Coloração negativa

Imagem de coloração negativa do vírus da gripe a. Fonte: veja a página do autor, Wikimedia Commons

O que é manchada negativa?

O coloração negativa É um método de coloração especial para destacar a presença da cápsula em alguns microorganismos -mas -se Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae e Cryptococcus neoformans-, de amostras clínicas ou culturas puras.

A amostra direta diretamente usada para aplicar a coloração negativa é o fluido cefalorraquidiano. Esta técnica representa uma alternativa rápida para o diagnóstico presuntivo de meningite, especialmente por Cryptococcus neoformans.

Esta coloração pode ser aplicada ao escarro estéril e líquidos em geral, bem como em cepas obtidas de jovens culturas puras. A técnica usa nigrosina ou tinta chinesa para sua execução; portanto, é uma metodologia muito simples e econômica para aplicar que fornece informações de ótimo valor de diagnóstico em pouco tempo.

Nesse sentido, qualquer laboratório está na capacidade de realizar esta coloração. Obviamente, o laboratório deve ter um pessoal competente, capaz de reconhecer as leveduras do Cryptococcus neoformans isolado ou em gemação e diferencie -os de leucócitos e artefatos que a amostra pode apresentar.

Base

A nigrosina e a tinta chinesa agem de maneira semelhante, para que qualquer uma de qualquer uma delas possa ser usada indistintamente.

Esta técnica é chamada de coloração negativa porque age contrária ao restante das técnicas de coloração. Nisso, o que está sem tingir é a estrutura que está sendo procurada ou que você deseja ver, isto é, microorganismos.

Portanto, a coloração é baseada no tingimento do fundo da mancha em uma cor escura. Nesse cenário, as estruturas capsuladas destacarão em luz ou incolor.

Geralmente, as leveduras são observadas, cercadas por uma halo claro que corresponde à cápsula. Isso ocorre porque a tinta chinesa e a nigrosina são substâncias incapazes de penetrar no polissacarídeo que forma a cápsula dos microorganismos vivos.

Pode atendê -lo: fermentação butírica

Deve -se notar que outras estruturas que podem estar presentes na amostra direta, como leucócitos ou glóbulos vermelhos também.

Agora, se os microorganismos estiverem mortos, a tintura pode penetrar neles, para que essa coloração também seja útil para avaliar a viabilidade dos microorganismos.

Técnica

Materiais

Nigrosina

A nigrosina deve seu nome à cor preta que tem. É uma substância sintética obtida a partir do aquecimento da mistura de compostos orgânicos -como nitrobenzeína, anilina e hidroclorito -usando nessa reação um catalisador (ferro ou cobre).

Tinta chinesa

A tinta chinesa é uma substância usada principalmente pelos asiáticos para escrever, a elaboração de obras de arte e pintura monocromática. É muito popular na cultura chinesa.

É obtido da tinta de lula misturada com carvão em pó, produto da queima de pequenas árvores resinadas.

Também é possível prepará -lo a partir da fuligem da incineração de hidrocarbonetos (óleos vegetais), juntamente com uma geléia de proteína que lhe confere a consistência apropriada para evitar a precipitação de partículas de carvão.

Especificações para amostragem

• Não requer jejum.
• A amostra da amostra, escarro ou líquido estéril deve conter pelo menos 1 ml de volume e deve ser transferido para o laboratório à temperatura ambiente.
• Amostras do CSF ​​e líquidos estéreis devem ser coletados por um médico especializado.
• Também pode ser uma colheita pura de uma tensão suspeita ligada aos patógenos acima mencionados.

Execução da técnica com amostras diretas

• As amostras devem ser centrifugadas, então o sobrenadante é descartado e o sedimento é tomado.
• Uma gota de material centrifugado (sedimento) e uma gota de tinta chinesa ou nigrosina é colocada.
• Deve ser bem misturado e cubra com uma capa, deixando a queda se estender como um bom filme sem exceder as bordas.
• Posteriormente, a preparação do microscópio é montada.
• Se a preparação estiver muito escura, pode ser diluída com água.

Pode atendê -lo: quimiotropismo

Execução da técnica com cepas de cultivo

• Uma porção muito pequena de uma colheita jovem é tomada com uma agulha semeada e se dissolve em uma gota de tinta chinesa previamente colocada em um slide limpo.
• Uma capa é colocada no topo.
• É observado no microscópio 10x e depois em 40x.

Você também pode dissolver uma parte da colônia em água destilada e, a partir daí, faça uma gota e misture com a tinta chinesa. Dessa maneira, a preparação não será tão espessa, possibilitando a observação das estruturas isoladamente. Se houver aglomerações, não será bem observado.

Outra metodologia é a seguinte:

• Coloque uma queda na suspensão em uma extremidade do slide.
• Coloque uma gota de nigrosina no mesmo fim e misture.
• Com a ajuda de outro slide, estenda a amostra como se estivesse fazendo uma mancha hematológica.
• Deixe secar e observar no microscópio.

Observação do microscópio

Primeiro, ele deve ser focado com o alvo 10x para ter uma ampla visão do campo. Posteriormente, você deve procurar se houver espaços claros. Se houver, concentre -se com 40x para ver os detalhes.

Vantagens

• É fácil executar.
• É uma técnica econômica.
• Este método não exige que o esfrega.
• A preparação do afresco não precisa ser seca, para que possa ser observada imediatamente, gerando resultados rapidamente.

Desvantagem

• Uma vez montado, novos preparativos devem ser observados imediatamente. Se eles tiverem permissão para secar, não é mais possível observá -los e um novo.

Pode atendê -lo: auto -fertilização

Tonvening de lenços com tinta chinesa

Outra função que pode cumprir a tinta chinesa está em laboratórios de patologia. Isso é aplicado em amostras de extração cirurgicamente com o objetivo de marcar as margens de ressecção do tumor.

O tecido marcado é pulverizado com ácido acético. Isso atua como um mordente e impede que a tinta saia quando o tecido estiver sujeito a processamento de rotina para preparação de biópsia.

O procedimento consiste em tomar banho no tecido em álcool e xileno e depois incorporado em parafina. Essa marcação orienta o patologista ao observar o tecido, indicando onde está a margem da ressecção cirúrgica ou outro ponto de interesse.

Referências

1. Nigrosina. Recuperado de es.Wikipedia.org.
2. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.PARA.