Mídia de cultura, função, tipos, preparação

O mídia cultural São preparativos nutricionais especiais para a recuperação, isolamento e manutenção de microorganismos bacterianos e fúngicos. Essas mídias podem ser sólidas, líquidas ou semi -sólidas.

Louis Pasteur foi o primeiro a demonstrar que, em um caldo feito com pedaços de carne cozida, serviu para que as bactérias sejam reproduzidas em grande quantidade, a ponto de nublar o caldo. Nesse sentido, o caldo de carne Pasteur é considerado o primeiro meio de cultura líquida usado.

Mídia de cultura despreparada (sólidos e líquidos). Fonte: Flickr

Então Robert Koch, graças à ajuda de seus colaboradores Julius Richard Petri e Walter Hesse, fizeram grandes avanços. O primeiro projetou a placa de Petri, que ainda é usada hoje; E o segundo lhe ocorreu para substituir a gelatina para a água do ágar para preparar o meio de cultura sólido, o que era muito relevante, uma vez que a geléia foi degradada por alguns microorganismos.

Atualmente, existem muitos tipos de meios de cultura para diferentes propósitos; portanto, estes são classificados de acordo com sua função: entre os mais importantes, os meios de cultivo nutricional, seletivo, diferencial, transporte, enriquecimento, contagem de contagem, colônias, manutenção e Para prova de suscetibilidade.

Alguns meios de cultura são especiais para observar reações químicas, sendo muito úteis para a identificação do microorganismo envolvido. Entre eles, eles podem ser mencionados: o médio Kigler, Mio, Lia, Citrato, entre outros.

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História

O primeiro meio de cultura foi preparado por Louis Pasteur quando ele tentou.

Ele preparou um caldo com pedaços de carne e observou que, depois de alguns dias depois de ter sido exposto ao ar, ele ficou escuro e no caldo havia uma quantidade apreciável de microorganismos. Ao mesmo tempo, outro caldo com pedaços de carne previamente fervido e hermeticamente fechado permaneceu translúcido quando os dias passados ​​pelos dias.

Isso chamou a atenção de muitos pesquisadores e percebeu que esses microorganismos eram responsáveis ​​pela decomposição da carne e, além de produzir algumas doenças.

Por esse motivo, era essencial criar uma maneira de reproduzir esses microorganismos em laboratório, a fim de estudá -los mais detalhadamente.

Nesse sentido, Robert Koch fez uma contribuição inestimável na melhoria de certas técnicas de laboratório, especialmente aquelas relacionadas ao isolamento bacteriano, ao introduzir o conceito de meio de cultura sólida.

No começo, ele usou fatias de batata como meio sólido, mas depois adicionou gelatina aos caldos de carne com melhores resultados. No entanto, houve momentos em que a geléia derreteu e se tornou uma colheita líquida. Hoje sabe -se que isso acontece porque algumas bactérias são capazes de hidrolisar a gelatina.

Foi então que a idéia de usar o Agar-Adding, um complexo que sua esposa costumava engrossar seus doces ocorreu a um de seus colaboradores.

Este meio de cultura rudimentar gradualmente sofisticada, até chegar aos meios de cultura que são conhecidos hoje.

Composição

Cada meio tem uma composição diferente, mas é essencial que contenha os nutrientes específicos para um bom desenvolvimento do tipo de microorganismo que é procurado.

Também pode conter produtos químicos específicos que ajudam a revelar a via metabólica que tem uma certa tensão ou que evidenciou a presença de certas enzimas.

Outro elemento importante é o uso de substâncias de amortecedor. Isso ajuda a manter o equilíbrio osmótico da mídia, bem como o pH.

Eles também podem conter carboidratos e um indicador de pH para mostrar a fermentação de açúcar adicionado. Uma mudança de cor do meio será observada se houver acidificação gerada pela fermentação.

Alguns meios de cultura contêm substâncias inibidoras. Dependendo da substância utilizada, o crescimento de microrganismos será restrito e o de outros será favorecido.

Tipos de mídia de cultura

A mídia de cultivo é classificada de acordo com vários critérios. São eles: de acordo com a consistência, sua composição e sua função.

- De acordo com sua consistência

Líquidos

Eles não contêm agar -go. O crescimento bacteriano ou fúngico é evidenciado pela turbidez do caldo, que é originalmente translúcido.

