Cabeça de Czapek, preparação, usos e limitações

Ele Agar Czapek (CZA) é um meio de cultura sólida seletiva projetada especialmente para o cultivo de bactérias e saprófitos fungos. Foi criado pelo botânico Friedrich Johann Franz Czapek, de origem polonesa, e pelo químico americano Arthur Wayland Dox; É por isso que esse ágar também é conhecido como Czapek-Dox Half.

O meio original era líquido, mas o ágar posterior foi adicionado para fazer um meio sólido. O meio czapek é composto de nitrato de sódio, fosfato bipossico, sulfato de magnésio, cloreto de potássio, sulfato ferroso, sacarose, ágar e água destilada.

Czapek a. Aspergillus parasiticus b. Aspergillus Fumigatus Fonte: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/4.0)]/ b. Foto: dr. David Midgley. Wikipedia.com

O ágar Czapek é 7.3, mas há uma variante à qual é adicionado a 10% de ácido lático cujo pH é 3,5. Este meio ácido é usado para o cultivo de microorganismos acidosfílicos.

Por outro lado, algumas casas comerciais modificaram a composição do ágar Czapek alterando o sulfato de magnésio e fosfato bipossico por glicofosfato; Esta modificação impede o precipitado de fosfato de magnésio observado com a fórmula convencional. Da mesma forma, há outra variante à qual o extrato de levedura é adicionado.

Finalmente, o ágar Czapek é recomendado pela APHA da Associação Americana de Saúde Pública para o Estudo de Actinomycetes SP, Aspergillus sp, Paecilomyces sp e Penicillium sp. Essas espécies são caracterizadas por serem microorganismos ambientais e patógenos oportunistas.

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Base

Este meio contém sacarose; Este carboidrato serve como fonte de carbono, enquanto o nitrato de sódio é a fonte de nitrogênio, mas, diferentemente de outros, o nitrogênio fornecido é o tipo inorgânico.

Por esse motivo, o meio czapek é considerado seletivo, porque só pode desenvolver microorganismos capazes de usar compostos inorgânicos como a única fonte de nitrogênio.

Como uma substância reguladora da osmolaridade média é o fosfato bipostásico. Por outro lado, sulfato de magnésio, cloreto de potássio e sulfato ferroso fornece minerais essenciais para o crescimento de microorganismos saprófitos (vida livre). Com esta fórmula, um precipitado de fosfato de magnésio é formado.

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Finalmente, a adição de ágar é o composto que fornece a consistência sólida ao meio ambiente e a água é o solvente de todos os componentes.

Com a fórmula de ágar Czapek modificada, não há formação de precipitados e melhora o crescimento no crescimento de alguns fungos.

A extrema acidez do ágar ácido czapek faz disso um meio mais seletivo, permitindo apenas o crescimento de microorganismos acidofílicos, capaz de usar nitrogênio inorgânico. Enquanto, Czapek-Levadura Agar melhora o desempenho de certos fungos.

Preparação

Meio czapek-dox

Pesa 49 gr de cultura desidratada e dissolva em água destilada. Aplicar calor para ferver. Agite a mistura com frequência até se dissolver completamente.

-Agar Czapek

Distribua a mistura dissolvida em tubos e autoclavados a 121 ° C por 15 minutos. Ao remover da autoclave, homogeneize antes de dormir e deixe solidificar.

-Placas de ágar Czapek

Autoclavado A mistura dissolvida a 121 ° C por 15 minutos e ao deixar esfriar a 50 ° C, homogeneizando e despejando 20 ml em Petri estéril. Deixe solidificar, investir e salvar na geladeira até usar.

O pH deve ser 7,3 ± 0,2. A cor do meio desidratada é branca e preparada é âmbar leve, ligeiramente nublado devido à presença de um precipitado floculante.

Meio czapek um pH ácido

Prepare -se conforme descrito, mas adicionando 10 ml de ácido estéril estéril a 10% para cada litro de meio preparado. O meio czapek modificado deve estar em pH 3,5 ± 0,2.

Czapek meio modificado

Pese 45,4 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água. O restante da preparação é igual ao descrito acima. A cor do meio desidratada é branca e preparada é a cor esbranquiçada. O pH final do meio é de 6,8 ± 0,2.

