Agar preso

Corynebacterium estrato em ágar dente. Fonte: Nathan Reading de Halesowen, Reino Unido, CC por 2.0, Wikimedia Commons

Qual é o ágar dentecedores?

Ele Agar preso (Deficiente de electrólitos de cistina-lactose-eletrólitos) é um meio de cultura sólida diferencial, usada para o diagnóstico de infecções do trato urinário. A composição do meio de cultura é projetada para o bom crescimento de patógenos urinários e é ideal para a quantificação de unidades de formação de cólon (UFC).

O meio de cultura dentecedores é não -seletivo, uma vez que os microorganismos gram -negativos e gram -positivos podem crescer nele. Mas isso não é um problema, porque a maioria das infecções urinárias é causada por um único tipo de microorganismo.

No caso de infecções polimicrobianas, 2 ou 3 bactérias diferentes podem ser alcançadas, mas é muito raro, e na maioria das vezes são amostras contaminadas.

Entre as bactérias Gram -negativas que podem crescer neste meio estão os bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outros bacilos entéricos, sendo os uroopatógenos mais frequentemente isolados em amostras de urina, o seguinte: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, proteus mirabilis, Morganella Morganii, Pseudomonas aeruginosa, entre outros.

Além disso, entre as bactérias gram -positivas que podem crescer neste meio estão Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophytic, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Chorynebacterium sp, Lactobacillus sp E eles podem até cultivar leveduras, como complexo Candida Albicans.

No entanto, devido à composição química do meio ambiente, não permite o crescimento de alguns patógenos geniturinários exigentes, como Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella Vaginalis, entre outros.

Fundação do ágar dente

O meio de cultura dentecedores tem como fonte de extrato de energia de carne, caseína hidrolisada e gelatina hidrolisada hidrolyz. Eles fornecem nutrientes para o desenvolvimento de pequenas bactérias exigentes.

Ele também contém cistina, um aminoácido que permite o crescimento de coliformes, distinguíveis por seu tamanho pequeno.

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Ele também contém como uma lactose de carboidratos fermentáveis; portanto, essa mídia é diferencial, sendo capaz de distinguir as bactérias fermentadas da lactose não -fermentando.

As bactérias fermentadas giram o pH médio pela produção de ácido, desenvolvendo colônias amarelas, enquanto as bactérias não -fermentadas não geram mudanças no meio; portanto, eles tomam a coloração do ágar original, a cor verde.

A reação de fermentação é revelada graças à presença do indicador de pH, que neste meio é Bromotimol Blue.

Por outro lado, a baixa concentração de eletrólitos médios inibe o crescimento invasivo típico do gênero Proteus, chamado efeito de enxames. Isso gera uma vantagem em relação a outras mídias, pois permite a contagem do UFC, incluindo se o gênero estiver presente Proteus.

No entanto, a baixa concentração de eletrólitos inibe o crescimento de algumas espécies do gênero Shigella, Sendo uma desvantagem em relação a outras mídias.

Fundação do ágar dentecedores (Bevis)

Há uma variante ou modificação deste meio, feita por Bevis, que incorporou a composição original da fucsina ácida (Andrade). O mesmo atua junto com o azul de bromotimol para diferenciar as bactérias de fermentação de não -fermentação.

A diferença entre o ambiente convencional e modificado é a cor que as colônias adotam. No caso de bactérias fermentadoras de lactose, as colônias adquirem uma cor laranja avermelhada com uma auréola rosa ou vermelha, enquanto a não fermentação é de mancha cinza.

Formulários

Agar dentecedores é usado exclusivamente Para amostras de urina amostras. O uso deste meio é especialmente frequente nos laboratórios europeus, enquanto na América é menos usada.

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A coleta da amostra deve atender a certos parâmetros para obter resultados confiáveis, incluindo:

Não tomar antibióticos antes da tomada de amostra.

De preferência, pegue a urina da primeira hora da manhã, pois está mais concentrada, quando não é possível tomar amostra por métodos invasivos.

Lave bem os órgãos genitais antes de levar a amostra.

Descarte o primeiro jato de micção e depois coloque o recipiente.

Colete entre 25 a 30 ml da urina em um recipiente estéril bem rotulado.

Leve imediatamente o laboratório cercado no gelo.

Ele deve ser processado antes de 2 horas de emissão ou refrigerado a 4 ° C por um máximo de 24 horas.

Amostras de urina

A amostra de urina deve ser diluída 1:50.

Para diluição, colloqar 0,5 ml de urina do paciente e diluído com 24,5 ml de solução fisiológica estéril. Meça 0,1 ml da urina diluída e semeia por superfície com drigalski spatula no meio dente.

Este é o método semeado indicado para contar colônias. É por isso que é usado em amostras de urina, pois os resultados devem ser expressos no UFC/ML.

Para a quantificação das colônias obtidas, prossiga da seguinte forma: conte as colônias da placa e multiplique por 10 e depois por 50. Esta é a quantidade de UFC/ml de urina.

Interpretação

Entidades acima de 100.000 infecções urinárias ufc/ml -ndica.

Encontrando abaixo de 1000 UFC/ML- Não há infecção.

Entre 1000-10.000 ufc/ml -dudoso, possível contaminação, amostra repetida.

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Um grama deve ser feito para as colônias cultivadas em detabilidade.

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Por exemplo, se for um Bacillus Gram -negativo, será semeado em um ágar MacConkey, onde a fermentação ou não de lactose é corroborada. Além disso, um ágar nutritivo é anexado para realizar o teste de oxidase.

No caso de Gram revelar cocos positivos para Gram, ele pode estar sujeito a ágar salgado de manitol e ágar nutritivo. Neste último, o teste da catalase é realizado. Finalmente, se forem observados leveduras, serão semeadas em um ágar Sabouraud.

Muitos laboratórios ignoram o uso da média e preferem usar apenas sangue, macconkey e ágar nutritivo para semear amostras de urina.

Preparação

Em uma felola com um litro de água destilada, dissolva 36,2 gr de ágar de pó dente. Após 5 minutos de descanso, aqueça o ágar ressuscado, misturando -se constantemente até ferver por 1 minuto.

Em seguida, esterilize a 121 ° C por 15 minutos na autoclave. Tempo concluído, retire da autoclave e deixe esfriar até que uma temperatura de 45 ° C seja atingida. Posteriormente, é servido entre 15-20 ml em cada Petri estéril.

O procedimento servido das placas deve ser realizado dentro de um sino de fluxo laminar ou na frente do isqueiro de Bunsen, para evitar contaminação.

As placas servidas podem solidificar, pedir em uma forma invertida e armazenadas em uma geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O pH final do meio preparado deve estar em 7,3 ± 0,2.

Referências

1. Recomendações para o diagnóstico microbiológico da infecção urinária. Chil. Infectol. Recuperado de Scielo.org.
2. Metade presa. Recuperado do britanialab.com.