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Ele Endo Agar ou endo médio é uma cultura sólida e diferencial e com um certo grau de seletividade. A fórmula original foi criada por endo em 1904 para diferenciar as bactérias fermentárias da lactose não -fermentadora. Inicial Salmonella typhi, Mas mais tarde o objetivo do meio se voltou para a busca por coliformes.

O início do ágar endo permaneceu, mas sua formulação sofreu inúmeras mudanças ao longo dos anos. Atualmente, o meio é composto de tecido animal, lactose, sofling de hidrogênio, sulfito de sódio, fucsina básica e ágar e ágar.

O principal uso do meio tem sido associado ao isolamento e diferenciação de bacilos gram -negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outras famílias próximas.

Por um longo tempo, foi usado na detecção de coliformes em amostras de água, laticínios e comida, mas hoje o uso deste meio foi deslocado por outros de funções semelhantes. No entanto, alguns laboratórios de microbiologia usam esse ágar para isolamento de amostras clínicas.

Base

Endo Agar contém peptonos que servem como fonte de aminoácidos, nitrogênio, carbono e energia, necessários para o crescimento de pequenos microorganismos exigentes.

Por outro lado, o caráter ligeiramente seletivo do ágar é fornecido pelo agregado de sulfito de sódio e fucsina básica; Ambos os componentes inibem parcial ou totalmente o desenvolvimento das bactérias Gram mais positivas.

O caráter diferencial é dado pela presença de carboidratos fermentáveis, que neste caso é lactose e fucsina básica, que também serve como um indicador de pH.

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Bactérias Gram -negativas que crescem neste ágar e são capazes de fermentar a lactose formarão fortes colônias rosa; sendo patognomônico de Escherichia coli A formação de colônias vermelhas escuras com um brilho metálico esverdeado. Isso se deve à alta produção de ácido a partir de fermentação de carboidratos.

Deve -se notar que o meio encontrado ao redor das colônias também transforma uma cor rosa forte. Enquanto Bacilos Gram -negativos não fermentam a lactose, formam colônias rosa pálidas semelhantes às médias ou incolores.

O hidrogênio dopotássio fosfato equilibra o pH do meio e o ágar é o componente que fornece a consistência sólida.

Preparação

Endo Agar

Pese 41,5 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água destilada. Aqueça a mistura mexendo frequentemente até que haja dissolução média total. Esterilize em autoclave a 121 ° C, 15 lb de pressão, por 15 minutos.

Ao remover da autoclave, deixe esfriar até uma temperatura aproximada de 45-50 ° C, agite a mistura para homogeneizar antes de servir. Despeje 20 ml em placas estéreis de Petri.

Deixe solidificar as placas, investir e salvar em placa ou embrulhar com papel escuro antes de salvar na geladeira. É muito importante proteger o ambiente preparado da luz direta. Uma prática recomendada é preparar a quantidade exata a ser necessária.

Se armazenado em uma geladeira, as placas devem poder modificar antes de usar.

O pH médio deve estar entre 7,2 e 7,6 e a cor do meio preparado é uma cor rosa pálida.

Agente M-Endo

Há outra versão do Agar Endo (M-Endo) que segue a fórmula de McCarthy, Delaney e Grasso, que contém mais compostos e varia na forma de preparação.

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Esta variante contém: lactose, triptose, caseína digerida, enzima de tecido animal, cloreto de sódio, fosfato de potássio dibásico, sulfito de sódio, extrato de levedura, fosfato de potássio monobásico, fucos básicos, layout de sódio, laiuril sulfato e agarão.

Nesse caso, 51 gr do meio desidratado está pesando e suspenso em 1 litro de água destilada contendo 20 ml de etanol.

Aqueça levemente enquanto mexer para dissolver completamente o meio. Não deve superaquecer e esterilizar em autoclave. Quando a mistura for homogênea, sirva em placas estéreis de Petri e deixe solidificar.

Usar

Em alguns países, ainda é usado para contar coliformes totais e fecais em amostras de água e alimentos, especialmente a presença de Escherichia coli como o principal indicador de contaminação fecal.

O Agar M-Endo é recomendado pela Associação Americana de Saúde Pública (APHA) para o monitoramento e controle dos programas de desinfecção e tratamento de águas residuais, bem como na avaliação da qualidade da água potável.

O método mais usado é a filtração da membrana, enriquecimento anterior da amostra com caldo de sulfato de Lauril por 2 a 4 horas.

Também pode ser usado como um substituto para o ágar EMB na análise microbiológica de alimentos e água pela técnica de número mais provável (NMP), especificamente na fase confirmatória completa para corroborar a presença de E. coli De caldos EC sombrios.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do estacionamento final da preparação, os controles conhecidos ou certificados são semeados.

Entre as cepas que podem ser usadas para esse fim estão: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Esgoto Enterobacter ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 e Enterococcus faecalis ATCC 11700.

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As cepas são semeadas por exaustão e incubadas a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Os resultados esperados são:

• Para Escherichia coli: Colônias vermelhas fortes, com brilho metálico.
• Para E. Cloacae e K. pneumoniae As colônias devem ser mucoides rosa.
• No caso de S. Typhimurium, s. Flexneri e p. Mirabilis As colônias são geralmente rosa pálido ou incolor.
• Finalmente, E. Faecalis Espera -se que seja parcialmente inibido, portanto, seu crescimento deve ser ruim com colônias rosa muito pequenas.

Limitações

-O meio Endo tem sob poder seletivo, portanto, pode cultivar alguns microorganismos Gram positivos, como Staphylococcus, Enterococcus e até leveduras.

-Outros bacilos não pertencentes à família Enterobacteriaceae podem se desenvolver neste meio, como Pseudomonas sp e Aeromonas sp. As características dessas cepas são colônias irregulares incolores.

-Este meio preparado é muito sensível à luz, portanto, uma exposição prolongada a essa deterioração do sistema indicador, danificando irreversivelmente o ambiente.

-Os componentes médios são considerados carcinogênicos, portanto, o contato direto deve ser evitado.

-O meio desidratado é muito higroscópico e deve ser mantido em seu recipiente original à temperatura ambiente, bem fechado e em um ambiente seco.

Referências

1. BD Laboratories. Endo Agar. Disponível em: BD.com
2. Laboratórios Neogen. Eu sou ágar. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com