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Meio Czapek-Levadura

Também chamado de extrato Czapek de levedura (CYA). Contém os elementos do clássico Agar Czapek Plus Fervent Extract.

Usar

O meio czapek é usado para procurar microorganismos saprófitos em amostras de solo, vegetais, grãos, ar, insetos, entre outros.

Czapek Um ágar ácido é usado para o crescimento de microorganismos acidosfílicos, enquanto o ágar Czapek modificado é especialmente útil para a formação de clamidosporos em espécies complexas Candida Albicans.

Finalmente, o ágar Czapek -Levadura é muito útil para o isolamento de Aspergillus e Penicillium.

Semeado

-Agar Czapek

Para procurar actinomicetos no solo, prossiga da seguinte. Incubados a 28 ° C por 5 a 7 dias.

Para amostras de vegetais, grãos e insetos, eles são colocados diretamente no ágar. As diluições também podem ser feitas e semear 0,1 ml na superfície do ágar.

-Agar Czapek modificado

Para a semeada, é usada uma mão ou agulha reta, ela é permeada com o swab e inocula a colher fazendo um punção até tocar a base da placa. Incubar por 24 horas a 28 ° C e examinar com um microscópio acima e abaixo da placa para observar se os clamidosesporos se formaram.

Temperatura e tempo de incubação

O tempo de temperatura e incubação variam dependendo do tipo de microorganismo que se procura isolar. Normalmente, as placas são incubadas em uma a duas semanas em uma faixa de temperatura de 20 a 25 ° C.

No entanto, existem condições específicas para algumas cepas. Por exemplo, a maioria das espécies do gênero Aspergillus tem um crescimento ideal a 30 ° C; porém PARA. Fumigatus crescer a 50 ° C.

Quanto ao tempo de incubação, uma ou duas semanas é normal, no entanto Candida Albicans Pode se desenvolver em 24 a 48 horas a 25 ° C.

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Características de algumas colônias neste meio

-Penicillium atraveNetum

Ocorre em 12 dias de incubação a 27 ° C. Suas colônias são pequenas (25 mm).

As colônias parecem velocoras, com uma borda branca definida e no centro, apresenta um tom azul esverdeado que concorda se torna cinza. O inverso da colônia é laranja, colocando no meio da mesma cor pela produção de pigmentos.

-Aspergillus niger

Ele se desenvolve com um micélio branco a amarelo e esporos pretos.

-Candida Albicans

Colônias leves cremosas de bege se desenvolvem claramente. No formulário de ágar Czapek modificado.

-Aspergillus parasiticus

Um micélio verde escuro se desenvolve em 7 dias a 25 ° C.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio de cultura, as cepas de controle certificadas podem ser semeadas, como: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida Albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger desenvolve um micélio branco a amarelo e esporos pretos em aproximadamente 5 dias, enquanto Candida Albicans Terá um crescimento satisfatório em 24 horas de incubação a 25 ° C; As colônias são cores creme.

Limitações

Alguns estudos revelaram que, para a recuperação de actinomicetos, o ágar com o melhor desempenho é o ágar de dextrose do papa, deixando o ágar Czapek em segundo lugar, mas para a recuperação de Aspergillus e Penicillium, o ágar Czapek é o que fornece a maior recuperação avaliar.

Referências

1. Dávila M, et al. Actinomicetos antagônicos contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola. Rev. Mex. Ciência. Agricultura 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponível em: Scielo.org.
2. Luna M, Lozada e, trigo. Isolamento de cepas de Aspergillus niger, Ocratoxina A Produtores, no Café Verde (Arábica Coffea) armazenados. Rev. Mex. Microfone . 2010; 32: 63-68. Disponível em.Scielo.org.
3. Colaboradores da Wikipedia. Czapek Medum. Wikipédia, a enciclopédia livre. 13 de janeiro de 2019, 20:30 UTC. Disponível em: em.Wikipedia.org
4. Laboratórios de Conde Pronadisa. Agar modificado de Czapek-Dox. Disponível em: Condalab.com
5. Mídia de cultivo de microkit. Ágar Czapek-dox. Godoneible em: Media CINTUTIVO.com