May Grünwald-Giemsa mancha

Amostra de leucemia mielóide crônica, com coloração de maio grünwald-giemsa. Fonte: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

O que é maio de mancha de Grünwald-giemsa?

O May Grünwald-Giemsa mancha, Ó Pappenheim, é uma técnica de coloração diferencial que mistura os reagentes Giemsa e May Grünwald. É usado para a diferenciação de células sanguíneas normais e anormais em manchas de sangue periférico e medula óssea, bem como para a coloração de cortes histológicos e amostras citológicas.

Ambos os reagentes - Giemsa e May Grünwald- são derivados da coloração de Romanowsky, uma técnica baseada na combinação de ácido e corantes básicos.

Giemsa melhorou a técnica estabilizando a mistura de eosina, azul de metileno e seus derivados, com glicerol. Em vez disso, que Grünwald usou eosina e azul de metileno, usando o metanol como solvente. Esta combinação estratégica deu excelentes resultados.

Enquanto em termos de observação da morfologia celular atua semelhante às coloridas de Giemsa e Wright, essa técnica melhora o refinamento acima da coloração dos parasitas que causam malária, o mal de Chagas, leishmaniose e tricomoníase.

Além disso, mostrou -se muito útil para o estudo citológico de líquido espermático. Não apenas foi destacado mostrando as características morfológicas do esperma, mas também permite que leucócitos, células epiteliais e células de espermatogênese sejam bastante diferenciadas.

Base

A técnica segue a base da coloração de Romanowsky, na qual os corantes ácidos têm afinidade seletiva para componentes celulares básicos e componentes ácidos atraem corantes básicos.

Em outras palavras, as estruturas celulares e os corantes têm cargas elétricas positivas ou negativas, cargas iguais são repelidas e cargas diferentes atraem.

Por exemplo, corantes básicos, como azul de metileno, são carregados positivamente e atraídos por estruturas carregadas negativamente. É por isso que esse corante cora os núcleos que são ricos em DNA e RNA que carregaram grupos de fosfatos negativamente.

Os grânulos do basofílico segmentados e os citoplasmos dos glóbulos brancos mononucleares que contêm arn também estão corados.

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Além disso, o corante ácido tem uma carga negativa, por isso se liga a estruturas carregadas positivamente, como eritrócitos e grânulos dos eosinófilos segmentados. Quanto aos grânulos dos neutrófilos segmentados, ambos os corantes conjuntos.

Variedade de corantes

Nesta técnica, uma combinação de reações entre coloração ortochromática e metacromática coexiste. Ortocromático (eosina e azul de metileno) são fixados na estrutura celular à qual estão relacionados e fornecem uma cor estável que não varia.

Por outro lado, metacromático (aqueles derivados de azul de metileno, Azure e Azure b), sua cor original varia uma vez unida até a estrutura específica, pode até haver uma variedade de nuances.

Finalmente, o passo que leva a solução de maio de Grünwald precisa da presença de água, porque sem isso o corante penetrará nas estruturas, mas não será consertado. Para acontecer, o corante deve se tornar polar ou ionizar e, assim, ser capaz de precipitar e olhar para as estruturas relacionadas.

Técnica

Materiais

• Folhas de deslizamento.
• Coloração pontes.
• May Grünwald Solution.
• Coloração de Giemsa.
• Água destilada.

Concentrado May Grünwald Dye

0,25 gr de metileno eosina-azul (corante de acordo com maio grünwald) e dissolver em 100 ml de metanol devem ser ponderados. Então a preparação é misturada por 1 hora e deixe permanecer por 24 horas. Depois do tempo, é filtrado.

Para aplicar a técnica, o corante de May Grünwald é diluído da seguinte forma: Para 200 ml de corante diluído, 30 ml da solução concentrada são medidos, 20 ml de solução tampão e 150 ml de água destilada ajustada ao pH 7.2-7.3. Posteriormente, é misturado e filtrado.

Coloração concentrada de Giemsa

0,5 gr de azur-eosina de metileno (corante de acordo com Giemsa), dissolve-se em 50 ml de metanol e adicione 50 ml de glicerina.

Para executar a técnica, 1:10 é diluído com solução de buffer e deixe permanecer por 10 minutos. Pode ser filtrado, se necessário.

