Breatamento, preparação e uso da CE

Ele Caldo CE ou caldo Escherichia coli É um meio de cultura líquida seletiva. Este meio é recomendado pelos métodos padrão para a contagem de coliformes totais e fecais, pela técnica de número mais provável (NMP) em amostras de água e alimentos, onde o agente principal envolvido é o Escherichia coli.

O caldo CE é composto de tripta, lactose, sais biliares, fosfato piplásico, fosfato monopotasico, cloreto de sódio e água. Sua fórmula é estrategicamente projetada para favorecer o crescimento de coliformes totais e fecais e impedir o desenvolvimento de outros microorganismos que o acompanham.

Representação figurativa da preparação do caldo da CE. Fonte: Pixabay.com

As bactérias Escherichia coli É o principal coliforme fecal presente como poluente em fontes de água e alimentos, sendo a causa de importantes efeitos gastrointestinais.

Deve -se notar que existem muitos sorotipos de Escherchia coli; Entre eles, o enterohemorrágica (EHEC), enteroinvasivo (EIEC), enteroopatogênico (EPEC), enterotoxigênico (ETEC) e enteroagregativo (EAEC) pode ser mencionado.

Este meio tem a capacidade de permitir o desenvolvimento de todos eles, mas incapaz de diferenciá -los um do outro. Para isso, testes adicionais devem ser realizados.

O estudo microbiológico de água e alimentos para o número mais provável (NMP) para a busca de coliformes totais e fecais é um protocolo composto de várias fases; fase presuntiva, fase confirmatória e fase de conclusão. O caldo de CE é usado na fase confirmatória.

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Base

Caldo CE

O meio CE é baseado no fornecimento dos elementos nutricionais necessários para o desenvolvimento ideal de coliformes totais e fecais, onde as bactérias são incluídas Escherichia coli.

Esses elementos nutricionais são fornecidos pela triptein, sendo uma excelente fonte de peptídeos e aminoácidos. Além disso, ele também contém lactose, um carboidrato fermentável que fornece energia e permite que você mostre se a bactéria produz gás.

Por outro.

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Da mesma forma, Dipotasy fosfat. Esse sistema é necessário, porque a lactose contida no caldo tende a acidificar o meio quando é fermentado por microorganismos, mas isso é compensado por sais de fosfato.

Portanto, esses elementos são essenciais, porque a acidez sem controle pode afetar o bom desenvolvimento de microorganismos procurados.

Por sua vez, o cloreto de sódio estabiliza o ambiente, enquanto a água é o solvente dos solutos presentes e fornece consistência líquida ao ambiente.

Broth CE modificado com Novobiocin

Okrend e Rose criaram uma variedade de caldo de CE, chamado CE modificado em caldo CE. A modificação consistiu na diminuição da concentração de sais biliares e no agregado de 20 mg/dl de Novobiocina.

Esta modificação favorece a recuperação de cepas de Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Este sorotipo bacteriano causa colite hemorrágica grave que pode causar síndrome urêmica hemolítica (SUH); que por sua vez podem gerar insuficiência renal aguda, com uma alta taxa de mortalidade que pode atingir até 50% em idosos.

Devido ao mórbido causado por esta bactéria para o consumo de alimentos contaminados, o Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA) recomenda o uso deste meio.

Preparação

Caldo CE

Pese 37,4 gr do meio desidratado e se dissolve em 1 litro de água destilada. A mistura deve ser permitida por 5 minutos. Posteriormente, em uma fonte de calor, acaba se dissolvendo acenando com frequência.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos de ensaio anteriormente condicionados com um tubo de Durham dentro. Esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

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O pH médio deve ser de 6,9 ​​± 0,2.  A cor do meio desidratado é bege e preparado é um âmbar claro.

Os caldos são armazenados na geladeira até o uso. No momento do uso, os caldos devem estar à temperatura ambiente.

Por outro lado, o caldo CE também pode ser preparado em dupla concentração.

Broth CE modificado com Novobiocin

Pese 36,7 gr do meio desidratado e se dissolva em 1 litro de água. O restante da preparação é igual ao descrito acima.

Usar

Análise coliforme total e fecal

O caldo CE é ideal para a fase confirmatória do estudo coliforme pelo método NMP, tanto em amostras de água, como em produtos farmacêuticos e alimentares.

Os caldos mais apertados e de produção de gás que são obtidos na fase presuntiva devem ser restaurados em caldos verdes brilhantes a 2% e no caldo CE.

Para coliformes totais, os caldos CE são incubados em aerobiose por 24 a 48 horas a 37 ° C e, para coliformes fecais, são incubados em aerobiose por 24 a 48 horas a 44 ° C.

Nos dois casos, é interpretado da seguinte maneira: os tubos escuros com produção de gás são considerados positivos. Se em 24 horas não houver produção de gás continuar a incubação por até 48 horas.

Os caldos CE positivos vão para a fase confirmatória completa, que consiste em recompensar em mídias seletivas, como Mac Conkey, EMB ou Endo Endo Agar.

Se o caldo utilizado for modificado com Novobiocin, os tubos positivos são recomendados para se assemelhar ao Agar Mac Conkey com Sorbitol.

Controle de qualidade

O controle de qualidade deve ser feito a partir de cada lote médio preparado. Em primeiro lugar, a esterilidade do meio ambiente deve. Nesse sentido, um ou dois caldos sem inocular em aerobiose por 24 horas a 37 ° C são incubados. O resultado esperado é um caldo transparente, sem turbidez ou mudança de cor.

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Em segundo lugar, o crescimento de cepas conhecidas deve ser avaliado, pois você pode usar as seguintes bactérias: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Em todos os casos, é esperado um desenvolvimento microbiano satisfatório, observando um caldo nublado com produção de gás para E. coli E sem gás para Salmonella.

Outras cepas que podem ser incluídas no controle são: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Essas cepas devem ser totalmente inibidas.

Recomendações

-A colocação dos tubos de Durham é indispensável para o estudo de coliformes.

-Distribuir o meio nos tubos de teste antes de esterilizar, nunca depois.

-Não use se o meio tiver mais de 3 meses preparado.

-Não use se alguma mudança das características usuais do meio for observada.

Referências

1. Laboratórios da Britânia. Ec do meio. 2015. Disponível em: Britanialab.com
2. E. coli Enterohemorragia. O Centro de Segurança Alimentar e Saúde Pública. 2010. Disponível em: CFSPH.Iastate.Edu
3. Corporação neogen. Ec média Ec. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com
4. Neogen. EC medificado modificado com Novobiocina. Disponível em: FoodSafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, por Castillo M. Detecção, isolamento e caracterização de Escherichia coli Produtor de toxinas Shiga de carne moída fresca de açougueiros de Concepción, província de Tucumán. Rev Arg do microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Disponível em: www.Scielo.org.