Sólidos

Eles contêm entre 1,5 a 2% de agar -gar. A mistura solidificada tem uma superfície que resiste ao deslocamento fino da alça de platina, sem que ela seja quebrada.

Semi -sólido

Eles contêm aproximadamente 0,5% do ágar -gar, portanto, é um estado intermediário entre o líquido e o sólido. Ideal na mídia que serve para ver a motilidade. Eles também são recomendados para a conservação de cepas, pois mantêm a umidade por muito tempo.

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Bifásicos

São meios que são preparados de tal maneira que existe uma fase sólida e neste meio líquido. Amplamente utilizado para culturas de sangue.

- De acordo com sua composição

Mídia de cultura natural

São substâncias tiradas diretamente da natureza para cultivar bactérias, dando a eles um ambiente mais próximo de como eles se desenvolvem no ecossistema normalmente. Exemplo, leite, sucos, sangue diluído, soro, etc.

Mídia de cultura sintética

Eles são os mais usados ​​hoje, são os desidratados significa que adquirimos em casas comerciais e para as quais sua composição química é conhecida, pois foram projetados estrategicamente de acordo com o tipo de microorganismo que se procura isolar.

Mídia de cultura semi -estetética

É a combinação de um meio sintético ao qual um elemento natural é adicionado para enriquecer o meio.

Mídia de cultura celular

Eles são meios especiais para o cultivo de vírus, como esses microorganismos são incapazes de sobreviver às células externas, eles devem conter células vivas ou de tecido, de um animal ou de uma planta.

Exemplo: culturas de rim de macaco celular ou ovos embrionários.

- De acordo com sua utilidade

Nutritivo, seletivo, diferencial, transporte, enriquecimento, identificação, quantificação de colônias, testes de manutenção e suscetibilidade. Será descrito mais tarde.

Função

Independentemente do tipo de meio de cultura, todos têm algo em comum e é que eles facilitam ou promovem a reprodução de certos microorganismos. A diferença está na composição de cada um deles, o que é um fator determinante para a utilidade final que eles terão.

Cada um dos meios de cultura existente é projetado estrategicamente para a função específica para a qual foi criada, ou seja, todos têm uma base que governa as diretrizes para sua função específica.

Deve -se notar que o meio de cultura, uma vez que semeado, deve sofrer condições de temperatura e oxigênio apropriado ao tipo de bactéria ou fungo que você deseja isolar.

Por exemplo, se você deseja isolar bactérias anaeróbicas mesofílicas, ágar no sangue e incubar em condições de anaerobiose (sem oxigênio) a 37 ° C por 48 horas por 48 horas por 48 horas.

Agora, se for necessário um fungo para isolar, o ágar Sabouraud com antibióticos é usado. É incubado na aerobiose, à temperatura ambiente por vários dias, pois estes são um crescimento lento.

Mídia de cultura nutritiva simples

Como su nombre lo indica, estos medios de cultivo contienen sustancias nutritivas, como fuentes de vitaminas, aminoácidos, nitrógeno y carbono, entre ellos se pueden mencionar: extracto de carne o extracto de levadura, almidón de maíz, digerido pancreático, peptonas, glucosa, entre outros.

Eles também contêm outros componentes que fornecem um equilíbrio osmótico ao meio ambiente, pois a maioria das culturas requer um pH próximo a 7.0. Esses elementos podem ser: cloreto de sódio, fosfato de dissódio, entre outros.

O diluente é água destilada e meios sólidos têm agar-add.

O objetivo dessa cultura significa recuperar a microbiota bacteriana ou fúngica que existe em uma determinada amostra. Ele não discrimina entre microrganismos, porque é capaz de cultivar um grande número de bactérias, tanto o grama positivo quanto o grama negativo, assim como o fermento e os fungos miceliais.

Eles são recomendados para semear amostras que vêm de sites normalmente estéreis. No entanto, eles não servem para exigir microorganismos.

Eles também são úteis para a manutenção de cepas, desde que não contenham glicose.

Mídia de cultura enriquecedora

Se o sangue ou o sangue aquecido a meios nutricionais simples forem adicionados, eles se tornam mídias enriquecidas (ágar de sangue e chocolate, respectivamente).

Esses meios são muito úteis para semear amostras que normalmente são estéreis, para resgatar cepas que são fracas e isolarem microorganismos exigentes do ponto de vista nutricional.

