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Ele Biureto É um reagente usado para a determinação de proteínas de cadeia longa e de cadeia curta. É especialmente usado na área de química analítica e uroanálise para investigar a concentração de proteínas totais de soro, plasma e urina.

Os valores de proteína podem ser aumentados ou diminuídos em certas patologias. As imagens de hipoproteinemias geralmente são apresentadas em pacientes com doença renal, em desnutridos e em pacientes com infecções crônicas.

Estrutura química do complexo formado no teste de biureto positivo da reação de biureto. Fonte: Yikrazuul [Domínio Público]/Flickr

Embora a hiperproteinemia seja observada em patologias como mieloma múltiplo, lúpus eritematoso sistêmico, endocardite bacteriana, meningite bacteriana, macroglobulinemia de Waldenstrom, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros, entre outros.

Por outro lado, a presença de proteínas na urina é devido à filtração da albumina pelo rim. Este é um comportamento patológico que deve ser estudado.

Nesse sentido, o biureto é muito útil, pois permite quantificar a presença de proteínas séricas, plasma, urina, entre muitas outras amostras.

Até o biureto pode ser usado para investigar a presença e a concentração de proteínas em amostras de composição desconhecidas ou desconhecidas. Portanto, é amplamente utilizado na área de pesquisa.

O teste de biuret é baseado na detecção de links peptídicos. O teste é dado em meio alcalino. A amostra deve conter pelo menos dois links peptídicos para que um complexo de cores de potência violeta possa ser formado. O complexo é formado pela união dos links e pelo íon de cobre.

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Base

O reagente de biureto é composto de hidróxido de potássio, sulfato cúprico e sódio e potássio tartrato. O hidróxido de sódio é usado para alicalizar o ambiente, uma vez que essa condição é indispensável para que a reação ocorra.

Substâncias que reagem com proteínas são sulfato cúprico, enquanto o sódio Tartrato tem a função de não permitir a formação de hidróxido de cobre, que tende a precipitar e interferir na reação.

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Se na amostra houver substâncias que tenham ligações peptídicas (polipeptídeos ou proteínas), o teste dará positivo.

Uma reação é interpretada como positiva quando a solução se torna violeta. A cor é produzida pela formação de um complexo entre pelo menos duas ligações peptídicas que possuem o grupo co-NH e os cátions cúpricos atuais.

O complexo violeta pode ser formado de duas maneiras: um é devido à perda de prótons dos grupos entre os grupos que se ligam ao metal (desbaste) e o outro pela união de elétrons de oxigênio e nitrogênio que são livres e se ligam ao cobre com cobre.

Esta reação pode variar em intensidade e cor, dependendo do tipo de proteína.

O teste pode ser realizado qualitativamente ou quantitativamente. Na forma qualitativa, é relatado como positivo ou negativo. Enquanto na forma quantitativa, a concentração pode ser medida pelo método espectrofotométrico.

A reação é lida entre 540-560 nm. A intensidade da cor é diretamente proporcional à concentração de links peptídicos na amostra.

Reagentes

-Hidróxido de sódio (NaOH) a 20%

-1% de sulfato cúprico de penta -hidrato (CuO₄. 5h₂QUALQUER)

-Misto de sódio e tetra -hidrato de potássio Tartrato (KNAC₄H₄QUALQUER₆· 4h₂QUALQUER)

Estabilidade do reagente de biureto

-Deve ser mantido em refrigeração.

Procedimento

Técnica

-Coloque 100 µl da amostra ou o padrão a ser analisado em um tubo de ensaio.

-Adicione 2 ml de hidróxido de sódio.

-Misture muito bem.

-Adicione 5 ml de reagente de biureto.

-Misture e deixe 25 minutos à temperatura ambiente, tampe e proteja da luz.

-Observe a formação ou não de cor e meça espetofotometricamente.

Curva de calibração

Para executar a curva de calibração, você pode usar a albumina bovina sérica como um padrão. Várias concentrações são preparadas a partir disso. Por exemplo, 25, 50, 75, 100, 125 e 150%.

