Metade da fundação, preparação, usos e limitações

Ele Metade de ou a fermentação de glicose é um ágar semi-sólido especialmente projetado para o estudo do metabolismo oxidativo e fermentativo de carboidratos em um importante grupo de microorganismos diferente de Enterobacteria, chamado de bacilos negativos não-interérricos.

Foi criado por Hugh e Leifson; Esses pesquisadores perceberam que a mídia convencional para o estudo da produção de ácido a partir de carboidratos não era adequada para esse grupo específico de bactérias.

PARA. Meio do comercial basal. B. Tubos com metade da semeada. Fonte: A e B Fotos tiradas pelo autor MSC. Marielsa Gil.

Isso ocorre porque os bacilos negativos não -entus.

Nesse sentido, o meio de tem características especiais que podem detectar as pequenas quantidades de ácido formadas, tanto por oxidativo quanto fermentativo. Essas diferenças estão relacionadas à quantidade de peptonos, carboidratos e ágar.

Este meio contém menos peptonas e maior concentração de carboidratos, dessa maneira os produtos que alkheat, o meio são reduzidos como resultado do metabolismo das proteínas e a produção de ácidos é aumentado pelo uso de carboidratos.

Por outro lado, a diminuição da quantidade de ágar favorece a disseminação do ácido produzido por todo o meio, além de observar a motilidade.

O meio de é composto de peptona, cloreto de sódio, azul de bromotimol, fosfato de dipotássio, ágar e um carboidrato. O carboidrato mais comum é a glicose, mas outros podem ser usados ​​de acordo com o que você deseja estudar, como lactose, maltose, xilose, entre outros.

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Base

Como qualquer meio de cultura, o ambiente deve conter substâncias nutricionais que garantam o crescimento bacteriano; Essas substâncias são peptones.

Por sua vez, o carboidrato fornece energia e, ao mesmo tempo.

O meio de contém uma razão peptona/carboidrato de 1: 5, diferentemente da mídia convencional de 2: 1. Isso garante que a quantidade de aminas alcalinas formadas a partir da degradação de peptones não neutralize a formação de ácidos fracos.

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Por outro lado, o meio contém cloreto de sódio e fosfato de dipotássio. Esses compostos se estabilizam osmoticamente no meio e regulam o pH, respectivamente. O azul de bromootimol é o indicador de pH, que torna a cor do verde amarelo com a produção de ácido.

Alguns microorganismos podem usar carboidratos por oxidativo ou pela rota fermentativa, enquanto outros não tomam de qualquer maneira.

Isso depende da característica de cada microorganismo. Por exemplo, alguns microorganismos aeróbicos rigorosos podem oxidar certos carboidratos, e os anaeróbios opcionais podem oxidar e fermentar, dependendo do ambiente que os rodeia, enquanto outros não oxidam ou ferem carboidratos (ascarolíticas).

Finalmente, há uma modificação do meio de recomendado pelo CDC que contém uma base especial de com fenol vermelho como indicador.

Processo de oxidação

O processo de oxidação da glicose não requer fosforilação de glicose, como ocorre no processo de fermentação. Nesse caso, o grupo aldeído é oxidado em um grupo carboxil, resultando em ácido glucônico. Por sua vez, isso é oxidado para 2-zo-glicônico.

Este último ou duas moléculas de ácido pirúvico acumulam ou degradam. Este sistema precisa da presença de oxigênio ou um composto inorgânico como um aceitador final de elétrons.

A produção de ácidos por essa rota é mais fraca do que a obtida pela rota fermentativa.

Processo de fermentação

Para fazer a fermentação de glicose por qualquer uma das estradas disponíveis, ela deve primeiro ser fosforilada, tornando-se glicose-6-fosfato.

A fermentação da glicose pode levar várias estradas, a principal é o caminho de embenada-meyerhof-parna da degradação de pentose.

O caminho escolhido dependerá do sistema enzimático que possui o microorganismo.

Via de embden-meyerhof- parna

Na fermentação da glicose por embenias-meyerhof-parna. A partir daí, uma substância intermediária se origina, que é ácido pirúvico.

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A partir daí, vários tipos de ácidos mistos serão formados que podem variar de uma espécie para outra.

Este sistema ocorre na ausência de oxigênio e precisa de um composto orgânico como um aceitador final de elétrons.

