Agar m.R.O que é, fundamento, preparação, usa

Ele Agar m.R.S. É um meio de cultura sólida seletiva, usado para o isolamento e contagem de bactérias do ácido lático, especialmente do gênero Lactobacillus. Este ágar foi criado em 1960 por Man, Rogosa e Sharpe, carregando o meio o mesmo nome, mas devido à sua complexidade, a abreviação m é frequentemente usada.R.S.

É composto de proteína peptona, extrato de carne, extrato de levedura, glicose, monoleato de sorbitano, fosfato de dibotássio, acetato de sódio, citrato de amônio, sulfato de magnésio, sulfato de manganês e ágar.

Han e Sharpe Man Agar (M.R.S.) semeada com Lactobacillus sp. Fonte: Foto doada para este artigo pelos autores: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tirada durante a investigação intitulada: Avaliação de bactérias e bifidobactérias do ácido lático com potencial probiótico no leite materno e fezes infantis.

Essa composição permite o bom desenvolvimento de bactérias do ácido lático a partir de amostras clínicas, como fezes, secreção vaginal, amostras orais e leite materno, além de laticínios e alimentos de carne.

Não é usado rotineiramente em laboratórios clínicos, porque as bactérias do ácido lático raramente estão envolvidas em processos patológicos. No entanto, na área de microbiologia alimentar, o uso de ágar m é mais frequente.R.S.

Por outro lado, este meio é usado por alguns centros de pesquisa cujo objetivo é o estudo de bactérias do ácido lático.

Base

O homem, rogosa e Sharpe têm uma composição bastante complexa. Ao rasgar a função que cada um de seus componentes cumpre, você pode explicar sua base.

Proteína peptona, extrato de carne, extrato de levedura e glicose, são nutrientes que fornecem a fonte de carbono, nitrogênio, vitaminas e minerais necessários para o crescimento bacteriano. Além disso, a glicose é a fonte de energia universal usada na maioria dos meios de cultivo.

Por outro lado, para favorecer o crescimento de bactérias do ácido lático, é necessária a presença de cofatores indispensáveis ​​(cátions) no metabolismo de Lactobacillus e bactérias relacionadas; Esses compostos são sais de sódio, magnésio e manganês.

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Da mesma forma, o monoleoato de sorbitan ou polissorbato 80 é uma fonte importante de ácidos graxos quando absorvidos como nutrientes.

Além disso, a Lei de Citrato de Monoleoato de Sorbitão e Amônio inibindo o desenvolvimento da flora que o acompanha, especialmente bactérias gram -negativas, fornecendo o caráter seletivo deste ágar.

Finalmente, o ágar -gar é aquele que fornece a consistência sólida ao ambiente.

Existem outras variantes do ágar Sharpe Rogosa; Um deles é o suplementado com cisteína (M.R.S.c), muito útil para o isolamento de bifidobactérias, entre outros microorganismos. Por outro lado, há a MRS suplementada com neomicina, paromomicina, ácido butimal e cloreto de lítio, especial para a contagem seletiva de bifidobactérias em produtos lácteos.

Preparação

Pesa 68,25 gramas do meio desidratado e se dissolve em um litro de água destilada. Deixe repousar por 5 minutos. Dissolver -se em sua totalidade liderança a uma fonte de calor acenando com frequência e ferva por 1 a 2 minutos. Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Ao sair da autoclave, deixe -o por alguns minutos e distribuir ainda quente em placas estéreis de Petri.

Deixe solidificar e investir as placas, encomendar em plaquetas e salvar na geladeira até usar. Deixe as placas tomarem temperatura ambiente antes de usá -las.

O pH médio deve ser de 6,4 ± 0,2. Algumas casas comerciais recomendam o pH entre 5,5 e 5,9.

O meio desidratado é bege e preparado é âmbar escuro.

Ambas as placas desidratadas e preparadas devem ser armazenadas de 2 a 8 ° C.

Formulários

As placas de ágar M.R.S. Eles podem ser semeados na superfície (exaustão ou com drigalski spatula). Também pode ser semeado por profundidade. As placas devem ser incubadas a 37 ° C em microaerofilia (4% de ou₂ e 5-10% co₂) Por 24 a 72 horas.

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O método semeado é escolhido de acordo com o objetivo seguido (isolamento ou contagem).

