Tincion of Capsula Foundation and Techniques

O coloração da cápsula É uma técnica de coloração diferencial que possui a propriedade de destacar a estrutura de polissacarídeos que envolve certas bactérias e leveduras chamadas cápsula. É usado em laboratórios clínicos para ajudar o diagnóstico de certas patologias causadas por microorganismos capsulados.

Também é usado em laboratórios de ensino para a demonstração dessa estrutura morfológica para estudantes de carreiras em ciências da saúde, como: medicina, bioanalisia, enfermagem ou citotecnologia, entre outros.

Klebsiella pneumoniae mancha tingida com coloração com cápsula. Método de tinta indiana com safranina. Fonte: а.A.В [domínio público]

Existem várias técnicas simples para demonstrar a presença da cápsula nos microorganismos que a possuem, são: a coloração negativa, a coloração de Anthony e uma variante que combina os dois anteriores dois.

A coloração negativa é usada principalmente nas amostras do LCR quando suspeita a presença de fermento Cryptococcus neoformans. Este fermento é uma causa frequente de meningite.

Esta técnica usa nigrosina ou tinta chinesa e baseia -se na criação de um contraste entre o fundo da preparação e a cápsula impenetrável do microorganismo. O fundo é tingido escuro e a cápsula é incolor. Dessa maneira, essa estrutura é destacada.

Quanto à técnica de Anthony, pode -se dizer que ela é usada principalmente nos laboratórios de ensino para demonstrar a estrutura de polissacarídeos em bactérias como Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae e Neisseria meningitidis.

O uso dessa técnica para fins de diagnóstico é muito raro, pois existem outros testes de rotina que permitem que esses microorganismos sejam identificados.

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Base

A cápsula é uma estrutura forte de natureza de polissacarídeo. Isso protege microorganismos de fagocitose e, portanto, é uma estrutura difícil de penetrar.

É por isso que as cápsulas de cápsulas são baseadas em contraste. Os corantes mancham o fundo da preparação enquanto a cápsula é incolor.

Portanto, com essas técnicas, a cápsula é facilmente reconhecível. Se o microorganismo não tiver uma cápsula, não será distinguível com esse tipo de coloração, porque tudo será tingido da mesma cor.

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Todas as técnicas usadas para colorir a cápsula têm a mesma base, embora usem cores e procedimentos diferentes.

Técnicas parpara a coloração da cápsula

-Anthony Stating

A coloração de Anthony usa o vidro violeta como um corante. Isso tingirá o corpo bacteriano e o fundo violeta de cor.

Por outro lado, 20% de sulfato de cobre é usado. Isso serve como uma solução de lavagem, ou seja, remove o excesso de vidro violeta da preparação, fazendo com que as cápsulas esclareçam, mas sem o corpo bacteriano ou o fundo que perde a cor da cor.

Materiais

- Leite curto.

- Lâmina portátil.

- 1% de vidro violeta.

- 20% de sulfato de cobre.

- Microscópio óptico.

- Óleo de imersão.

Procedimento

Esta técnica consiste em:

1. Cultive o microorganismo no leite de linha de linha por 36 horas.
2. Coloque uma gota da colheita no final de uma folha de suporte de objeto e ao lado de colocar uma gota de vidro violeta, misture e estenda com o final de outro slide.
3. Ao ar livre e não consertar o calor.
4. Lave com 20%de solução de sulfato de cobre, solte ao ar livre.
5. Observe o microscópio com o objetivo de imersão. Procure em direção aos extremos do estendido.

É importante não usar calor ou conserto, ou secar, pois isso danifica a cápsula. Nem Lave com água.

Interpretação

O leite em curto é um excelente meio de cultura, pois fornece os nutrientes necessários para o microorganismo desenvolver uma cápsula proeminente.

Por outro lado, o leite litmolente formará um fundo grosso e compacto que será tingido violeta junto com o corpo bacteriano, mas a cápsula que circunda o microorganismo é incolor. Portanto, um halo claro é observado em torno do corpo bacteriano.

Pode atendê -lo: fatores que afetam a atividade enzimática Representação gráfica na observação microscópica de uma mancha de Klebsiella pneumoniae tingida com a mancha de Anthony. Fonte: Feito pelo autor MSC. Marielsa Gil.