Mídia de cultura seletiva

Os meios de cultura seletivos, além de conter nutrientes essenciais para o crescimento de certos microorganismos de interesse, também são adicionados substâncias inibitórias, como antibióticos, antifúngicos, corantes, sais biliares, entre outros.

As substâncias inibidoras têm como objetivo reduzir a variedade de cepas que podem crescer, favorecendo o crescimento de um grupo particularmente especial que deseja resgatar.

Exemplo: caldo CE (especial para coliformes totais e fecais) ou ágar Sabouraud com antibióticos (específico para fungos).

Mídia de cultura diferencial

Os meios diferenciais contêm elementos nutricionais necessários para o crescimento de um grupo específico de microorganismos e também contém substâncias que, na presença de certos microorganismos, serão metabolizados ou degradados.

Ou seja, eles produzirão reações químicas que, de uma maneira ou de outra, serão evidenciadas no meio de cultura.

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Algumas reações alcalinas ou acidificar o meio e, graças à presença de um indicador de pH, essas mudanças podem ser evidenciadas através de uma virada colorida no meio e a colônia.

Portanto, entre um grande grupo de bactérias que podem crescer nesse meio, aqueles que metabolizam ou degradam a substância e aqueles que não o fazem, simplesmente observando a cor da colônia e o meio.

Por exemplo, o ágar de sangue permite distinguir bactérias que produzem hemólise beta (halo transparente) daqueles que produzem hemólise alfa (halo esverdeado) e daqueles que não produzem hemólise.

Mídia seletiva e diferencial

Um exemplo disso é o que acontece no Agar MacConkey. É seletivo, pois permite apenas o crescimento de bacilos gram -negativos; E é diferencial, pois pode distinguir as bactérias fermentadoras da lactose (colônias coloridas de fúcsia) de não -fermentação (cor rosa pálida ou incolor).

Mídia de cultura de transporte

Como o nome indica, eles são meios usados ​​para transportar amostras que foram coletadas em um lugar mais ou menos distante para o laboratório que processará a amostra. Os meios de transporte mantêm a amostra nas melhores condições para obter resultados confiáveis.

Esses meios de cultura têm características muito especiais, pois não podem exceder os nutrientes, uma vez que a população bacteriana presente permanece viável, mas sem aumentar em número.

Eles geralmente são meios semi -sólidos, permitindo que a amostra seja hidratada. No entanto, não deve ser disperso para enviar a amostra o mais rápido possível para o laboratório. Exemplos de meios de transporte: Medio Stuart, Cary Blair e Amies.

Metade e cultura de enriquecimento

Esses meios de cultura são líquidos. Eles são usados ​​para resgatar patógenos específicos que, a qualquer momento, podem estar presentes em uma amostra mínima de quantidade.

Também é útil resgatar uma tensão patogênica que pode ser fraca devido a algum tratamento anterior recebido. Por exemplo: Peptonada Water, Tioglicololol caldo e caldo de selenito.

Esses meios têm substâncias inibitórias que evitam o crescimento da microbiota que a acompanha e nutrientes específicos que favorecem o desenvolvimento do microorganismo de interesse.

Mídia de cultivo para fins de identificação 

Esses meios têm substâncias que podem ser metabolizadas quimicamente por certas bactérias, produzindo reações químicas que mostram a presença de enzimas específicas ou vias metabólicas.

Portanto, eles são usados ​​como testes bioquímicos que ajudam o reconhecimento do gênero e as espécies de um determinado grupo de cepas. Ex: O Kigler médio evidencia se o microrganismo for capaz de fermentar glicose e lactose, se produzir hidrogênio e sulfeto de gás.

Este meio contém substâncias reveladoras que permitem observar a reação, como o indicador de pH e os íons de ferro.

Este teste simples pode diferenciar dois grandes grupos de microorganismos bacterianos, como bactérias pertencentes à família de bactérias Enterobacteriaceae, denominada não -fermentação.

Significa contar colônias

Estes são meios simples e não seletivos que servem para a quantificação de uma população microbiana, como a conta padrão. O tipo de microorganismo que crescerá neste meio dependerá das condições de temperatura e oxigênio que são estabelecidas.

Mídia de cultivo para prova de suscetibilidade

O meio padronizado para esse fim é o Agar Müeller Hinton, isso significa que é ideal para avaliar o comportamento de diferentes antibióticos contra um microorganismo patogênico isolado.

