Caldo de malonato, preparação e usos

Ele Caldo de Malonato É o meio de cultura líquido usado para o teste de diagnóstico (teste de Malonato), usado para diferenciar alguns gêneros da família Enterobacteriace. Foi criado por Leifson em 1.933 e subsequentemente modificado por Ewing, que adicionou uma pequena quantidade de extrato de dextrose e levedura à fórmula original.

Atualmente, o meio é composto de extrato de levedura, sulfato de amônio, fosfato de dipotássio, fosfato monopotônico, cloreto de sódio, malonato de sódio, dextrose e azul de bromotimol. Este teste é geralmente incluído na bateria de identificação bioquímica para enterobactérias, ajudando a diferenciar certos gêneros e espécies.

Representação gráfica do teste de Malonato. PARA. Teste negativo, b. (Acidificação) teste negativo, c. (Alcalinização média) Teste positivo. Fonte: Tubos coloridos de domínio público.líquido

O teste de Malonato é baseado principalmente na capacidade de alguns microorganismos de usar o malonato de sódio como uma única fonte de carbono e como fonte de nitrogênio para sulfato de amônio.

O teste de Malonato geralmente dá positivo em algumas espécies dos gêneros Enterobacter, Klebsiella e Citrobacter. Enquanto, a maioria das espécies dos gêneros Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus e Providencia, dá reação negativa.

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Base

O teste de malonato consiste em evidência.

A maioria das enterobactérias que não usam malonato são capazes de crescer neste meio, tomando como nutrientes a dextrose e extrato de levedura.

Nesse caso, qualquer tentativa de alcalização devido ao uso de peptones será neutralizada pela produção de ácidos gerados pela fermentação da dextrose. Da mesma forma, os fosfatos Dipotássio e Monopotasic atuam como um tampão que mantém o pH a 6.7.

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É por isso que, quando o teste é negativo, o caldo é da mesma cor original (verde). Raramente o meio poderia ser acidificado devido à fermentação da dextrose; Sem o uso de peptonas e o indicador de pH giraria a cor do meio para o amarelo. Para isso, o pH deve descer para 6.

Agora, quando este teste é positivo de que o microorganismo usou Malonato e Sulfato de Amônio como fontes de carbono e nitrogênio, respectivamente, sem usar os outros componentes.

Nesse caso, o meio é alcalado devido à libertação do sódio e à conseqüente formação de NaOH. Nesse sentido, o indicador de pH (azul de bromotimol) gira a cor do meio de verde para azul quando o pH é igual ou maior que 7.6. O azul pode ser claro ou intenso (Prussia Blue).

Finalmente, o cloreto de sódio mantém a osmolaridade do meio e a água é o diluir de todos os componentes.

Interpretação

Caldo da mesma cor (verde): teste negativo

Caldo amarelo: teste negativo

Caldo azul claro ou intenso: teste positivo

Há uma variante chamada Malonato Fenilalanina, também chamada Shaw e Clarke Medium. Nesse caso, dois testes podem ser analisados, o uso de Malonato como fonte de carbono e a produção de ácido pirúvico a partir de fenilalanina.

Preparação

Caldo de Malonato

A quantidade de gramas especificados pela inserção da casa comercial escolhida está pesando (pode variar de um para outro). Gramas pesados ​​são suspensos em um litro de água destilada. Aqueça levemente até sua dissolução completa. Distribua 3 ml do meio em 13/100 tubos de teste com tampa de algodão.

Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 ou 20 minutos.

Legal. Se eles não serão usados ​​imediatamente, exceto na geladeira até o uso. Tempere os caldos à temperatura ambiente antes de inoculá -los.

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O pH médio deve ser de 6,7 ± 0,2. A cor do meio preparado é verde da garrafa.

Caldo de fenilalanina malonato

Pese 11 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água destilada. O restante da preparação igual ao descrito acima.

Também pode ser preparado adicionando 2 gr/l de fenilalanina ao meio de caldo Malonato antes de ser esterilizado.

Usar

É usado como parte da bateria de teste bioquímica que é montada para a identificação de bactérias da família Enterobacteriaceae.

Ajudar a distinguir entre:

-O gênero Klebsiella e Enterobacter (+) do gênero Escherichia e Serratia (-).

-A espécie de SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica SSP Diarizonae (+), das espécies Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Do gênero Klebsiella geralmente (+) do gênero Actinobacillus (-).

-Às vezes, pode ajudar a diferenciação de gêneros e espécies de bactérias que não pertencem à família Enterobacteriaceae, como entre bacilos Gram negativos não -fermentadores Alcaligenes Faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.

Procedimento

Sob um isqueiro, é tomada uma parte de uma colônia pura, usando uma alça de platina adequadamente esterilizada e resfriada. A amostra tomada (inóculo leve) se dissolve no caldo Malonato. É incubado com a tampa preguiçosa em aerobiose a 35 ° C ± 0,2 por 24 a 48 horas.

Você também pode inocular o caldo de Malonato de uma colheita de 18 a 24 horas em caldo de soja triptyse. Nesse caso, 0,01 ml é tomado com uma pipeta estéril e o caldo de Malonato é inoculado. É incubado com a tampa preguiçosa em aerobiose a 35 ° C ± 0,2 por 24 a 48 horas.

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Terminou o tempo em que os resultados são interpretados. Qualquer vestígio de cor azul concluído 48 horas de incubação deve ser considerado positivo. O teste não deve ser interpretado como negativo até que o tempo de incubação de 48 horas seja cumprido.

No caso de usar a variante de caldo de fenilalanina malonato, o Malonato é interpretado pela primeira vez e depois 5 gotas de HCl 1n e 3-5 gotas de 8% de cloreto férrico são adicionadas. Uma cor verde escura é interpretada como um teste positivo para a fenilalanina. Se, pelo contrário, o meio se tornar azul pálido, o teste é negativo para fenilalanina.

Controle de qualidade

Para executar o controle da esterilidade do meio, um ou dois caldos devem ser incubados a 35 ° C ± 0,2 por 24 horas de incubação. Após esse período, não deve haver turbidez ou mudança de cor.

Para controle de qualidade, você pode usar cepas conhecidas ou certificadas, como: Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 e Escherichia coli ATCC 25922.

Os resultados esperados são:

• Enterobacter Aerogenes, Klebsiella pneumoniae e SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP Eles dão uma reação positiva (meio azul).
• Para Escherichia coli O resultado deve dar negativo, isto é, espera -se que não haja mudança de cor (verde) ou que fique amarelo devido à fermentação da glicose.

Limitações

Não use caldo que mostre turbidez, precipita, mudança de cor ou qualquer sinal de deterioração.

Referências

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Isolamento microbiológico de Salmonella spp. e ferramentas moleculares para detecção. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Disponível em: Scielo.org.co
2. Bbl. Caldo malonato, Ewing modificado. 2007. Disponível em: BD.com
3. Laboratórios Senna. Caldo de Malonato. Disponível em: científico.com
4. Renylab. Caldo de Malonato. 2013. Disponível em: este.Renylab.ind.Br
5. Diagnóstico da mbiologia. Caldo de Malonato. Disponível em: Mbiology.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.
7. Laboratórios de Conde Pronadisa. Caldo de fenilalanina malonato. Disponível em: Condalab.com