Potata de dextrose, preparação e uso

Ele Ágar de batata de dextrose É um meio de cultura nutricional sólido e não seletivo. Nele, espécies bacterianas e fúngicas podem crescer, mas seu uso é indicado especialmente para o isolamento de fungos filamentosos e leveduras. Também é conhecido como meio pda pela expressão em ágar inglês de dextrose de batata.

É particularmente útil para o isolamento de fungos fitopatogênicos, ou seja, aqueles que afetam os vegetais. Para semear as amostras de vegetais infectados, outros meios como Sabouraud ou Malt-Agar podem ser usados, no entanto, para uso rotineiro, o ágar de dextrose papa é preferido pela obtenção.

Aspergillus Níger e Sinemas em Dextrose Pope Agar. Fonte: Alextrevelian 006 na Wikipedia inglesa [domínio público]/joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/4.0)]

Também é usado para a contagem de colônias de fungos em amostras de cosméticos, produtos farmacêuticos e alguns alimentos leiteiros. Também é propício a semear amostras de raspagem de pele em busca de dermatófitos, que crescem muito bem neste meio, desenvolvendo seus pigmentos característicos.

O papa de dextrose médio é um meio muito simples e fácil de preparar no laboratório. Ele contém, como o nome indica, infusão de batata, dextrose e ágar -gar. Além disso, substâncias inibitórias podem ser adicionadas para evitar o crescimento bacteriano e aumentar a seletividade para espécies de fungos.

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Base

O ágar de dextrose papa é um meio de cultura que fornece os elementos nutricionais necessários para o desenvolvimento de fungos filamentosos e leveduras.

A combinação de infusão de batata com glicose fornece a fonte de energia perfeita para que haja um crescimento satisfatório de fungos. Enquanto Agar é aquele que proporciona consistência ao meio ambiente.

O meio sozinho não inibe o crescimento de bactérias, portanto é um meio não seletivo. Para fazer isso, necessidades seletivas do agregado de substâncias inibitórias, como ácido tartárico ou antibióticos.

Preparação

-Agar caseiro (não comercial) de papai dextrose

Placas de Petri

Está preparado da seguinte maneira:

Em primeiro lugar, as batatas são lavadas muito bem removendo a terra que possuem. Eles são cortados em fatias finas com tudo e concha. 200 gr de batatas são pesados ​​e fervam em um litro de água destilada, por meia hora.

O tempo está acabado com filtros ou coe toda a preparação através da gaze.

O líquido obtido é concluído com água destilada até atingir um litro. A infusão é adicionada 20 gr de ágar -gar e 20 gr de dextrose, mistura bem e autoclava a 121 ° C, 15 libras de pressão por 15 minutos.

Pode atendê -lo: coevolução

Vamos esfriar até 50 ° C e sirva em placas estéreis de Petri. As placas preparadas são mantidas na geladeira.

Cunhas

Você também pode preparar cunhas de batata de dextrose.

Nesse caso, antes de esterilizar na autoclave. Salvar em uma geladeira.

O meio está em um pH de 5.6 ± 0.2, no entanto, alguns laboratórios adicionam 10% de ácido tartárico para diminuir o pH para 3,1 ± 0.1 com o objetivo de inibir o crescimento bacteriano.

Nesse mesmo sentido, outros laboratórios preferem adicionar antibióticos para fazê -lo seletivo para o cultivo de fungos e evitar o desenvolvimento bacteriano.

-Preparação comercial do ágar de dextrose papa

Pese 39 Gr de desidratados e dissolução comercialmente disponível em um litro de água destilada. Sair por 5 minutos.

A mistura é aquecida mexendo com frequência até sua dissolução total. Posteriormente, é esterilizado em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Você pode preparar pratos ou cunhas. Prossiga como descrito acima.

O pH é de 5,6 ± 0,2. Se o pH de 3,1 for desejado, 14 ml de ácido tartárico esterárico devem ser adicionados a 20% antes de servir nas placas.

A cor do meio despreparado é bege e preparado é um âmbar claro com uma aparência um pouco nublada ou opalescente.

Formulários

Processo para plantar amostras de plantas em pote de dextrose

-Para folhas com manchas

As folhas são cortadas em pedaços.

Em um recipiente de 50 cc com 50% de álcool, coloque as peças das folhas (peças manchadas e saudáveis), para desinfetar a superfície em 20 a 30 segundos. Jogue álcool e adicione hipoclorito de sódio 20% por 40 a 50 segundos se forem folhas finas e aumente o tempo para 80 segundos se for casca e troncos.

Jogue o hipoclorito de sódio e pegue as peças desinfetadas com um grampo estéril e coloque -as na superfície média (um máximo de 10 peças). Coloque a data e a incubar de 20 a 30 ° C.

-Para frutas e tubérculos

Se a fruta for carnuda, abra a fruta afetada pelo fungo e pegue peças com um bisturi estéril, tanto do doente quanto da parte saudável, e coloque -o na superfície do ágar.

