Fundação de reação xantoproteia, procedimento, uso

O Reação xantoproteia É um procedimento químico usado para determinar a presença ou ausência de aminoácidos aromáticos, como tirosina e triptofano, o que pode ser livre ou constituindo proteínas solúveis, peptídeos ou polipeptídeos.

Também tem sido usado para detectar substâncias tóxicas no nível de sangue que contêm um grupo beancênico em sua estrutura. Este teste também é conhecido como reação xantoproteia Becher.

REAÇÃO XANTOPROTICA POSITIVA FONTE: Retirado de Video: https: // youtu.Be/gzgmbw5w4wo

A reação xantoproteia usa ácido nítrico concentrado, calor e um alcalino neutralizante. Se, ao neutralizar a reação, a solução amarela a laranja é considerada positiva. A coloração observada é devida à formação de compostos de nitrogênio derivados da nitrificação dos grupos benzênicos.

Se você precisar quantificar a quantidade de proteínas totais, é necessário usar outros métodos de determinação de proteínas, como biureto.

A reação xantoproteia é usada principalmente quando as substâncias estão sendo analisadas às quais sua composição química não é conhecida. Em geral, essa reação faz parte de um conjunto de testes que ajudarão a determinar a composição química de uma substância ou extrato específico. Por isso, é amplamente utilizado pelos pesquisadores.

Por outro lado, a reação xantoproteia de Becher é usada para detectar substâncias fenólicas e indoloras no sangue, sendo possível prever o aparecimento de nefropatia, antes que outros parâmetros aumentem.

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Base

A reação basicamente detecta a presença do grupo benzênico, ambos em aminoácidos, como em proteínas e peptídeos. O ácido nítrico atua no anel entre aminoácidos que o possui, formando nitrocomposições fenólicas.

A reação precisa de calor a ser realizado, geralmente é formado um precipitado que obscurece o meio, tornando -o leitosa. O precipitado pode ser branco ou amarelo. Finalmente, requer uma etapa de alcalização que acentua a cor. Para isso, uma base como 40% ou hidróxido de sódio de amônia é usado.

A reação será interpretada como positiva se uma forte coloração amarela for observada durante o processo escuro ou laranja, alcalinizando a reação. Os aminoácidos detectados são principalmente tirosina e triptofano.

Reação xantoproteia. Fonte: http: // Esteroisomeras.Blogspot.com/2013/06/caracterização das proteínas.Html

No caso da fenilalanina, embora seja um aminoácido aromático, o núcleo benzeno desse aminoácido é difícil de ser nitatizado em uma reação simples, portanto, emitirá ou uma reação negativa ou fracamente positiva.

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Em geral, o teste xantoproteico pode ser complementado com o teste Hopkins-Cole, que serve para identificar especificamente o triptofano. Se o teste xantoproteico for positivo e o de Hopkins-Cole for negativo, a presença de triptofano será descartada nessa solução, levando à presença principalmente de tirosina. Da mesma forma, também pode ser complementado com a reação de Millon para a detecção de tirosina, entre outras coisas.

Essa reação também pode ser usada em amostras de sangue, plasma ou soro inalterado para o diagnóstico de uremia ou insuficiência renal. Nesse caso, o que é procurado é a detecção de substâncias tóxicas (fenólicas e indólicas) produzidas a partir de podridão intestinal.

Essas substâncias possuem o grupo benzênico e, portanto, dão uma reação xantoproteia positiva, embora as substâncias reacionárias não sejam um aminoácido, nem uma proteína.

Procedimento

- Reação xantoproteica para detecção de aminoácidos com grupos aromáticos

Coloque 1 ml da amostra problemática em um tubo de ensaio limpo e seco.

-Adicione 0,5 ml de ácido nítrico concentrado.

-Incubar a mistura em um banheiro de 70 ° C por 2 minutos. Prepare anteriormente o banho de Maria à temperatura mencionada acima.

-Quando você pega o tubo do banho de Maria, é possível observar que a solução se tornou leitosa e tomou alguma coloração branca amarelada.

-A solução é resfriada soltando água fria na base do tubo.

-A preparação é alegado por lentamente (gota por gota) uma solução de hidróxido de sódio a 40% até que haja um choque de cor.

-Se o teste for positivo, um anel de laranja escuro será formado na interface líquida.

-Se a reação for negativa, não haverá formação de cores.

- Reação xantoproteia para detectar substâncias fenólicas e indolices no sangue

-Dispensa 5 cc de ácido tricloroacético a 20% em 5 cc de sangue venoso, plasma ou soro, sendo este último o mais indicado. Misture bem e filtre.

