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Ele Minha metade É um teste bioquímico usado para ajudar a identificação de espécies de bactérias pertencentes à família Enterobacteriace. É bastante nutritivo e é composto de glicose, extrato de levedura, peptona, tripteina, l -enornitina.

O significado de sua sigla (mina) descreve cada um dos parâmetros que podem ser observados neste meio; Motilidade, indol e ornitina. Motilidade é a capacidade do microorganismo de se mover pela presença de flagelos. Para que esta propriedade seja observada, a consistência do meio deve ser semi -sólida, portanto a preparação carrega menos quantidade de ágar.

Esquema de interpretação dos resultados na mina média. Fonte: Preparado pelo autor MSC. Marielsa Gil

A produção indol evidencia a presença da enzima triptofanasa que atua no aminoácido triptofano, sendo necessário para usar um reagente revelador para tornar visível a produção de indole.

Finalmente, a ornitina determina se as bactérias são capazes de descarboxilares.

Base

Peptona, extrato de levedura e triptein

Esses elementos contribuem para o poder nutricional deste meio. Eles servem como fonte de nutrientes e aminoácidos essenciais para o desenvolvimento bacteriano.

Além disso, a tripteina é uma fonte de triptofano para demonstrar a presença da enzima triptofanasa, que degrada o triptofano devido.

O indol é incolor, portanto, sua presença é revelada adicionando cinco gotas do reagente Ehrlich ou Kovacs, ambos com p-dimetilaminobenzaldeído.

O grupo aldeído deste composto reage com o indol, gerando um produto em forma de vermelho da fúcsia na superfície do ágar.

Qualquer vestígio de cor deve ser considerado como um teste positivo. O teste deve ser lido imediatamente, já que a cor degrada.

Por outro lado, esse teste deve ser revelado depois de ter notado os resultados da motilidade e descarboxilação da ornitina.

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Interpretação

Teste positivo: Formação de um anel vermelho de Fuchsia ao adicionar as gotas de reagentes de Kovacs.

Teste negativo: Não há formação de anel.

Motilidade

A capacidade da bactéria da mudança será evidência.

Um teste de motilidade negativo será evidenciado pela observação de uma fina linha de crescimento, e tudo estará sem crescimento.

É importante que a motilidade seja lida antes da revelação.

Nas bactérias móveis, mas de crescimento lento, é difícil demonstrar sua motilidade com este meio. Nesse caso, é recomendável usar outros testes ou métodos, como a motilidade média ou o método de queda pendente.

Glicose

A glicose é carboidrato fermentável que, além de fornecer energia, acidifica o meio, uma condição necessária para que a descarboxilação do aminoácido ornitina possa ocorrer.

A fermentação da glicose sempre deve ocorrer, com base no princípio de que todas as bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae fermentam a glicose.

L -ONITIN

No caso de as bactérias produzirem a enzima ornitina descarboxilase, pode agir assim que o meio for acidificado pela fermentação da glicose.

A enzima ornitina descarboxilase atua no grupo carboxil do aminoácido produzindo uma amina chamada putresina que alkheies o meio novamente.

Este teste deve ser lido após 24 horas de incubação, porque se você tentar ler antes que possa entender mal o teste com um falso negativo.

Lembre -se de que a primeira reação que ocorre é a fermentação da glicose; portanto, o meio se torna amarelo em uma fase inicial (primeiros 10 a 12 horas). Se a descarboxilação da ornitina ocorrer posteriormente, o meio ficará roxo.

É importante interpretar o teste de descarboxilação da ornitina antes de revelar o indole, uma vez que o agregado do reagente Kovacs modifica a cor do meio.

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Interpretação

Teste negativo: meio amarelo ou amarelo.

Teste positivo: Metade completamente roxa.

Indicador de pH

Nesse caso, é usado o roxo de bromocresol; a pessoa encarregada de revelar quando há uma mudança de pH no meio. Ao acidificar, o indicador fica amarelo e quando os alcalinários ele se torna roxo.

Técnica semeada e revelada

Para semear o meio meu, uma agulha reta ou uma parte da colônia para estudar é coletada com ela.

Uma punção profunda é feita no meu meio em uma linha reta. Não é aconselhável.

Incubar por 24 a 48 horas a 37 ° C em aerobiose. Observe os resultados nesta ordem: motilidade, descarboxilação da ornitina e finalmente revelam o indole.

É aconselhável levar 2 ml para o meio, transferir -o para um tubo estéril e executar o teste indol lá; portanto, se der negativo, o restante do tubo original pode ser incubado por mais 24 horas, para revelar o indole novamente.

O desenvolvimento do indole é feito da seguinte. Observa -se se um anel vermelho de Fuchsia aparece ou não.

Preparação

Minha metade

Pese 31 gr em meu ambiente e se dissolve em um litro de água destilada.

Aqueça até a mistura ferver por um minuto, mexendo frequentemente até que você dissolva completamente o ágar. Distribua 4 ml do meio em 13/100 tubos de teste com tampa de algodão.

Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Remova da autoclave e deixe ficar reto em choque, para que um taco semi -sólido seja formado.

Armazene em uma geladeira de 2-8 ° C. Deixe um temperamento antes de semear a tensão bacteriana.

A cor do meio desidratado é bege e a do médio preparado roxo ligeiramente opalescente.

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O pH final do meio preparado é de 6,5 ± 0.2

O meio fica amarelo com pH ácido e é roxo a pH alcalino.

Kovacs reativo (desenvolvedor de testes Indol)

Este reagente é preparado da seguinte maneira:

150 ml de amil, isoamil ou álcool butílico são medidos (qualquer um dos três). 10 gr de p-dimetilaminobenzaldeído se dissolve. Posteriormente, 50 ml de ácido clorídrico concentrado são adicionados lentamente.

O reagente preparado é incolor ou amarelo claro. Deve ser armazenado em garrafa de âmbar e preservado na geladeira. Uma cor marrom escura mostra sua deterioração.

Além disso, o reagente Kovacs pode ser substituído pelo reagente Ehrlich. O último, porque é mais sensível, é preferido revelar o indol em bactérias que o produzem em quantidades mínimas, como em alguns bacilos negativos não fermentados e certos anaeróbios.

Usar

Este meio é um teste que complementa uma bateria de testes bioquímicos para a identificação das bactérias pertencentes à família Enterobacteriace.

Os dados de descarboxilação da ornitina servem para diferenciar Shigella Sonnei, Isso dá positivo, de Shigella Boydii, Shigella Flexneri e S. Disenterieae, Eles dão negativo.

Também diferencia o gênero Klebsiella, que dá negativo, do gênero Enterrobacter, onde a maioria de suas espécies dá positivo.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.

Controle de qualidade

Toda vez que metade minha é preparada, um teste de controle pode ser realizado. Para isso, cepas conhecidas ou certificadas são usadas para observar o comportamento do meio.

As cepas que podem ser usadas são Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes e Proteus mirabilis.

Os resultados esperados são E. coli e m. Morganii. Dan M: +, I: + e O: +.

Klebsiella pneumoniae Dê tudo negativo (m:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis e Enterobacter Aerogenes Dan M:+ I:- e O: +.

Referências

1. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3ª ed. Editorial pan -americano. bons ares. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.