Fundação Sim, Preparação e Usos

Ele SIM médio É um ágar semi -sólido e diferencial, especialmente projetado para ajudar a identificação de algumas bactérias, principalmente da família Enterobacteriaceae. É composto por tripteina, peptona, sulfato de ferro, sulfato de amônio, tiossulfato de sódio e ágar.

Este meio permite a execução de três testes importantes: a produção de sulfeto de hidrogênio (H₂S), a formação de indol e motilidade, a partir daí vem o acrônimo sim. Por causa de sua grande utilidade, não pode estar faltando em um laboratório de bacteriologia.

PARA. Middle Sim Comercial B. SIM H2S (-), Indol (-) e Motilidade (+) e Sim H2S (+), Indol (-), Motilidade (+) Teste de Teste. Fonte: a. Foto tirada pelo autor MSC. Marielsa Gil b. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/BY-SA/3.0)]

Ao contrário de outras mídias, isso deve ser semi -sólido para detectar a capacidade de movimento que algumas bactérias têm. Nesse sentido, esse teste funciona muito bem para Enterobactérias, mas não em bacilos negativos não fermentários, onde outros métodos são preferidos a usar, como a queda pendente.

O meio SIM permite distinguir certas propriedades específicas que caracterizam algumas bactérias em relação a outros. Por exemplo Escherichia coli é distinguido por ser H₂S (-), indol (+) e motilidade (+), enquanto Proteus mirabilis é H₂S (+), indol (-), motilidade (+).

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Base

É uma cultura que é considerada diferencial, porque seu uso consegue distinguir entre os microorganismos capazes de produzir sulfeto de hidrogênio daqueles que não o fazem; Ele também destaca aqueles que formam indol do triptofano daqueles que não se formam e finalmente diferenciam as bactérias móveis de imóveis.

Fonte de energia

Como qualquer meio de cultura, possui elementos que fornecem os nutrientes necessários para que os microorganismos não que ondem. Esses elementos são representados por peptones e triptein.

O desenvolvimento do microorganismo no ambiente é essencial para observar a presença ou ausência das características que isso significa que avalia.

Produção de sulfeto de hidrogênio

As cartas do acrônimo sim referem -se à produção de sulfeto de hidrogênio (H₂S). Bactérias capazes de formar sulfeto de hidrogênio levarão sulfato de sódio.

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Uma vez que o H for formado₂S -gas incolor -, isso reage com sal de ferro presente no meio, formando sulfeto ferroso, claramente visível (precipitado preto). As bactérias que não formam h₂S, deixe o meio de cor original (bege).

A presença de precipitado negro pode prejudicar a interpretação da motilidade. No entanto, sabe -se que a maioria das enterobactérias produtoras de HT₂S são motilidade positiva, como Salmonella, Proteus e Citrobacter. Além disso, o precipitado negro que cobre quase todo o meio sugere motilidade positiva.

Formação Indol

A segunda letra do sigla sim é o "i", que representa a formação de indol.

Nesse sentido, a tripta, além de ser uma fonte de nutriente, cumpre outra função fundamental. Essa peptona é rica em um aminoácido chamado triptofano, portanto, pode mostrar bactérias que produzem triptofanase.

Esta enzima é responsável por clivar no aminoácido triptofano, com a conseqüente formação de indol (substância incolor), ácido pirúvico e amônio.

É por isso que, para mostrar essa reação, é necessário. Qualquer um dos dois reage com o indol, formando um anel em forma de vermelho-fucsia na superfície do ágar. Se o anel colorido de fúcsia aparecer, o teste indol é interpretado como positivo.

As bactérias que não possuem essa enzima não formarão o anel e são interpretadas como um teste de indol negativo.

É importante observar que a prova indol deve ser a última a ser interpretada, uma vez que uma vez que o reagente é adicionado, o meio está impedindo a visualização da motilidade.

Motilidade

Finalmente a letra "M" da palavra sim significa motilidade. Para avaliar a motilidade, esse meio é estrategicamente semi-sólido, pois essa característica é essencial para observar se há ou não movimento bacteriano. As bactérias que têm flagelos são as que dão este teste positivo.

