Caldo de tetracionato o que é, fundamento, preparação, usa

Ele Caldo de tetracionato O caldo TT é um meio de cultura líquida seletiva para o enriquecimento e recuperação de cepas do gênero Salmonella. Foi criado por Müeller e mais tarde modificado por Kauffmann, então há aqueles que o chamam de Müeller-Kauffmann, caldo.

O meio original continha proteína Peptonas, carbonato de cálcio e tiossulfato de sódio. Kauffmann adicionou sais biliares e criou outra modalidade com verde brilhante. Essas substâncias inibem o crescimento dos coliformes, deixando o meio livre para o desenvolvimento de bactérias patogênicas, neste caso Salmonella.

Agregado da solução iodure iodure para o caldo tetrationato. Fonte: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/4.0)]

A modificação foi muito bem -sucedida porque a sensibilidade do meio aumentou significativamente. Portanto, atualmente é útil para a busca de salmonelas em qualquer tipo de amostra, mas especialmente para fezes sólidas ou líquidas.

Sua preparação consiste em duas fases; O meio comercial é uma base para a preparação do caldo tetrationato e, posteriormente, para que o tetrationato possa ser formado uma solução iodure que completa o meio.

A Associação Americana de Saúde Pública (APHA) recomenda o uso do caldo de tetracionato suplementado com verde brilhante para o enriquecimento de amostras em busca de Salmonella, pois é mais seletivo que o caldo de tetracionato e o caldo de selenito.

Em geral, o caldo de tetrationato é ideal quando suspeita a presença de bactérias do gênero Salmonella em pequenas quantidades ou que são maltratadas pela exposição a substâncias inibitórias ou por processos industriais que minimizam sua viabilidade.

Base

Os peptonos presentes correspondem à caseína digerática e à digreda DIGREAL PEPTIC TECTICE PEPTIC. Eles fornecem a fonte de carbono, nitrogênio e nutrientes em geral para o crescimento bacteriano.

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Por sua vez, o tiossulfato de sódio reage com a solução de iodeto para formar tetrationato. Isso inibe o crescimento de coliformes e favorece o desenvolvimento de bactérias que contêm a enzima tetrationato redutase, entre elas é a salmonela de gênero, mas também proteus.

Os sais biliares também atuam como uma substância inibitória da maioria das bactérias Gram positivas e um pouco de grama negativo (coliformes).

O carbonato de cálcio absorve as substâncias tóxicas geradas pela decomposição de tetrationato, que forma ácido sulfúrico. Nesse sentido, o carbonato de cálcio neutraliza a acidez, mantendo o pH do meio estável.

No caso da modalidade com verde brilhante, essa substância aumenta o poder seletivo do caldo de tetracionato inibindo outros microorganismos que não sejam o gênero Salmonella.

Preparação

-Caldo de tetracionato

Solução de iodo iodurada

Pesar:

• 6 gr de iodo.
• 5 gr de iodeto de potássio.

O iodeto de potássio se dissolve em aproximadamente 5 ml de água destilada estéril, então o iodo é adicionado pouco a pouco enquanto a mistura é aquecida. Depois de se dissolver completamente, está nivelado com água destilada estéril até atingir um volume final de 20 ml.

Meia base para caldo de tetrationato

Pese 46 gramas do meio desidratado e suspenda em 1 litro de água destilada estéril. Misture e aqueça até sua dissolução total, pode levar apenas por alguns minutos. Não esterilize em autoclave. A base do meio é permitida esfriar até 45 ° C aproximadamente e, naquele momento.

Depois de adicionar a solução iodurada ao meio, ela deve ser usada imediatamente. Se você não quiser usar a mistura inteira, prossiga da seguinte maneira:

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10 ml do meio base são distribuídos em tubos e apenas para aqueles que serão inoculados com amostras são adicionados 0,2 ml da solução iodurada.

Aqueles que não serão usados ​​ainda podem ser salvos na geladeira, no entanto, pois o meio não é esterilizado, o ideal é preparar a quantidade exata necessária.

A cor do meio antes de adicionar a solução de iodeto de iodeto é branca leitosa com precipitado branco e depois do agregado é marrom com um precipitado denso. O precipitado observado é normal e corresponde ao carbonato de cálcio que não é dissolvido. O pH final do meio é 8,4 ± 0,2.

-Variante de caldo de tetracionato com verde brilhante

Para preparar o caldo de tetrationato com verde brilhante, todas as etapas descritas acima são executadas, mas adicionalmente será adicionado à mistura da solução verde brilhante a 0,1% preparada.

Verde brilhante

Esta solução é preparada da seguinte maneira:

Pesar 0,1 gr de verde brilhante e suspender em 100 ml de água destilada. Aqueça até ferver para alcançar sua dissolução total. Salvar em garrafa âmbar.

Usar

Para amostras de fezes (Coprounture), o protocolo é o seguinte:

Inocular 1 gr de fezes sólidas ou 1 ml de fezes líquidas em um tubo com 10 ml de caldo de tetracionato pronto para uso. Estique fortemente e incubar aerobiose a 43 ° C por 6-24 horas.

Posteriormente, pegue uma alíquota de 10 a 20 µl de caldo e suba em um meio seletivo para Salmonella, como Agar SS, Agar XLD, ágar verde brilhante, Hektoen entérico Agar, entre outros.

Paralelamente, os meios seletivos para Salmonella devem ser inoculados com a amostra direta (fezes) sem enriquecimento. Para amostras de swab retal, faça o download do material coletado no tubo e prossiga da maneira descrita acima.

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Para amostras de alimentos, pesam 10 gr de alimentos sólidos ou 10 ml de alimentos líquidos e inocular uma garrafa com 100 ml de caldo de tetracionamento pronto para uso. Prosseguir da mesma maneira que o descrito acima, mas incubar 37 ° C.

Como pode ser visto, a relação entre a amostra e o caldo sempre será 1:10.

Controle de qualidade

Para testar o meio de cultura, você pode usar linhagens conhecidas. Os mais utilizados são as cepas certificadas ATCC.

As cepas para usar são Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella aby DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Para cepas de Salmonella, é esperado um excelente desenvolvimento, enquanto Escherichia coli Pode ter desenvolvimento fraco ou regular, e as cepas gram -positivas (Enterococcus e Staphylococcus) são parcial ou totalmente inibidas.

Recomendações

-Como esse meio não inibe o crescimento de proteus, alguns laboratórios geralmente colocam 40 mg/l de novobiocina para evitar o desenvolvimento dessa tensão microbiana. O antibiótico deve ser adicionado antes da solução iodo iodo.

-Depois de preparar o meio, incluindo a solução iodo iodo, ele não deve gastar mais de 2 horas para ser inoculado.

-No momento da distribuição do meio nos tubos, a mistura deve ser homogeneizada continuamente para ressuspensar o precipitado formado.

-Em amostras menos contaminadas, as amostras de 35-37 ° C são incubadas e, em amostras muito poluídas, a incubação a 43 ° C é recomendada.

Referências

1. Mídia BBL. 2005. Preparado em tubo para o cultivo das espécies de Salmonella.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.