Selenito caldo o que é, fundamento, preparação, usa

Ele Selenito caldo É um meio de cultura líquida seletiva. Foi projetado por Leifson para o enriquecimento de amostras onde suspeita a presença de bactérias enteropatogênicas do gênero Salmonella.

Esta mídia atende às demandas da Associação Americana de Saúde Pública (APHA) e, portanto, é aceita para a investigação da presença de Salmonella em amostras de fezes, urina, alimentos líquidos ou sólidos, água, entre outros.

Selenito caldo. Fonte: Foto tirada pelo autor do MSC. Marielsa Gil

A composição química de que favorece a recuperação desses microorganismos e, por sua vez, inibe o crescimento de outros. É principalmente tóxico para a maioria das bactérias pertencentes à família Enterobacteriae. No entanto, também permite a recuperação de cepas de Shigella e não inibe o crescimento de Pseudomonas e Proteus.

É composto de hidrogênio de sódio anidro selen, fosfato de sódio anidro, peptonas e lactose. Há também uma variante à qual Cistina é adicionada, daí o nome dela selenito-cistina caldo.

Atualmente, o uso de caldo de selenito-cistina é preferido, uma vez que uma porcentagem maior de recuperação de salmonela equivalente à observada com outros meios seletivos com o mesmo objetivo é obtida, como o caldo de tetracionato de sódio.

Base

Os peptonos contidos no caldo servem como nutrientes para o bom desenvolvimento de microorganismos. As cepas de Salmonella usam peptones como fonte de nitrogênio, vitaminas e aminoácidos.

A lactose é carboidrato fermentável, enquanto o selenito de sódio é a substância inibidora que diminui o crescimento de bactérias Gram positivas e a maioria das bactérias presentes na flora intestinal, especialmente a família Enterobacteriae. Fosfato de sódio é o amortecedor que estabiliza o pH médio.

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No caso da variante de caldo de selenito que contém L-Cistina, esse composto adicional é um agente redutor que minimiza a toxicidade do selenito, aumentando a recuperação de Salmonella.

Preparação

-Selenito caldo

Se você tiver os componentes da mistura, pode pesar:

4 gr de hidrogênio de sódio anidro.

10 gr de fosfato de sódio anidro.

5 gr de peptones.

4 gr de lactose.

Dissolver os compostos em 1 litro de água destilada estéril. Pode ser aquecido um pouco para se dissolver na íntegra.

Alguns laboratórios expõem o meio por 10 minutos em vapor de fluente para esterilizá -lo, pois a autoclave não deve ser usada. Se o meio for esterilizado, poderá ser armazenado na geladeira até que seu uso.

Também pode ser preparado sem esterilizar e servir de 10 a 15 ml a tubos de teste estéreis.

Nesse caso, você deve deixar ficar de pé e usar imediatamente. Como o meio não é estéril, ele não pode ser armazenado em uma geladeira para uso posterior.

-Preparação de mídia comercial

Se o meio comercial estiver disponível, 23 gr do meio desidratado e dissolvido em um litro de água destilada estéril. Aqueça brevemente para terminar a dissolução. Não esterilize em autoclave. Serve assepticamente 10 ou 15 ml em tubos de ensaio estéreis.

O pH final do meio deve ser de 7,0 ± 0,2.

Deve -se notar que a cor do meio desidratado é bege e a preparação é clara e translúcida âmbar.

Variante de caldo de selenito-cistina

Ele contém os mesmos compostos de caldo de selenita, mas 10 mg de Cystina são adicionados. O restante do procedimento é exatamente o mesmo que descrito acima.

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Formulários

Este meio é especial para ser usado em estudos epidemiológicos, nos casos em que a doença não está em seu estágio agudo, pacientes assintomáticos ou portadores saudáveis.

O isolamento do gênero Salmonella geralmente é difícil, pois normalmente estão contaminando as amostras de uma maneira curta. Estar em uma noz.

Por outro lado, a matéria -prima com a qual os alimentos processados ​​são frequentemente preparados são expostos a calor, processos de desidratação, uso de desinfetantes, radiação e conservantes, entre outros.

Portanto, os salmonelas presentes na matéria -prima são maltratados pela submissão do produto aos processos industriais acima mencionados. Da mesma forma, no caso de amostras clínicas, como fezes, as cepas podem ser fracas se vieram de pacientes que foram tratados com antibióticos.

Portanto, qualquer amostra é suspeita da presença de Salmonella deve ser pré -enriquecimento em caldo de Lactosado e, posteriormente, enriquecido em caldo de selenito para otimizar sua recuperação na mídia seletiva, como o ágar SS, Xilosa Agar, de -xicolate lisina (XLD) , Hoktoen entérico (He) e Green apar -Brilante, entre outros.

Semeado

Para amostras de fezes, pegue 1 gr de amostra e suspenda em um tubo com 10 a 15 ml de caldo de selenito. Se as fezes forem líquidas, pegue 1 ml e suspenda no caldo. Para swabs retais, faça o download do material do swab no caldo.

Em amostras de alimentos sólidos, pegue 1 gr e suspenda no caldo de selenito.

Em alimentos líquidos, misturam partes iguais com caldo de selenita de dupla concentração.

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Para amostras de urina, você deve centrífugar, descartar o sobrenadante, pegue todo o sedimento e suspenda -o no caldo de selenito.

Os caldos a 37 ° C são incubados por 24 horas de incubação. O crescimento bacteriano é evidenciado pela turbidez. Um tubo adicional por amostra também pode ser incluído para incubar 42 ° C. Posteriormente, semear um meio sólido seletivo do caldo Selenito.

Controle de qualidade

Para controle de esterilidade, 37 ° C é incubado por 24 horas um caldo de selenito de cada lote sem inocular. Espera -se que não haja turbidez, nenhuma mudança de cor média.

Para controlar o funcionamento adequado do meio, cepas conhecidas podem ser usadas, como:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.

Os resultados esperados são:

• Para as três primeiras cepas bacterianas, o crescimento deve ser satisfatório.
• Para Escherichia coli Inibição parcial.
• Para o crescimento moderado de proteus.

Limitações

O caldo meio -selenito é tóxico para a pele humana, portanto, o contato direto deve ser evitado.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Selenito caldo. Disponível em: Britanialab.com
2. Laboratórios Neogen. Selenito caldo. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com