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Um teste positivo será evidenciado quando a turbidez for observada, tanto no inóculo inicial quanto em torno disso. Enquanto, bactérias não -mutuárias só se desenvolvem na jornada inicial do inóculo.

Preparação

SIM médio

Pesar 30 gr de meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e depois aquecida até ferver, mexendo frequentemente até sua dissolução completa.

Distribua a mistura em tubos de teste com tampa de algodão e autoclavato a 121 ° C por 15 minutos. Remova o rack dos tubos de autoclave e deixe solidificar em uma posição vertical, para que o meio esteja na forma de um taco.

Por sua conservação, é salvo na geladeira até o seu uso. O meio preparado deve ter um pH final de 7,3 ± 0,2.

Ao inocular o meio, isso deve estar à temperatura ambiente. A cor do meio é bege.

Reagente de Kovac

Meça 150 ml de amil ou isoamil ou álcool butílico. (Use um dos três mencionados).

Dissolva 10 gr de p-dimetilaminobenzaldeído. Em seguida, adicione lentamente 50 ml de ácido clorídrico concentrado.

O reagente pronto para uso é incolor ou amarelo claro. Deve ser mantido em garrafa de âmbar e armazenado em uma geladeira. Não use se você tomar uma cor marrom escura; Isso indica que está danificado. Este reagente é preferido quando se trata de enterobactérias.

Reagente de Erlich

Pese 2 gr de p-dimetilaminobenzaldeído e se dissolve em 190 ml de álcool etílico absoluto e se mistura lentamente com 40 ml de ácido clorídrico concentrado. Mantenha o reagente de Kovac da mesma maneira. O reagente de Ehrlich é mais usado para bactérias não fermentadas e anaeróbicas.

Formulários

O meio SIM é altamente utilizado em laboratórios de bacteriologia. Tem como uma vantagem que três características essenciais possam ser observadas na identificação de enterobactérias.

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Semeado

A maneira certa de semear esse meio é usar a agulha, com a qual uma parte da colônia pura para estudar é tomada e inserida no centro da média verticalmente. Uma única estocada deve ser feita. A punção não deve chegar ao fundo do tubo, a coisa certa é cobrir apenas dois terceiros.

Não é aconselhável repetir o inóculo, pois isso pode levar falsas interpretações de motilidade positiva. O meio inoculado é incubado em aerobiose a 37 ° C por 24 horas.

Uma vez que o tempo termina, observa -se se houve ou não uma produção de H₂E leia a motilidade. Finalmente, o Indol é revelado, adicionando 3 a 4 gotas do reagente de Ehrlich ou Kovac, misturado suavemente e interpretado.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.

Controle de qualidade

Como controle de esterilidade, um ou dois tubos sem inocular em 37 ° C por 24 horas são incubados. Espera -se que, após esse período, não haja crescimento ou mudança de cor.

Como controle de qualidade, você pode usar cepas conhecidas certificadas, como: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Os resultados esperados são: Escherichia coli H₂S negativo, indol e motilidade positiva, Enterobacter Aerogenes apenas motilidade positiva, Salmonella typhimurium H₂S e motilidade positiva, com indole negativo. Proteus vulgaris Tudo positivo, desde que Klebsiella pneumoniae e Shigella Sonnei Tudo negativo.

Limitações

-Algumas cepas de Morganella Morganii, Entre outras cepas, pode produzir um pigmento acastanhado neste meio devido à produção de melanina, isso não deve ser confundido com o precipitado de sulfeto ferroso. Em profissionais inexperientes, essa situação pode gerar falsos positivos na interpretação do teste H₂S.

-Bactérias aeróbicas rigorosas crescerão apenas na superfície do tubo, o que dificulta a interpretação da motilidade.

Referências

1. BD Laboratories. Bbl Sim Medum. 2008. Disponível em: BD.com
2. Laboratórios Neogen. Sim Medum. Disponível em: FoodSafety
3. DIFCO FRANCISCO SORIA MELGUIZO. Sim Medum. 2009. Disponível em: http: // f-soria.é
4. Laboratório Brizuela-Lab.  SIM médio. Disponível em: .Brizuela-Lab.com
5. Laboratórios da Britânia. SIM médio. 2015. Disponível em: Studyres.É/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª ed. Pan -American Editorial S.PARA. Argentina.