Preparação de meios de cultura

A preparação da mídia de cultura é uma metodologia para cultivar microorganismos, a fim de estudá -los

Qual é a preparação da mídia de cultura?

O Preparação de meios de cultura É uma metodologia de rotina usada em laboratórios para o crescimento dos microorganismos desejados. Os meios de cultura são preparações sólidas, líquidas ou semi-sólidas que todos os nutrientes necessários para o desenvolvimento de uma população microbiana têm.

Em geral, os meios para cultivar microorganismos são ricos em proteínas e aminoácidos e geralmente contêm algum componente que favorece o crescimento do organismo que você deseja estudar, como vitaminas, sangue, soro, entre outros.

Não há meios de cultura geral ou universal, uma vez que sua composição varia dependendo das necessidades do microorganismo de interesse. Algumas bactérias podem ser desenvolvidas em qualquer meio de cultura, mas outras têm requisitos especiais.

Em que consiste?

Microorganismos, como fungos e bactérias, não podem ser estudados individualmente devido ao seu tamanho microscópico. Portanto, eles devem ser cultivados em meios artificiais que permitam o aumento significativo da população.

Por exemplo, se queremos estudar bactérias, precisamos fornecer -lhes as condições apropriadas para que elas possam proliferar e formar uma colônia (que pode ser observada a olho nu).

A preparação da mídia de cultura varia amplamente, dependendo do tipo de microorganismo que você deseja cultivar. Antes de prepará -lo, é necessário conhecer as necessidades nutricionais básicas do organismo de trabalho.

Os componentes mais comuns usados ​​em meios de colheita serão descritos abaixo para ter uma idéia geral de sua preparação:

Agar

É usado em culturas como um agente de gelificação e acrescenta quando é procurado um meio sólido ou semi -sólido. O primeiro agente solidificante usado na preparação da mídia foi a gelatina, mas em 1883 o ágar foi introduzido no mundo da bacteriologia por w. Hesse.

O ágar do tipo bacteriológico tem como componente principal um polissacarídeo de ramificações complexas, extraído de algas. Este composto é usado como espessante de comida comum, como sorvete e geléia.

É um elemento muito valioso na microbiologia por vários motivos. Principalmente, porque os microorganismos não podem degradá -lo, liquefias a uma temperatura de 100 ° C e permanece em um estado líquido até atingir 45 ° C ou menos.

Caso você queira preparar um meio sólido, a concentração de ágar deve estar em torno de 1,5%, enquanto os semi -solidos devem ser preparados de 0,3 a 0,5%.

Fluidos

O cultivo de organismos patogênicos precisa de fluidos corporais para que possam se desenvolver como em seu ambiente natural.

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Por esse motivo, sangue completo ou desfibrado é adicionado. O fluido é extraído de um animal saudável e, uma vez esterilizado, é adicionado no meio de cultura.

Extratos

Eles são obtidos de diferentes partes animais (como carne ou fígado) ou vegetal (sementes) e são processados ​​para obter um concentrado sólido na forma de macarrão ou poeira.

Os mais comuns são os extratos de fermento, malte e carne.

Peptonas

Esses compostos orgânicos são obtidos por enzimática ou química de tecidos animais ou vegetais. O objetivo é adicionar conteúdo rico em aminoácidos, que são as unidades fundamentais das proteínas.

Absorventes de impacto

Os "buffers", ou sistemas de absorção de choque, evitam mudanças repentinas de pH e ajudam a manter o intervalo ideal que o tolera o organismo.

A maioria dos organismos pode desenvolver adequadamente um pH de 7, embora algumas bactérias preferam mídia alcalina. No entanto, existem bactérias que resistem às variações de pH entre os valores de 6 e 9.

Em espécies sensíveis ao pH, o dano não é produzido pela quantidade excessiva de hidrogênio ou íons hidroxila, mas pelo aumento de ácidos fracos ou bases que podem penetrar na célula.

Da mesma forma, os indicadores de pH são adicionados para poder monitorá -lo e evitar desvios causados ​​por fermentações ou outros processos.

Metas

O principal objetivo ao preparar um meio de cultura é adicionar todos os componentes necessários para permitir o desenvolvimento bem -sucedido do organismo que deseja ser isolado. A combinação de componentes e nutrientes mais eficaz para alcançar os meios desejados deve ser identificada.

Tanto a preparação quanto o armazenamento médio são críticos para garantir um crescimento bem -sucedido, uma vez que essas etapas dependem da composição do ambiente e da disponibilidade de nutrientes.

Deve -se levar em consideração que o cultivo de microorganismos é uma tarefa que é afetada por vários fatores externos ao ambiente cultural, como a intensidade da luz recebida, temperatura e nível de acidez ou alcalinidade do meio.

Portanto, cada uma dessas variáveis ​​deve ser levada em consideração e rigorosamente monitorada.