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-2 cc da filtragem são tirados e misturados com 0,5 cc de ácido nítrico. Em seguida, é aquecido a ferver, pois isso o tubo é colocado diretamente na chama do isqueiro por 30 segundos. Esfria com água e adicione 1,5 de cloreto de sódio a 33%.

É interpretado da seguinte maneira:

-Resultado negativo: cor amarelada.

-Resultado positivo (+) amarelo de limão.

-(++) Amarelo de ouro.

-(+++) amarelo escuro a marrom

Também pode ser interpretado usando uma escala colorimétrica referencial de Auenrieth, constituída por várias concentrações de bicromato de potássio. Isso é preparado em diluições de 10 em 10 de uma solução mãe de 0,03874%. Cada tubo representa uma porcentagem.

Escalas de interpretação

Existem duas escalas de interpretação chamadas antigas e modernas. Os valores normais são:

Tabela antiga: entre 75 e 85%

Tabela moderna: entre 15 e 25%

Se a cor do tubo de problema estiver no meio de dois tubos de padrões, é feita uma média entre as duas medidas.

A solução de padrão de dicromato de potássio é preparada da seguinte forma: 7 é medido.9 ml de dicromato de potássio a 10 N e é nivelado até 100 ml em uma bola de aggorado. Para diluições, é seguido como é mostrado na tabela colorimétrica de Autenrieth.

Tabela colorimétrica de Autenrieth. Fonte: Vásquez a. Reação xantoproteia. Revista Clínica Espanhola. 1949; 35 (5): 326-327. Disponível em: Elsevier

Usar

O uso da reação xantoproteia faz parte de um conjunto de testes bioquímicos que ajudam a conhecer a composição química de uma substância desconhecida. Este teste contribui para a análise química, a detecção de proteínas que contêm grupos benzênicos em sua estrutura.

Esta reação é amplamente utilizada por pesquisadores em vários estudos de substâncias.

Nesse sentido, Vásquez-Jorge e colaboradores usaram esta e outras reações para investigar o teor de proteínas de fluidos extraídos da osção de manguezais (Crassostrea rhizophorae).

Da mesma forma, Rojas e colaboradores (2009) usaram uma série de testes, entre os quais é a reação xantoproteia, para analisar a glicomacropéptida em precipitados de lactosueros de ricotta.

Por outro lado, a reação xantoproteia de Becher foi modificada por Volhard para ser usada para outros fins. Nesse caso, para a detecção de substâncias fenólicas e indólicas que podem ser levantadas muito mais cedo (semanas ou meses) que os níveis de uréia e nitrogênio residual no sangue são aumentados.

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Esses resíduos tóxicos são formados a partir da podridão intestinal dos alimentos.

Essas substâncias se acumulam no sangue quando não são devidamente eliminadas; portanto, um teste xantoproteico positivo pode prever o estabelecimento imediato da própria insuficiência renal ou um estado de uremia.

De acordo com a intensidade da cor, você pode determinar o quão avançado é. Nesse caso, o teste é quantitativo.

Em pessoas saudáveis, esse teste fornece uma leve cor amarela, correspondendo aos níveis normais de triptofano e tirosina que podem estar no sangue.

Enquanto, em pacientes renais, a reação xantoproteia dá fortemente positiva devido à presença das seguintes substâncias: fenol, indol, paracresol, ácidos oxi aromáticos, entre outros.

Precauções

Este teste deve ser realizado por profissionais treinados. Todos os padrões de biossegurança devem ser considerados, porque os reagentes utilizados são ácidos e bases corrosivas.

Se, por acidente, algumas gotas de ácido nítrico na pele ou unhas caírem, elas se tornarão amarelas, uma vez que ambas as estruturas contêm proteínas. Além disso, na pele e mucosasas, causa queimaduras graves.

Se ocorrer um contato com a pele, o protocolo a seguir deve ser lavar a área imediatamente com água e sabão por aproximadamente 20 minutos.

Se você joga os olhos, deve lavar com muita água fresca, tentando manter os olhos abertos.

Referências

1. "Reação de Xantoproteica" Wikipedia, enciclopédia livre. 2 de setembro de 2019, 17:49 UTC. 21 de outubro de 2019, 20:31 Wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge e, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge e. Caracterização físico -química e teor de proteínas de extratos de fluido da osção de mangue (Crassostrea Rhizóphorae). Química cubana, 2014; 26 (1): 66-74. Disponível em Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Isolamento e desempenho do GMP por precipitação de lactosuero com ácido tricloroacético. Cientista. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Disponível em: VE.Scielo.
4. Vásquez a. Reação xantoproteia. Revista Clínica Espanhola. 1949; 35 (5): 326-327. Disponível em: Elsevier
5. Gálvez i, gárado ou. Reações de Becher e Andrewes na cirurgia urinária. Serviço de urologia do hospital espanhol. Revista Argentina de Urologia 395-404