Agar TCBS O que é, fundamento, preparação, uso

Ele Agar TCBS É uma cultura sólida altamente seletiva e diferencial, usada para o isolamento e cultivo de bactérias do gênero Vibrio, especialmente Vibrio cholerae, v. Vulnificus e V. Parahaemolyticus Como patógenos principais deste gênero.

O acrônimo TCBS significa citrato biliar de tiossulfato. Este ágar também é conhecido como meio seletivo para vibrar. A fórmula original foi criada por Nakanishi e subsequentemente modificada por Kobayashi.

É composto de extrato de levedura, peptona de carne, tripta, citrato de sódio, tiossulfato de sódio, bile de boi, sacarose, cloreto de sódio, citrato férrico, azul de bromool, azul timol e ágar.

Essa composição permite o desenvolvimento adequado de espécies de vibrios a partir de amostras de água, alimentos e fezes; exceto Vibrio hollisae, Isso não cresce neste meio. Além disso, o meio TCBS é capaz de inibir o crescimento de outras bactérias que o acompanham, especialmente coliformes.

Devido aos graves problemas gastrointestinais e extra-intestinais que algumas espécies do gênero Vibrio produzem, seu diagnóstico é muito importante. O humano é infectado principalmente com o consumo de alimentos crus ou pequenos do mar ou águas contaminadas, mas também através da infecção da ferida.

Por esse motivo, os laboratórios clínicos devem incluir o ágar TCBS no estudo de cópias de amostras de fezes líquidas, especialmente com aparência de água do arroz. Especialmente se o paciente se referir a ter entrado em contato com a água do mar ou ter consumido mariscos ou peixes.

Base

O extrato de leveduras, os peptonos da carne e a tripéna, são a fonte nutritiva deste meio. No entanto, o Agar TCBS é um meio inóspito para a maioria das bactérias.

Sua alta seletividade é dada pelo agregado de citrato de sódio e bile de boi; Ambos são agentes inibitórios que também fornecem um pH alcalino ao meio, restringindo o crescimento da flora que o acompanha e favorecendo o crescimento de V. Cholerae, entre outras espécies. Cabe ressaltar que Vibrio cholerae é muito sensível à acidez.

Por sua vez, o cloreto de sódio equilibra osmoticamente o meio ambiente. Além disso, como sua concentração é alta, também atua como agente inibidor, favorecendo o crescimento de bactérias halófilas.

Tarks é o açúcar fermentável que, juntamente com os indicadores azul -bromotimol azul e azul, dão o caractere diferencial médio. Por esse motivo, com este meio, é possível diferenciar cepas de fermentação de não -fermentação.

As colônias das cepas fermentárias de sacarose se desenvolvem em cores e transformarão o meio de verde para amarelo pela produção de ácidos. A translúcida não fermentando cresce e o meio restos da cor original (verde).

Da mesma forma, este meio contém tiossulfato de sódio como fonte de enxofre e citrato férrico como um agente revelador. Ambos mostram bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio (gás incolor). O h₂S é formado a partir de tiossulfato e depois reagindo com citrato férrico, é formado um precipitado preto visível.

Finalmente, o ágar é o que fornece a consistência sólida ao meio ambiente.

Preparação

Pese 89 Gr do meio desidratado e se dissolve em um litro de água destilada. Ajude a dissolução para aquecimento e agitação frequentes. A mistura pode ser fervida por até 2 minutos.

Este meio não é autoclava. Após sua solução, é servido diretamente em placas estéreis. Ao solidificar, eles são ordenados de maneira invertida nas plaquetas e são armazenados na geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O meio após preparado deve estar em pH 8,6 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é bege claro ou verde bege, e a cor do meio é a floresta verde ou verde azul.

É importante deixar as placas modelarem antes de semear as amostras.

Usar

A amostra mais comum para isolamento vibra.

As amostras de fezes não podem ser semeadas imediatamente no ambiente seletivo, elas devem ser transportadas no meio de Cary Blair.

Para aumentar a sensibilidade da colheita, as fezes podem ser passadas pela água Peptonada para pH 8,4 como um meio de enriquecimento por 8 horas no máximo, a partir daí é subjetivo ao meio TCBS.

Também deve -se ter em mente que algumas cepas vibrantes podem causar septicemia em pacientes imunossuprimidos; portanto, eles podem ser isolados de culturas sanguíneas. Da mesma forma, amostras de alimentos e alimentos do mar podem ser analisadas quando houver surtos epidêmicos da doença da cólera.

Semeado

O inóculo da amostra em estudo deve ser proeminente, a semeada é realizada pelo método de acaso de exaustão. As placas são incubadas a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

As colônias presuntivas de Vibrio cholerae São bordas médias, lisas, opacas, finas e amarelas, porque fermentam a sacarose.

Da mesma forma, cultive espécies de V. Alginolyticus, V. rio, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii e alguns V. Vulnificus. Outras espécies clinicamente importantes, como V. Parahaemolyticus Eles não fermentam sacarose, desenvolvendo -se como colônias verdes de oliveira.

Por outro lado, deve -se ter em mente que algumas cepas de aeromônios e plesiomonas que são oxidase (+) podem crescer neste meio, desenvolvendo colônias amarelas que podem confundir o clínico. Enquanto algumas cepas de pseudomonas também oxidase (+) crescem como colônias verdes e também V. Parahaemolyticus.

Limitação

O teste da oxidase positivo para o gênero Vibrio nunca deve ser realizado de colônias obtidas do ágar TCBS, uma vez que o resultado obtido será um falso negativo. Os compostos do meio interferem fortemente neste teste. Portanto, isso deve ser feito de indivíduos em ágar de sangue.

Controle de qualidade

Para provar que o meio está em boas condições, é aconselhável.

Para isso, você pode usar cepas de:

-Vibrio cholerae - Crescimento satisfatório (colônias amarelas, borda translúcida).

-Vibrio parahaemolyticus - Crescimento satisfatório (colônia com centro verde e borda translúcida).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Crescimento satisfatório (colônias amarelas com halos da mesma cor ao redor da colônia).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Inibição total ou parcial (pequenas colônias amarelas ou translúcidas).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Inibição parcial ou total (colônias azuis).

-Escherichia coli ATCC 25922 - inibiu completamente.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Inibição total ou parcial. (Pequenas colônias Green Edge Translúcida Edge).

A incubação de um meio sem inocular não deve ter uma mudança.

Referências

1. BD Laboratory. Bd. Agar TCBS. Disponível em: BD.com
2. Laboratórios da Britânia. TCBS médio. Disponível em: Britanialab.com