Tipos de mídia

Com base em sua composição

Com base em sua composição, existem três tipos principais de culturas: naturais ou empíricos, semi-sintéticos e sintéticos ou químicos meios.

Médio natural

Na mídia natural, a composição exata é desconhecida. Estes incluem ingredientes como leite, sangue diluído, sucos vegetais, extratos e infusões de carnes e peptonos.

Por razões econômicas, geralmente são adicionados componentes de baixo custo, como extrato de soja, soro, melaço, etc.

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Mídia semi-sintética

É chamado de semi-sintético se a composição do mesmo é parcialmente conhecida. Qualquer meio contendo ágar é um meio semi-sintético.

Entre eles, temos batata de dextrose, ágar czapek-dox, aveia, garra de peptona de carne, entre outros exemplos.

Médio sintético ou químico definido

Nesse caso, a composição do meio - como para a quantidade de carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo e qualquer outro fator de crescimento, é totalmente conhecido - é totalmente conhecido.

É muito útil se você deseja obter resultados reproduzíveis para outros pesquisadores.

Para os "microorganismos com os requisitos especiais de crescimento", você precisa adicionar os componentes necessários. Um exemplo desse tipo é Lactobacillus.

Com base no tipo de microorganismo

Da mesma maneira, há outra classificação para a mídia cultural baseada no tipo de microorganismo que pode crescer nele.

Seguindo esse princípio, temos o seguinte: meios gerais, enriquecimento, seletivo e diferenciais. Cada um é descrito abaixo:

Meios gerais

Eles admitem o desenvolvimento de uma ampla variedade de microorganismos. Se algum organismo precisar de condições especiais para seu crescimento, não será capaz de se desenvolver com sucesso nesse tipo de colheita.

Mídia de enriquecimento

O enriquecimento significa favorecer o crescimento de um certo tipo de microorganismo, mas nenhuma substância foi adicionada para impedir que outros tipos de micróbios cresçam nele.

Meios seletivos

Eles buscam o crescimento específico de um microorganismo, chamam fungos, bactérias, protozoários, entre outros. Para fazer isso, eles inibem o desenvolvimento de outros.

Para atingir esse objetivo, os compostos químicos mortais podem ser adicionados a um amplo grupo de microorganismos e inofensivos para o corpo de interesse, ou adicionar fontes de energia que são assimiláveis ​​pelo micróbio procurado.

Meios seletivos são usados ​​quando amostras médicas são coletadas para cultivar alguns microorganismos patogênicos. Aqui é necessário favorecer o crescimento do patógeno e inibir o desenvolvimento da flora microbiana normal do paciente.

Agar de sulfito de bismuto, por exemplo, não permite o crescimento de bactérias gram -positivas e um grande número de bactérias encontradas na cavidade gastrointestinal.

Portanto, é usado para cultivar as bactérias Gram -negativas que causam febre tifóide, Salmonella typhi, Em amostras fecais.

Meios diferenciais

Esse tipo usa alguma característica diagnóstica do organismo de interesse (peculiaridades em seu metabolismo, por exemplo) para poder identificá -las contra outra espécie que cresce no mesmo meio.

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Tanto a mídia diferencial quanto os meios seletivos são muito úteis na área de microbiologia clínica e saúde pública, uma vez que essas disciplinas precisam detectar a presença de microorganismos específicos relacionados a patologias ou condições ruins da higiene.

Você pode adicionar substâncias indicadoras na colheita que concedem uma característica distinta à colônia procurada. Por exemplo, para o Agar-eosina-Eosina Média de metileno (EMB abreviado) e o Agar-Macconkey são adicionados lactose e um indicador de pH.

Assim, quando uma colônia se desenvolve nessas mídias com a capacidade de fermentar lactose e produzir aldeídos, eles podem ser observados em uma cor especial.

Etapas para a preparação de meios de cultura

Atualmente, o cultivo pode ser comprado de uma maneira liofilizada. Portanto, a preparação é facilitada e apenas o produto permanece.

O conteúdo deve ser pesado (levando em consideração o valor final que você deseja preparar) e dissolvido em água destilada após todas as indicações do produto.

O conteúdo do meio líquido deve ser dividido nos recipientes desejados (placas de Petri, tubos etc.) para esterilização subsequente.

Para distribuir o meio sólido, é necessário derretê -lo usando um microondas ou enviando o material para um banho de água. O pH médio deve ser ajustado.

Geralmente o ágar é usado em tubos de teste ou em placas de Petri. Se o ágar solidificar -se em uma posição inclinada, com o ângulo apropriado para a borda final do terminal ser diagonal, é conhecida como flauta ou tubos pico inclinados.

Quando o ágar solidifica em uma posição totalmente vertical, é dado o nome de "Deep".

Depois de esterilizar a mídia - usando uma autoclave - eles os deixam esfriar. Estes devem ser manipulados em um ambiente livre de microorganismos, o mais comum é trabalhar com uma ignição mais clara que garante um ambiente asséptico em sua vizinhança.

Referências

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