A reação é montada com todas essas concentrações conhecidas e a absorvância é lida em um comprimento de onda de 540 nm. Com os dados das concentrações conhecidas e as leituras absorventes, a curva de calibração é realizada.

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Em cada determinação ou muitas amostras processadas, é aconselhável. Como padrão de calibração, você pode usar albumina bovina sérica 0,1-2 mg/ml.

As medições são feitas em um espectrofotômetro de 540 nm.

A linearidade é cumprida até uma concentração de 12 g/dl.

Interferência

Substâncias que interferem no teste de biureto

Embora não seja muito frequente, deve -se notar que durante a execução deste teste, algumas substâncias podem interferir. Por exemplo, a presença de amônio pode inibir a formação de cores.

Da mesma forma, outras substâncias podem absorver o mesmo comprimento de onda, como certos pigmentos.

Por outro lado, uma interferência pode ser gerada quando outra substância diferente do link peptídico forma um complexo com sal de metal. Exemplo: alguns carboidratos e certos lipídios.

No caso de mostrar para analisar algum tipo de precipitado, ele deve ser filtrado ou centrifugado antes de configurar o teste.

Substâncias que não interferem no teste de biureto

O teste não é afetado pela presença de:

-Bilirrubina até uma concentração de 20 mg/dl.

-Hemoglobina para uma concentração de 750 mg/dl.

-Dextrano a uma concentração de 30 g/L.

-Triglicerídeos até uma concentração de 4000 mg/dl.

Vantagens

-É um método simples de executar.

-É um teste econômico.

-Tem alta especificidade de proteína.

-Poucos interferências.

Desvantagens

Tem pouca sensibilidade para detectar baixas quantidades de proteínas. O trabalho realizado por Fuentes e colaboradores afirma que o método de teste de biureto possui um limite de detecção de 1 mg/ml de proteína e um limite de quantificação de 3 mg/ml.

No entanto, outra pesquisa realizada na Universidade da Amazon relata valores muito mais baixos. O limite de detecção que o estudo relata é de 0,020 mg/ml e o limite de quantificação de 1.33 mg/ml.

Formulários

O reagente ou teste de biuret é usado para determinação de proteínas em amostras clínicas e não clínicas em laboratórios de rotina e pesquisa.

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Patologias que estudam ou diminuíram Proteínas

Em muitas patologias, é importante determinar a concentração de proteínas totais em amostras clínicas, sendo capaz de ser alta ou diminuída.

Eles estão elevados em:

-Mieloma múltiplo,

-Lúpus eritematoso sistêmico,

-Endocardite bacteriana,

-Meningite bacteriana,

Waldestrom macroglobulinemia, entre outros.

Está diminuído em:

-Insuficiência renal,

-Pessoas com desnutrição grave,

-Pacientes com infecções crônicas, entre outros.

Amostras clínicas

As amostras clínicas mais comuns são soro, plasma e urina. O valor normal das proteínas séricas ou plasmáticas é 6.0-8.8 gr/dl.

A concentração de proteínas em adultos em adultos não excede a figura de 150 mg/24 de hora.

Valor normal do índice de urina/creatinina na urina

Bebês: < a 0,50 mg

Crianças de 2 anos ou mais: índice: 0,20 mg

Adultos: < 0,2 mg

Amostras não clínicas

A reação biureta pode ser usada para muitos tipos de amostras não clínicas, como produtos lácteos, soros anti -fídeos ou qualquer substância desconhecida à qual a presença de proteínas é desejada investigar.

Referências

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3. "Biuret." Wikipedia, enciclopédia livre. 19 de junho de 2019, 16:37 UTC. 26 de junho de 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Padronização do método de biuret para quantificar a proteína total em soro antibotrópico multi -propósito produzido no Centro Nacional de Produtos Biológicos. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Disponível em: repositório.Ins.GO.educaçao Fisica
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