Teste de Voges-Proskauer O que é, Fundação, Preparação, Usos

Ele Teste de Voges-Proskauer É um teste bioquímico usado para ajudar a identificação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae. Especialmente é útil para diferenciar cepas de Escherichia coli de Klebsiella e Enterobacter, entre outras.

O teste é realizado no meio de cultura líquida chamado Red Metil-Voges Proskauer, mais conhecido com o acrônimo RM/VP. Este meio é composto de polipeptona tamponada, glicose, fosfato de dipotássio e água destilada.

Metátil vermelho de Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ VP positivo e negativo, respectivamente. Fonte: Foto tirada pelo autor do MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/3.0)], da Wikimedia Commons

O meio RM/VP atual é uma modificação do meio Clark e Lubs, que originalmente continha menos concentração de peptonos e glicose. Portanto, havia menos quantidade de íons de hidrogênio, necessária para a reação positiva de Voges-Proskauer.

O teste é baseado na capacidade do microorganismo de usar glicose pela rota butilén-glicólica e formar um produto final neutro chamado acetoine, na presença de oxigênio e um pH alcalino.

No meio RM/VP, além de poder revelar o teste de Voges-Proskauer, você também pode revelar o teste vermelho metail.

Base

Fundação do teste de Voges-Proskauer

Os pluripetons presentes no meio fornecem os requisitos nutricionais indispensáveis ​​para o crescimento bacteriano. Por sua parte, a glicose é o principal composto. Muitas bactérias têm a capacidade de metabolizar a glicose e formar ácido pirúvico.

O ácido pirúvico é um ponto médio no metabolismo da glicose e a partir daí cada microorganismo pode seguir caminhos diferentes. Alguns formam ácidos mistos, como ácido lático, ácido acético, ácido fórmico e ácido succínico, e outros formarão produtos neutros, como 2.3-butnediol.

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O teste de Voges-Proskauer revela a capacidade do microorganismo de formar acetil metil carbinol (acetoina), um produto intermediário de 2.3-butnediol nas condições de aerobiose.

A acetoina é reduzida e a forma 2,3-butnediol, mas essa reação é reversível; portanto, se 2,3-butnediol for oxidado. Portanto, o oxigênio é indispensável.

Fosfato de Dipotássio é o tampão que amortece a mistura a um pH 6,9 ± 0,2.

Base para o desenvolvimento da evidência e interpretação

Para mostrar a reação, uma revelação deve ser realizada usando dois reagentes (reagentes Barrit), conhecidos como Voges A e Voges B.

Voges A é uma solução a 5% α-naftol e Voges B é uma preparação de hidróxido de potássio de 40%. Se o hidróxido de potássio não estiver disponível, ele poderá ser substituído por 40% de hidróxido de sódio.

Α-naftol é um catalisador que aumentará a intensidade da cor da reação, o que torna o teste mais sensível. O α-naftol deve sempre ser adicionado primeiro, mexendo o tubo para que o meio entre em contato com oxigênio. Dessa maneira, a presente acetoina é oxidada em diacetil e o 2.3-butnediol é oxidado para formar acetoine, passando para diacetil.

É assim que o α-naftol se juntará ao diacetil, que por sua vez se juntou ao núcleo de guanidina presente no aminoácido arginina, o último dos multipartônios.

Por sua parte, o potássio ou o hidróxido de sódio é responsável por absorver CO₂ E reagir com os peptones. Esta reação origina a formação de uma cor rosa-salmão, claramente visível depois de mexer o tubo muito bem.

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Para que a coloração ocorra instantaneamente, quantidades corretas de diacetil, peptona e α-naftol devem ser misturadas. Se isso não acontecer, o tubo poderá descansar por 15 minutos antes de interpretar.

O teste é geralmente positivo após 2 a 5 minutos, quando você pode ver uma cor rosa fraca. Se deixado em repouso por 30 min a 1 hora, a intensidade da cor será máxima (vermelho intenso).

Um teste negativo será evidenciado quando o caldo estiver amarelo. Após 1 hora, se o teste for negativo, um produto de cor de cobre da reação do hidróxido de potássio no α-naftol pode ser formado.

Preparação

RM/VP do meio

Pesa 17 gr de cultura desidratada e se dissolve em um litro de água destilada. Deixe repousar por 5 minutos. Aqueça até ferver para se dissolver completamente. Sirva 3 a 4 ml em tubos e esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O meio de cultura desidratado é bege e o meio preparado é um âmbar claro.

O pH final do meio é 6,9 ± 0,2.

Voges reagente a

Pese 5 gr de α-naftol e dissolva em 50 ml de álcool etílico (absoluto). Posteriormente, adicionar álcool etílico até enrasar a 100 ml.

VOGES Reagente b

Pesar 40 gr de hidróxido de potássio e dissolver em 50 ml de água destilada em um copo. O vidro deve ser colocado em um banho de água fria para controlar a temperatura, porque no momento da dissolução da preparação, aumenta a temperatura acentuadamente.

Depois que a solução está fria, ela é transferida para uma bola picada e nivelada a 100 ml com água destilada.

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Procedimento de teste de Voges-Proskauer

Para realizar o teste de Voges-Proskauer, um caldo RM/VP é inoculado com o microorganismo em estudo, de uma colheita pura de 18 a 24 horas.

O inóculo não deve ser muito denso. 35-37 ° C são incuba por 24 a 48 horas, embora a incubação por vários dias seja necessária. Cowan e Steel acreditam que 5 dias é o tempo mínimo de incubação necessário para detectar todas as espécies positivas de Voges-Proskauer (VP) da família Enterobacteriae.

Teste revelado

Separe uma alíquota de 1 ml em um tubo e faça o desenvolvimento da seguinte. Misture para ar e deixe ficar de 5 a 10 minutos antes de interpretar. No entanto, se o teste ainda for negativo, deixe -o e observe o tubo após 30 minutos a 1 hora.

A aparência de uma cor vermelha rosa indica que a reação de Voges-Proskauer é positiva. Se o meio permanecer amarelo, a reação é negativa.

A adição da revelação na ordem e quantidade indicada é essencial para evitar falsos negativos.

Usar

O teste de Voges-Proskauer é útil para diferenciar as cepas de E. coli que são vice -presidente negativos, dos gêneros Klebsiella, Enterobacter, Serratia, entre outros, que são vice -presidente positivos.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.

Controle de qualidade

Para testar a qualidade do meio preparado, você pode usar controles controles, incluindo Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium e Esgoto Enterobacter ATCC 13047.

Os resultados esperados são reações positivas de Voges-Proskauer apenas para K. pneumoniae e E. Cloacae. O resto dão reações negativas.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Média MR-VP. Disponível em: www.Britanialab.com