Fundação, equipamento, tipos de cromatografia líquida de alta eficácia (HPLC)

O Cromatografia líquida de alta eficiência É uma técnica instrumental usada em análise química com a qual é permitido separar misturas, purificar e quantificar seus componentes, além de executar outros estudos. É conhecido na abreviação HPLC, derivada do inglês: Cromatografia líquida de alta performance.

Assim, como o seu nome aponta, funciona manipulando líquidos. Eles consistem em uma mistura composta pelo analito ou da amostra de interesse e um ou mais solventes que atuam como fase móvel; Ou seja, aquele que arrasta o analito por toda a equipe da HPLC e da coluna.

Equipamento HPLC. Fonte: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/4.0)]

A HPLC é amplamente disseminada por laboratórios de análise de qualidade em inúmeras empresas; como farmacêuticos e comida. O analista em questão deve preparar a amostra, a fase móvel, verificar a temperatura e outros parâmetros e colocar as estradas dentro da roda ou carrossel para que o equipamento execute as injeções automaticamente.

O equipamento HPLC é acoplado a um computador pelo qual os cromatogramas gerados podem ser observados, além de iniciar a análise, controlar o fluxo da fase móvel, programar o tipo de eluição (isocrática ou por gradiente) e ativar os detectores (UV -Vis ou o espectrofotômetro de massa).

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Base

Ao contrário da cromatografia líquida convencional, como papel ou coluna recheada com sílica em gel, a HPLC não depende da gravidade para que o líquido enlouqueça a fase estacionária. Em vez.

Dessa forma, não é necessário.

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Mas a eficiência dessa técnica não se deve exclusivamente a esse detalhe, mas também às pequenas partículas de preenchimento que compõem a fase estacionária. Sendo menor, sua área de contato com a fase móvel é maior, portanto, interagirá em melhor grau com o analito e suas moléculas serão mais separadas.

Essas duas características, além do fato de a técnica permitir o acoplamento do detector, tornam a HPLC muito maior que a cromatografia fina ou de camada de papel. As separações são mais eficientes, a fase móvel se move melhor através da fase estacionária e os cromatogramas permitem detectar alguma análise na análise.

Equipamento

Diagrama simplificado da operação de um equipamento HPLC. Fonte: Gabriel Bolívar.

Um diagrama simplificado é mostrado acima como uma equipe de HPLC funciona. Os solventes são encontrados em seus respectivos recipientes, dispostos com mangueiras para a bomba transportar um pequeno volume deles para o equipamento; Temos a fase móvel.

A fase móvel ou eluente deve ser usada primeiro, para que as bolhas não afetem a separação das moléculas do analito, que são misturadas com a fase móvel depois que o equipamento fizer as injeções.

A coluna cromatográfica está localizada dentro de um forno que permite regularizar a temperatura. Assim, para diferentes amostras, existem temperaturas adequadas para obter separações de alto desempenho, bem como um amplo catálogo de colunas e tipo de recheio ou fases estacionárias para análise específica em análise específica.

A fase móvel com o analito dissolvido entra na coluna, e a partir dela primeiro eluça as moléculas que "sentem" menos afinidade pela fase estacionária, enquanto eluam aqueles que mais são retidos por ela. Cada molécula de eluida gera um sinal visualizado no cromatograma, onde os tempos de retenção das moléculas separadas são observadas.

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E por outro lado, a fase móvel depois de passar pelo detector termina em um recipiente de resíduos.

Tipos de HPLC

Existem muitos tipos de HPLC, mas entre todos eles os mais destacados são os quatro seguintes.

Cromatografia em fase normal

A cromatografia de fase normal refere -se a onde a fase estacionária é a natureza polar, enquanto o celular apolar. Embora seja chamado normal, de fato é o menos usado, sendo a fase inversa a mais difundida e eficiente.

Cromatografia em fase inversa

Sendo uma fase inversa, agora a fase estacionária é apolar e a fase móvel polar. Isso é especialmente útil na análise bioquímica, pois muitas biomoléculas se dissolvem melhor em solventes de água e polares.

Cromatografia em troca iônica

Nesse tipo de cromatografia, o analito, com carga positiva ou negativa, move -se pela coluna que substitui os íons que ela abriga. Quanto maior a carga, maior sua retenção, por isso é amplamente usada para separar os metais de transição de íons.

Cromatografia de exclusão molecular

Essa cromatografia, em vez de se separar, é responsável por purificar a mistura resultante. Como o nome indica, o analito é separado não mais dependendo de quão relacionado à fase estacionária, mas de acordo com seu tamanho e massas moleculares.

As menores moléculas serão mais retidas do que moléculas grandes, pois as últimas não estão presas entre os poros dos recheios poliméricos das colunas.

Formulários

HPLC permite uma análise qualitativa e quantitativa. No que diz respeito ao qualitativo, ao comparar os tempos de retenção do cromatograma sob certas condições, a presença de um determinado composto pode ser detectado. Essa presença pode ser indicativa de uma doença, adulteração ou uso de drogas.

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Portanto, é uma equipe faz parte dos laboratórios de diagnóstico. Da mesma forma, está dentro das indústrias farmacêuticas, pois permite verificar a pureza do produto, bem como a qualidade do mesmo que diz respeito à sua dissolução no ambiente gástrico. Os materiais de partida também se submetem à HPLC para purificá -los e garantir um melhor desempenho na síntese de drogas.

O HPLC permite analisar e separar misturas complexas de proteínas, aminoácidos, carboidratos, lipídios, porfirinas, terpenóides e, em essência, é uma excelente opção trabalhar com extratos de plantas.

E, finalmente, a cromatografia de exclusão molecular permite selecionar polímeros de tamanhos diferentes, pois alguns podem ser menores ou grandes. Dessa maneira, são obtidos produtos com massas moleculares médias baixas ou altas, sendo esse um fator determinante em suas propriedades e aplicações ou síntese futuras.

Referências

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