Rota do Encoudoroff

Na fermentação da glicose pela rota Intner-Doucoroff, a glicose 6-fosfato vai para o glicone-ᵼ-lactona-6-fosfato e a partir daí é oxidado em 6-fosfogluvato e fosfogluconconato 2-zo-3-dedexi-6,, Para finalmente formar ácido pirúvico. Isso via necessidade de oxigênio para que haja glicólise.

Rota para a degradação do monofosfato de Pentose ou Warburg-Dikens via

Esta rota é um híbrido dos 2 anteriores. Começa semelhante à via de Entner-Doudoroff, mas posteriormente gliceraldeído-3-fosfato é formado como um precursor de ácido piruvico, como é o caso no caminho de Embden-Meyerhof-parna.

Preparação

Pesar:

2 gr de peptone

5 gr de cloreto de sódio

10 gr de d-glucosa (ou carboidrato que será preparado)

0,03 gr de bromotimol azul

3 gr de ágar

0,30 gr de fosfato digotásico

1 litro de água destilada.

Misture todos os compostos, exceto carboidratos e dissolver em 1 litro de água destilada. Aqueça e mexa até se dissolver na íntegra.

Quando o resfriamento a 50 ° C, 100 ml de glicose é adicionado a 10% (filtrado).

Distribua assepticamente 5 ml do meio de tubos de teste com tampa de algodão e autoclavato a 121 ° C, 15 libras de pressão por 15 minutos.

Deixe entrar na posição vertical.

O pH médio deve ser 7, 1. A cor do meio preparado é verde.

Mantenha na geladeira.

Formulários

O meio de é um meio especial para determinar o comportamento metabólico de um microorganismo contra um carboidrato. Especialmente para aqueles que formam ácidos de uma maneira escassa, fraca ou nula.

Semeado

Para cada microrganismo, 2 tubos de. A colônia é tomada com uma alça reta e uma punção é feita no centro do tubo sem chegar ao fundo; Você pode fazer várias punções, desde que não esteja interessado em observar a motilidade.

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A um dos tubos é adicionado uma camada de vaselina líquida estéril ou parafina fundida estéril (aproximadamente 1 a 2 ml) e é rotulada com a letra "f". O outro tubo é deixado original e rotulado com a letra "O". Ambos os tubos são incubados a 35 ° C e são observados diariamente até 3 a 4 dias.

Interpretação

Metabolismo e produção de gás

Tabela: Classificação de microorganismos de acordo com seu comportamento nos tubos abertos (oxidativos) e fechados (fermentativos) (fermentativos)

Fonte: Feito pelo autor do MSC. Marielsa Gil

O gás é observado com a formação de bolhas ou deslocamento do ágar.

Deve -se notar que um organismo que apenas oxida a glicose, mas não o fermento, não pode fermentar outros carboidratos, em qualquer caso apenas oxidam. Portanto, nesta situação, o tubo selado será omitido para o estudo de outros carboidratos.

Motilidade

Além disso, no meio da motilidade pode ser visto.

Motilidade positiva: Crescimento que não se limita à zona de inoculação. Há crescimento em direção às laterais do tubo.

Motilidade negativa: Crescimento apenas no inóculo inicial.

Controle de qualidade

Como controles de qualidade, você pode usar as seguintes cepas: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Moraxella sp. Os resultados esperados são:

1. coli: Fermentador de glicose (tubos amarelos e gasosos).
2. Aeruginosa: Oxidador de glicose (tubo aberto amarelo e vedação verde ou azul).
3. Moraxella SP: Não remevação (tubo aberto verde ou azul, tubo de vedação verde).

Limitações

-Alguns microorganismos não podem crescer no ambiente de. Nesses casos, o teste é repetido, mas para o soro médio de 2% ou 0,1% do extrato de levedura.

-As reações de oxidação são frequentemente observadas próximas à superfície e o restante do meio pode ser verde, da mesma maneira que é considerado positivo.

Referências

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3ª ed. Editorial pan -americano. bons ares. Argentina.
4. Laboratórios Francisco Soria Melguizo. 2009. De meio de glicose. Disponível em: http: // f-soria.é
5. Laboratórios de Conde Pronadisa. Meio de glicose. Disponível em: Condalab.com
6. BD Laboratories. 2007. De meio basal. Disponível em: BD.com