Fundação de teste de catalase, técnica e usos

O Catalase É uma metodologia usada nos laboratórios de bacteriologia para destacar a presença de enzima catalase naquelas bactérias que a possuem. Ao lado da coloração de Gram estão os principais testes que devem ser realizados em microorganismos recém -isolados. Esses testes orientam o microbiologista nas etapas a seguir para a identificação definitiva do microorganismo em questão.

Em geral, as bactérias contendo citocromo têm a enzima catlase, ou seja, bactérias anaeróbicas aeróbicas e opcionais devem possuí -lo. No entanto, existem exceções, como Streptococcus, que apesar de serem microorganismos anaeróbicos opcionais não possuem a enzima catalase.

Execução do teste da catalase, mostrando uma reação positiva. Fonte: nenhum autor legível por máquina fornecido. Nase assumiu (com base em reivindicações de direitos autorais). [CC BY-SA 3.0 (http: // criativecommons.Org/licenças/BY-SA/3.0/]]

É por isso que o teste da catalase é usado principalmente para distinguir Staphylococaee e Micrococaceae (ambas catalase positiva) da família Streptococaee (catalase negativa) (catalase negativa).

Da mesma forma, o gênero Bacillus (catalase positiva) se distingue do gênero Clostridium (catalase negativa), entre outros.

[TOC]

Base

A catalase é uma enzima classificada como uma hidroperoxidase, isso significa que eles usam peróxido de hidrogênio como substrato (H₂QUALQUER₂).

Também é considerado uma oxidoredutase, pois na reação em que há um elemento que serve como doador de elétrons (redução da substância) e outro como receptor de elétrons (substância oxidante).

A catalase é uma proteína que contém um grupo prostórico com quatro átomos de ferro trivalentes (fé⁺⁺⁺), portanto, é uma homoproteína. O íon férrico permanece oxidado durante a reação.

Pode -se dizer que a catalase é uma enzima desintoxicante, uma vez que sua função é eliminar substâncias que ocorrem durante o metabolismo bacteriano tóxico para bactérias. Entre essas substâncias está o peróxido de hidrogênio.

O peróxido de hidrogênio é formado a partir da decomposição de açúcares pela aeróbica. Este processo ocorre da seguinte maneira:

O íon superóxido (ou₂^-) (Radical livre) é formado como um produto final da assimilação da glicose por estrada aeróbica. Isso é tóxico e é eliminado pela enzima superóxido dismutase que o transforma em oxigênio gasoso e peróxido de hidrogênio.

Pode servir você: Holdridge Life Zonas: O que está na América Latina

O peróxido de hidrogênio também é tóxico para bactérias e deve ser eliminado. A enzima catalase desdobra o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio.

A catalase pode atuar em outros substratos que não o peróxido de hidrogênio, como álcoois, aldeídos, ácidos, aminas aromáticas e fenóis. No entanto, o peróxido de hidrogênio também pode ser usado pela catalase para oxidar outros compostos tóxicos, como metil e álcool etílico.

Da mesma forma, a catalase está presente nas células fagocíticas, protegendo -a da ação tóxica do peróxido de hidrogênio.

Técnica de rotina para teste de catalase

-Método no slide

Materiais

3% de peróxido de hidrogênio (10 volumes).

Lâmina portátil

Alça de plástico descartável ou palito de madeira.

Procedimento

Tire uma quantia suficiente da colônia para estudar sem tocar o ágar de onde vem de. A colônia deve ser fresca, isto é, de uma colheita de 18 a 24 horas.

Coloque a colônia no suporte seco e adicione uma queda de 3% de peróxido de hidrogênio (você também pode usar H₂QUALQUER₂ a 30%). Observe imediatamente se as bolhas forem desapegadas ou não.

Interpretação

Reação positiva: descolamento de gás, que é evidente com a formação de bolhas (bolha forte).

Reação negativa: não há formação de bolhas.

-Método direto na cultura pura

Coloque 1 ml de H₂QUALQUER₂ 3% na colheita pura em placas ou cunhas que não contêm sangue (preferencialmente garra nutritiva). Observe se há ou não formação de bolhas imediatamente. Você também pode usar h₂QUALQUER₂ 30%.

É interpretado como o método do suporte de objeto.

-Método com tubo capilar ou fung e petróleo

Encha um tubo capilar de 67 mm a uma altura de 20 mm com 3% de peróxido de hidrogênio por capilaridade.

Toque na colônia isolada que você deseja estudar com o capilar cheio de h₂QUALQUER₂ 3%_. Observe se o capilar está cheio de bolhas em aproximadamente 10 segundos. Este método permite semi-quantificar a reação em cruzamentos:

Sem cruzes, não há bolhas (reação negativa).