É especialmente útil em bactérias pouco exigentes, enquanto em bactérias exigentes só pode ser usado se isso for suplementado com sangue.

Manutenção meios para manutenção

Esses meios pretendem reproduzir o microrganismo e também manter em um mais possível a viabilidade da bactéria ou fungo e também que suas funções fisiológicas são preservadas.

Uma característica importante é que esse tipo de meio não contém glicose, porque, embora seja um elemento que forneça um crescimento rápido, sua fermentação produz ácidos que diminuem a vida útil do microorganismo.

Alguns laboratórios precisam manter certos microorganismos viáveis ​​para serem usados ​​posteriormente em estudos de pesquisa, controles internos ou para fins de ensino.

Preparação

Atualmente, existem muitas marcas comerciais que distribuem as diferentes mídias de cultura. A mídia vem de uma forma liofilizada ou desidratada, contida em potes herméticos e protegidos de luz.

Cada meio traz um rótulo que especifica o nome do meio, seus componentes, número do lote e quanto pesar para preparar um litro de meio de cultura.

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Como diluente, a água destilada é usada. A quantidade pesada se dissolve em um litro de água destilada até que a mistura seja homogeneizada. A maioria dos meios é levada para a autoclave, 15 libras, a temperatura de 121 ° C, por 15 minutos.

Os meios líquidos já estão distribuídos em seus respectivos tubos de trabalho, enquanto a mídia sólida autoclavato em frascos de Erlenmeyer.

Este último deixou ficar em pé até atingirem uma temperatura de 55 ° C e é servido nas placas de Petri dentro de um sino de fluxo laminar ou perto do isqueiro de Bunsen. Eles podem se solidificar e são invertidos em uma geladeira.

Também existem meios de cultura sólidos que são distribuídos em tubos, permitindo -se solidificar em tacos (reto) ou pico de flauta (inclinado).

Antes de usar qualquer meio de cultura preparado, sólido ou líquido, ele deve estar temperando antes de semear a amostra.

Importância

Os meios de cultura são, sem dúvida, uma ferramenta de trabalho muito valiosa para os microbiologistas, pois possibilitam a recuperação do agente infeccioso que, em um determinado momento, pode estar afetando um indivíduo ou poluindo um alimento, um ambiente ou uma superfície.

Nesse sentido, pode -se dizer que a microbiologia tem vários campos, entre eles é clínica, industrial, ambiental, microbiologia alimentar, entre outros e em todos os meios da cultura são usados.

Obviamente, o tipo de meio usado em cada caso pode variar de acordo com as necessidades e o tipo de amostra processada. O grupo de microorganismos procurado também influencia.

O isolamento do microorganismo patogênico ou a poluição é indispensável para poder colocar um tratamento eficaz ou adotar procedimentos que ajudam a eliminar o poluente em questão.

No caso da microbiologia clínica, não é apenas importante.

Este estudo que também usa um meio de cultura permitirá dizer qual antimicrobiano é sensível e qual é resistente ou em poucas palavras, que pode ser usado como tratamento e que não.

Portanto, o meio de cultura não pode estar faltando em um laboratório de microbiologia, qualquer que seja a área.

Finalmente, pode -se dizer que a mídia de cultura nos permitiu investigar vários aspectos, tanto bactérias quanto fungos.

Controle de qualidade da mídia de cultivo

A preparação e o uso da mídia de cultura não deve ser feita levemente. Em cada laboratório, deve haver um apartamento que aplique protocolos de controle de qualidade à mídia, sempre que novos lotes são preparados e, portanto, garantem que eles sejam adequadamente preparados, estéreis e funcionais.

Para avaliar sua esterilidade, um ou dois meios de cada lote são tomados aleatoriamente e incubados a 37 ° C por vários dias (não deve haver crescimento). Para verificar sua função, são usadas cepas de referência ATCC (coleção de cultura do tipo americano) devidamente cultivadas e viáveis.

Descarte da mídia de cultivo

Depois de usar a mídia de cultura, eles devem ser descartados de tal maneira que não contamine o ambiente.

Para fazer isso, o material é esterilizado em autoclave antes de ser descartado. Posteriormente, o material de copo é removido. O último é lavado, seco, esterilizado e salvo para uso posterior. No caso de usar placas descartáveis, elas são esterilizadas e posteriormente descartadas em sacolas especiais.

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