Vantagens

É uma técnica simples para executar. Não requer fixação.

Da mesma forma, deve -se notar que outros meios de cultura podem ser usados, mas o meio com leite é preferido porque tem a vantagem de fornecer cápsulas mais proeminentes.

Desvantagens

É uma técnica um pouco mais trabalhosa do que a coloração negativa e, para a visualização, é necessário aguardar a preparação para secar.

-Coloração negativa

Materiais

- Folhas de deslizamento.

- Meio de cultura com microorganismos.

- Tinta chinesa ou nigrosina.

- Microscópio óptico.

- Salinha fisiológica.

Procedimento

Coloque uma gota de solução salina fisiológica nas cobertas e dissolva uma pequena porção da colheita microbiana. É importante que a preparação não seja muito grossa. Em seguida, coloque uma gota de tinta chinesa ou nigrosina e misture.

Em seguida, uma folha de cobertura é colocada na preparação sem exceder o líquido. É observado no microscópio focado primeiro no alvo 10x e depois passa para 40x.

Esta técnica também pode ser usada nas amostras do CSF ​​diretamente. Isto é, em vez de colocar uma gota de cultura microbiana, uma queda é colocada.

Vantagens

É um método simples de executar e ao mesmo tempo econômico. Não requer fixação ou secagem da preparação.

Desvantagens

Tem como uma desvantagem de que deve ser observado no microscópio antes que a preparação seque, porque se isso ocorrer, os microorganismos se contrairão, o que dificultará a visualização.

Por outro lado, falsos positivos podem ocorrer se o analista for inexperiente, pois os leucócitos geralmente confundem leveduras.

A observação de leveduras com cápsula com a técnica chinesa ou nigrosina deve ser considerada como um diagnóstico presuntivo de Cryptococcus neoformans Até que seja demonstrado com cultivo.

Isso ocorre porque existem outras leveduras que podem ser a causa da meningite e não apenas o Cryptococcus neoformans, como os do gênero Candida e Rhodotorula, bem como outras espécies de Cryptococcus.

Pode atendê -lo: acetil coenzima para

Interpretação

Se houver microorganismos capsulados, será observado um fundo escuro, com corpos transparentes flutuando no líquido, destacando a presença da cápsula.

Cápsula de Cryptococcus neoformans tingidos com tinta chinesa. Fonte: Crédito da foto: provedores de conteúdo (s): CDC/DR. Leanor Haley [domínio público]

-Técnica de tinta indiana

Esta técnica também pode ser feita com nigrosina. É uma combinação das técnicas explicadas anteriormente. Esta técnica usa Violet Crystal e India ou Nigrosine Ink.

O corpo bacteriano toma a cor roxa do vidro violeta porque é carregado negativamente, enquanto a nigrosina color. Se a bactéria tiver uma cápsula, será vista como uma auréola transparente ao redor do microorganismo.

O cristal violeta pode ser substituído por qualquer uma dessas cores: safranina, fucsina básica ou azul de metileno.

Materiais

- Vidro violeta.

- Nigrosina ou tinta indiana.

- Folhas de deslizamento.

- Microscópio.

Procedimento

- Cultivar o microrganismo em um meio de cultura.

- Coloque uma gota da colheita no final de uma folha de slide e ao lado de colocar uma gota de tinta indiana ou nigrosina, misture e estenda com o final de outro slide.

- Ar seco e não conserte o calor.

- Cubra com uma solução de vidro violeta por 1 minuto, lave com água destilada, mas com muita delicadeza (jato macio), solte ao ar livre.

- Observe o microscópio com o objetivo de imersão. Procure em direção aos extremos do estendido.

Interpretação

Um corpo bacteriano violeta e um fundo escuro será observado. A cápsula, se presente, será incolor em torno das bactérias.

Referências

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Técnicas básicas de microbiologia. Observação de bactérias. Reduzir (biologia). Série de Microbiologia. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Coloração básica no laboratório de microbiologia. MediaGraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Disponível em: Medigraphic.com
3. Gil m. Coloração negativa: fundação, técnica, vantagens e desvantagens. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pan -American Editorial S.PARA
5. Tankeshwar a. Mancha da cápsula: princípio, procedimento e resultados. 2019. Guia de Microbiologia Médica. Disponível em: Microbeonline.com