantidade de oxigênio dentro do ambiente, está ausente no fundo do tubo e em quantidade suficiente na superfície.

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Da mesma forma, Tioglicolate e L-Cistine atuam como agentes redutores, contribuindo para a prevenção do acúmulo de substâncias prejudiciais ao desenvolvimento bacteriano, como peróxido. Além disso, esses compostos contêm grupos sulfidrilos (-Sh-), neutralizando os efeitos inibitórios dos derivados mercuriais, arsênicos, entre outros metais pesados.

Por outro lado, a inquietação é um indicador de redução de óxido. Esta substância é incolor quando é reduzida e rosa quando oxidada. Existem as variantes do caldo de tiglicolato com indicador e sem indicador. Seu uso dependerá do tipo de amostra e preferência de laboratório.

Enquanto isso, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do caldo Tioglicate e o uso da glicose de Anhydra impede o excesso de umidade no ambiente desidratado.

Preparação

Tioglicolate caldo com indicador

Pese 29,75 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água destilada. A mistura é deixada em aproximadamente 5 minutos. Traga uma fonte de calor e mexa com frequência até se dissolver completamente.

Despeje o meio em tubos de ensaio e autoclavato a 121 ° C por 15 minutos. Deixe esfriar antes de usar. Verifique a inserção da casa comercial para sua conservação. Alguns recomendam economizar à temperatura ambiente em lugar escuro e outros na geladeira protegidos da luz.

O pH médio preparado é 7,1 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é leve e o bege preparado é um âmbar claro com alguma opalescência.

Tioglicolate caldo com hemina e indicador de vitamina K₁

Existem mídias comerciais que já trazem hemina e vitamina K₁, Especial para cultivo anaeróbico.

Se você não possui um meio enriquecido para anaeróbios, o caldo básico de Tioglicolate pode ser preparado. Para fazer isso, 10 mg de cloridrato de hemina e 1 mg de vitamina K são adicionados₁ Para cada litro de médio. No entanto, se o sangue ou o soro for adicionado ao caldo Tioglololato, a adição de hemina, a vitamina K não é necessária.

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Tioglicolate caldo com carbonato de cálcio

Vem comercialmente e se prepara seguindo as instruções da inserção.

Tioglicolate caldo sem indicador

Isso tem a mesma composição do Tioglicate básico, mas não contém resazurina.

Pesar 30 gr de meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. O restante da preparação é igual ao descrito no caldo Tioglicate com indicador.

Usar

O caldo de Tioglicolato é útil para o enriquecimento de amostras clínicas, especialmente para aqueles de locais estéreis. Também é útil para amostras não clínicas, como cosméticos, medicamentos, etc.

Para a inoculação de amostras líquidas (como LCR, líquido sinovial, entre outros), as amostras são primeiro centrifugando e, em seguida, 2 gotas do sedimento são tomadas e colocadas no caldo Tioglololato. Incubar a 35 ° C por 24 horas. Se neste momento não houver crescimento (turbidez), ele é incubado até um máximo de 7 dias.

Se a amostra for coletada com o HIOPUS, o meio de cultura será inoculado primeiro em placas e, finalmente, o swab é introduzido no caldo, a parte que se destaca e o tubo é coberto, deixando o swab dentro. Incuba a 35 ° C por 24 horas, 7 dias no máximo.

Para amostras sólidas, deve ser homogeneizado em solução de solução salina fisiológica (SSF) e depois inocular o caldo Tioglololato com 2 gotas da suspensão.

Às vezes, pode ser usado como um meio de transporte para amostras onde suspeita -se a presença de anaeróbios rigorosos ou como um caldo de enriquecimento de backup.

A variante de caldo de tiglicolato com carbonato de cálcio é usada para a manutenção de controles por mais tempo, porque tem a capacidade de neutralizar os ácidos produzidos pelo uso de glicose; Esses ácidos são tóxicos para certas bactérias.

O crescimento no caldo de tiglicolato será observado devido à turbidez do meio ambiente. Recomenda -se realizar uma coloração de grama e subsequentemente subjetivo em meios não seletivos e seletivos, dependendo do tipo de amostra e dos microorganismos dos quais eles são suspeitos.

Controle de qualidade

Para controle de esterilidade, é recomendável incubar um ou dois caldos sem inocular. O resultado esperado é um caldo transparente, sem mudança de cor, embora seja normal que uma leve cor rosa seja observada na superfície do tubo.

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Para controle de qualidade, entre 10 a 100 UFC de controles certificados, como Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteróides de vulgatus ATCC 8482.

Incubar a 30-35 ° C em aerobiose por 24 horas até um máximo de 3 dias, uma vez que esses microorganismos são um crescimento rápido.

Em todos os casos, é esperado um bom desenvolvimento, com exceção de Micrococcus luteus e Bacillus subtilis, onde pode haver desenvolvimento moderado.

Para o controle de qualidade do caldo Tioglololato enriquecido com hemina e vitamina K₁, Cepas de controle podem ser usadas Bacteróides de vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 e Bacteróides fragilis ATCC 25285. O resultado esperado é um crescimento satisfatório.

Recomendações

-Às vezes, pode -se observar que a superfície do caldo Tioglicate com indicador se torna rosa; Isto é devido à oxidação do meio ambiente. Se a cor rosa cobrir 30% ou mais do caldo total, poderá ser aquecido em um banho de água por 5 minutos, esfriando novamente e usado.

Isso eliminará o oxigênio absorvido, retornando o meio à sua cor original. Este procedimento só pode ser feito uma vez.

-Para melhorar o crescimento de bactérias aeróbicas, deve ser incubado com a tampa levemente preguiçosa. No entanto, é preferível usar para esse fim um caldo de infusão Cerebro Cerebro ou caldo de soja triptic para o bom desenvolvimento de aeróbes rigorosos.

-O congelamento do meio ambiente ou superaquecimento deve ser evitado, pois ambas as condições danificam o meio.

-A luz direta danifica o meio de cultura, deve ser protegido da luz.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. USP Tioglicolate com indicador. 2015. Disponível em: Labbritania.com.
2. Quos SAS Laboratories. 2019. Tioglicolate caldo. Disponível em: Quios.com.co
3. BD Laboratories Fluid Tioglicolate Medium (FTM). 2003. Disponível em: BD.com/Europa
4. Mídia BBL preparada em tubos para o cultivo de microorganismos anaeróbicos. Tioglicate Media. 2013. Disponível em: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.