Características das colônias

As colônias presuntivas de Lactobacillus crescem de cor esbranquiçada e têm uma aparência mucóide ou cremosa neste ágar. Posteriormente, eles devem identificar.

Isolamento de bactérias do ácido lático

Para isso, a superfície semeada é usada. As amostras a serem processadas requerem um procedimento anterior. 

No caso de amostras de leite materno, recomenda -se a centrífuga 1 ml da amostra em 14.000 RMP por 10 minutos, a fim de remover a camada de gordura. 900 µl são descartados e, nos 100 µl restantes, o sedimento é suspenso e a superfície do ágar m.R.S. Então você deve distribuir uniformemente com uma espátula drigalski.

No caso de amostras de fezes, uma (1) grama de fezes é pesada e 9 ml de água estéril e animada 0,1%é homogeneizada, correspondendo a uma diluição 1/10. Em seguida, são realizadas diluições em série, até uma diluição final de 10^-4.

Finalmente 100 μl de diluições 10 são tomados^-2, 10^-3 e 10^-4 E cada diluição é semeada na Sra. Agar, distribuindo uniformemente com uma espátula drigalski.

Contagem de bactérias do ácido lático

Nesse caso, a semeada é feita por profundidade.

Para amostras de leite materno, 1 ml é coletado e colocado em um tubo de plástico cônico estéril. O Agar MRS é adicionado a uma temperatura aproximada de 40 ° C a um volume final de 25 mL, obtendo uma mistura homogênea. Posteriormente, é derramado em Petri estéril.

Para amostras de fezes, são realizadas diluições, conforme descrito acima. 1 ml de cada diluição é tomado e tubos de plástico estéreis. A MRS de ágar mastro é adicionada a um volume de 25 ml.

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A mistura de cada diluição é derramada uniformemente em placas estéreis de Petri. Finalmente deixe ficar até sua polimerização.

As colônias contam com o homem e o ágar Sharpe (M.R.S.). Fonte: Foto doada para este artigo. Autores: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tirada durante a investigação intitulada: Avaliação de bactérias e bifidobactérias do ácido lático com potencial probiótico no leite materno e fezes infantis.

No nível de pesquisa

Todos os dias o estudo das bactérias do ácido lático se torna mais interesse; Especialmente os pesquisadores procuram conhecer novas cepas e seu potencial como fermentos de iniciativa para padronização na fabricação de produtos lácteos, entre outros usos.

Nesse sentido, Alvarado et al. (2007) usaram ágar m.R.S. Para realizar um estudo em que eles isolaram, identificaram e caracterizam as bactérias do ácido lático presentes em um queijo artesanal andino de Ahumado.

No queijo, eles encontraram a presença de bactérias dos gêneros Lactococcus e Lactobacillus, e concluíram que as misturas de cepas isoladas são adequadas ao iniciar as cepas na fabricação de queijos de leite pasteurizado.

Por outro lado, Sánchez y cols. (2017) usou Agar M.R.S. Para investigar a presença de bactérias do ácido lático no trato digestivo de leitões, a fim de usá -las como probióticos nativos que aumentam a produtividade de porcos saudáveis.

Com este meio, eles conseguiram isolar quatro espécies: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae e Pediococcus pentotosaceus.

Da mesma forma, Báez et al. (2019) usou o envelhecimento m.R.S. Avaliar bactérias do ácido lático (BAL) e bifidobactérias com potencial probiótico no leite materno e fezes infantis.

Eles conseguiram isolar 11 Bal e 3 Bifidobacteria sp No leite materno e 8 bal e 2 Bifidobacteria sp. Em fezes. Todos cumpriram certos parâmetros que os credenciaram como bactérias com atividade probiótica.

Os autores concluíram que tanto o leite materno quanto as fezes de bebês que amamentam servem exclusivamente como fontes naturais de bactérias probióticas.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do ágar m.R.S. Controles como:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus Damnosus MKTA 29358, Escherichia coli e Bacillus cereus.

Os resultados esperados são crescimento satisfatório para as 6 primeiras bactérias, enquanto E. coli e Bacillus cereus deve ser inibido em sua totalidade.

Referências

1. Laboratório da Britânia. M.R.S ágar. Disponível em: Britanialab.com