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Preparação da solução buffer a pH 7,2

Eles devem ser pesados:

• 40 mg de fosfato de potássio di-hidrogênio (KH2PO4).
• 151 mg de fosfato de hidrogênio di-sinfótico 12-hidratos (Na2Hpo4).

Ambos os compostos são dissolvidos em 100 ml de água.

Procedimento de Tincion Sanguine ou Bone Medol Srols

Existem duas modalidades: um clássico e um rápido.

Modalidade clássica

• Cubra o cheiro por 2 ou 3 minutos com a solução de maio grünwald diluída.
• Lave com água destilada tamponada para remover a solução anterior.
• Cubra com a mesma solução de lavagem em buffer e deixe por 1 minuto. A idéia é que o corante anterior seja fixado nas estruturas e que, ao mesmo tempo, as células são hidratadas.
• Adicione 12 gotas de tintura diluída de giemsa em água tamponada e sopro para misturar e homogeneizar. Deixe permanecer por 15 ou 20 minutos.
• Lave a mancha com água destilada tamponada e coloque -a para secar no ar.
• Concentre -se e observe em um microscópio óptico as células sanguíneas de tingimento usando o alvo 40x. Se necessário, 100x pode ser usado.

Modo rápido

• Cubra a mancha com o corante de maio Grünwald diluído por 1 minuto.
• Lave com água destilada tamponada.
• Cubra com água tamponada e deixe repousar por 1 minuto.
• Coloque o corante Giemsa diluído e deixe por 5 minutos.
• Lave com água destilada tamponada e deixe secar o ar.

As técnicas descritas aqui são um guia orientador, mas deve -se levar em consideração que os procedimentos e os tempos de coloração variam de acordo com a casa comercial que vende os reagentes. É aconselhável seguir as etapas estritamente indicadas por cada casa comercial.

Técnica estendida de coloração do fluido de esperma

• Cubra o estendido com uma camada fina da solução de maio grünwald por 4 minutos.
• Remova o corante e lave com água destilada.
• Coloque uma camada Giessa diluída (1:10) em água destilada por 15 minutos.
• Remova o corante e lave com água destilada.
• Deixe secar e observar no microscópio.

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Especificações importantes

A técnica afirma que os reagentes e soluções de lavagem têm um pH ajustado para 7.2-7.3, de modo que as afinidades dos corantes pelas estruturas celulares não são distorcidas e a cor final esperada não varia.

Formulários

• Esta técnica é usada por laboratórios clínicos para tingir fricção no sangue periférico e medula óssea, cortes de tecido e citologias.
• No campo hematológico, essa técnica é de vital importância no estudo de anormalidades das células em termos de forma, tamanho e número. É uma ferramenta muito valiosa para o diagnóstico de certas doenças, como leucemia e anemias.
• Apresenta uma utilidade excepcional quando procurado parasitas no campo hematológico (Plasmodium sp e Cruzi Tripaosoma) ou histológico (Leishmanias sp).
• Quanto à citologia vaginal, essa técnica é especialmente vantajosa para a observação de Trichomonas vaginalis. Esta é uma descoberta importante, já que sua presença simula pinturas de carcinoma No local Isso então desaparece quando o parasita é eliminado.
• Tem sido uma ferramenta ideal para o estudo de amostras de esperma, pois fornece informações valiosas sobre a qualidade do esperma. Os dados que ele oferece têm a fazer principalmente com número e morfologia, bem como com células concomitantes que podem estar presentes e que são de vital importância, como células germinativas, leucócitos e células epiteliais. Com esta análise, é possível descrever anormalidades observadas no esperma na cabeça, pescoço, peça do meio e a peça principal. Além disso, eles também podem ajudar a mostrar casos de hosspermia (presença de glóbulos vermelhos) e leucospermia ou piospermia (aumento do número de leucócitos no sêmen).

Referências

1. Laboratório Merck KGAA. May Grünwald Eosina Blue Microscopy metileno.
2. Maynwald-giemsa coloração. Recuperado de es.Wikipedia.org.
3. Laboratório PanReac de produtos químicos de vidro. Reagentes para técnicas histológicas, hematologia e microbiologia. Recuperado de glasschemicals.com.