Pode atendê -lo: Flora e Fauna das Ilhas Malvinas: Espécies Excelentes

+ --Bolhas escassas (reação fraca ou atrasada).

++ -Bolhas abundantes (reação moderada).

+++ -Bolhas chegam ao extremo oposto (reação energética).

-Método Taylor e Achanzar para testes de catalase que dão duvidoso

Em um slide limpo e seco colocou uma colônia isolada, depois coloque uma gota de H₂QUALQUER₂ 0,5% e tampa com capas. Observe se há ou não uma formação de bolhas presas.

Interpretação: A presença de bolhas indica uma reação positiva. Sem bolhas, é interpretado como uma reação negativa.

Teste de catalase para espécies de Mycobacterium

Esta técnica precisa ser feita controlando o pH e a temperatura. Deve ser executado sob um sino de fluxo laminar, uma vez que a manipulação das diferentes espécies de Mycobacterium é perigosa.

-Materiais

30% ou 110 volume de peróxido de hidrogênio (superxal).

Tampão fosfato pH 7

Entre 80 a 10%

Cultura Mycobacterium em cunha de 3 a 4 semanas

-Preparação de reagentes

Tampão fosfato pH 7

Pesar:

1.361 g de (kh₂Po₄) Anhydra.

1.420 g de (Na2Hpo3) fosfato disodico anidro.

Dissolva os dois sais em um pouco de água destilada estéril e completa com água até 1000 ml.

Entre 80 a 10%

Realize uma diluição de 1:10 para a Tween 80 que se concentra comercialmente, para que isso prossiga da seguinte maneira:

Tire 1 ml de Tween 80 e coloque -o em um pouco de água destilada, dissolva e depois complete o volume com água até 10 ml.

Reagente final

Misture uma quantidade de tampão fosfato com uma quantidade de Tween 80 a 10% (em partes iguais). Defina em laboratório quanto você deseja preparar.

-Procedimento

Coloque 5 ml de tampão de fosfato em um tubo de ensaio estéril com tampa de rosca (baquelita).

Com uma alça de inoculação, pegue a colônia suficiente de um crescimento de Mycobacterium semeado em cunhas e se dissolve no tampão de fosfato.

Cubra o tubo sem apertar o fio. Coloque em um banheiro a 68 ° C por 20 a 30 minutos. Retire e esfriar a 22-25 ° C

Meça 0,5 ml do reagente final (mistura) e adicione -o ao tubo com a solução fria. Observe ou não a formação de bolhas.

É interpretado, assim como as técnicas anteriores.

Usar

Quando é obtido um crescimento de colônias em meios enriquecidos, uma coloração de grama e um teste de catalase devem ser realizados para as colônias obtidas. Isso orientará o microbiologista sobre os procedimentos a serem seguidos para identificação definitiva.

Pode servir você: epitélio simples simples: características, funções e tipos Fonte: Preparado pelo autor MSC. Marielsa Gil

 Controle de qualidade

Para avaliar o funcionamento adequado do reagente de peróxido de hidrogênio, use controles recém -cultivados, como Staphylococcus aureus como controle positivo e tensões de Streptococcus sp como controle negativo.

Outra alternativa que serve como controle positivo é colocar uma gota de peróxido de hidrogênio no ágar do sangue, os eritrócitos têm catalase; portanto, haverá um borbulhante se o reagente estiver em boas condições.

Você pode usar um ágar de chocolate como controle negativo, aqui os eritrócitos já estão listados e o teste dá negativo.

Limitações

-Não use culturas antigas para o teste, pois isso pode causar falsos negativos.

-Evite tomar colônias de culturas em ágar de sangue, se você tiver cuidado para não tocar no ágar; Este procedimento pode causar falsos positivos, uma vez que os eritrócitos contêm catalase.

-Se você pegar a colônia com alça de platina, não investir a ordem do procedimento, pois isso pode gerar falsos positivos. Isso ocorre porque a platina é capaz de reagir com peróxido de hidrogênio, originando uma bolha.

-Não use o reagente de peróxido de hidrogênio se for muito antigo, pois o reagente é muito instável e tende a quebrar com o tempo.

-Mantenha o reagente de peróxido de hidrogênio protegido da luz e refrigeração para evitar danos.

-Executar controle de qualidade no reagente de peróxido de hidrogênio cada vez que é usado.

-Leve em consideração que se h for usado₂QUALQUER₂ em 30%, as reações são mais fortes do que as realizadas com H₂QUALQUER₂ 3%.

Referências

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3ª ed. Editorial pan -americano. bons ares. Argentina.
4. BD Laboratories. Reagente da Catalase. Disponível em: http: // winklerltda.Cl
5. Laboratórios Vadequímica. Água oxigenada. Equivalência entre volumes e porcentagem. Disponível em: Vadequimica.com