Se a fruta for cítrica, como um limão ou laranja, suas sementes devem ser abertas e semear.

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Quando a superfície da fruta é afetada e a coragem é observada, o ideal é usar o método ralado na placa; Isso consiste em tocar o Spousic com uma espátula esterilizada e resfriada em forma de "L" e depois semeada em Zigzag 2 a 3 vezes no ágar.

-Para grãos

Eles desinfetam o mesmo que descrito nas folhas e posteriormente colocados no ágar.

-Para galhos e caules

Um raspecue do córtex é realizado e, em seguida, as peças da parte saudável e doente são tiradas e semeadas diretamente no ágar.

As placas plantadas são incubadas em aerobiose a 20 a 30 ° C por 72 horas.

Processo para plantar escamas de pele, cabelos ou unhas no ágar de dextrose papa

A amostra deve ser realizada usando uma folha de bisturi nº 11, para cortar o cabelo, a pele ou as escalas de unhas afetadas em busca de dermatófitos. Antes de pegar a amostra, a área com 70% de álcool deve ser desinfetada.

-Amostra de pele

Nas lesões fraudulentas, a borda da lesão deve ser raspada, porque lá é mais provável que encontre o fungo.

Em lesões exsudativas, a amostra é coletada com cotonete seco ou úmido. Sow imediatamente sobre o papa dextrose ou ágar Sabouraud. Evite meios de transporte.

Outro método de tomada de amostra é através da técnica de Mariat e Ada Campos's Carpet Square. Nesse caso, a área afetada é esfregada 5 vezes com um pedaço de lã estéril para sua colheita subsequente.

A amostra pode ser colocada diretamente no meio de cultura.

-Amostra de cabelo

Dependendo da patologia, a parte afetada ou as partidas da raiz pode ser cortada. Coloque a amostra no meio de cultura.

-Amostra de unha

Eles podem ser raspados ou cortar uma parte específica da unha afetada. Vai depender do tipo de lesão.

Corte a amostra em bits de 1 mm antes de semear, a fim de aumentar a probabilidade de contato de fungo com o meio de cultura.

Procedimento de identificação

As colônias obtidas na placa são isoladas em tubos contêm.

O estudo microscópico (observação de estruturas e suas formações) pode ser feito por microculturas ou observação direta no microscópio entre a folha e a lamela.

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Colônias contam

Este meio também pode ser usado para determinar a carga de fungos e leveduras presentes em amostras de plantas, alimentos, cosméticos ou medicamentos. Para esse fim, é usado um ágar suplementado com batata com antibióticos, como: (cloranfenicol, clorotetraciclina ou ambos).

Despeje 1 ml da amostra - de preferência diluída - em uma placa de Petri estéril e vazia, depois derreta uma pistola de batata de dextrose e deixe esfriar a 45 ° C. Despeje sobre a placa de Petri e gire até homogeneizar. Deixe em repouso até.

Incubar em aerobiose a 20-25 ° C (moldes) ou a 30-32 ° C (leveduras) por 5 a 7 dias ou mais, dependendo do tipo de fungo procurado e do tipo de amostra. Duas placas podem ser usadas para incubar ambas as faixas de temperatura.

Professor de colônias de fungos em uma amostra de comida. Ágar de batata de dextrose suplementado com antibióticos. Fonte: pxhere.com foto/777267

Manutenção de cepas de fungos

Dextrose Pope Agar pode ser usado para manter cepas viáveis ​​de fungos por vários anos.

Para isso, o fungo é cultivado em fatias de batata de dextrose e, uma vez que o fungo é cultivado, é coberto com óleo mineral. O óleo deve ser esterilizado em autoclave por 45 minutos e ter uma viscosidade aproximada de 300 a 330 Saybolt. O óleo deve exceder 1 a 2 cm a ponta da moldura.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, 1 ou 2 placas devem ser tomadas e incubadas a 25 ° C por 48 horas ou 20 ° C por 96 horas. Bom controle de esterilidade é aquele em que o desenvolvimento das colônias não é observado.

Você também pode usar controles conhecidos ou certificados, como:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida Albicans ATCC 10231, Aspergillus Brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton Mentagrophytes ATCC 9533. Em todos os casos, é esperado um bom crescimento.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Pote de glicosado. 2015. Disponível em: Britanialab.com
2. Laboratórios Neogen. Batata de dextrose. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com
3. Laboratório de Insumolab. Ágar de batata de dextrose. Disponível em: Insumolab.Cl
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6. Aceituno m. Avaliação da qualidade microbiológica na sombra dos olhos, tipo de poeira compacta de um laboratório de produção nacional, de acordo com a Pharmacoea USP 2005. Tese para optar pelo título de químico farmacêutico. Universidade de San Carlos da Guatemala.
7. CuÉtara m. Processamento de amostras de superfície. IBERO -American Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12