Ágar verde brilhante, base, preparação, usa

Ele Ágar verde brilhante É um meio de cultura sólido, com um alto grau de seletividade. É usado exclusivamente para o isolamento de cepas do gênero Salmonella; No entanto, existem algumas exceções, como as espécies de Typhi e Parathyphi que não crescem neste meio.

A busca pelo gênero Salmonella é frequente em amostras de fezes, água ou alimentos. Nesse sentido, este meio pode ser muito útil. Este ágar foi criado em 1925 por Kristensen, Lester e Jurgens, foi mais tarde modificado por Kauffmann.

É composto por multiplayonas de tecidos de animais digeridos e caseína digerática, também contém extrato de levedura, cloreto de sódio, lactose, sacarose, fenol vermelho, verde brilhante e aderência.

É caracterizado por ser um meio bastante inóspito para a maioria das bactérias, favorecendo o crescimento de Salmonella, no entanto, alguns coliformes são capazes de subsistir nela, desenvolvendo fracamente.

É importante destacar que neste meio o gênero Shigella não cresce e nem Salmonella typhimurium, nenhum Salmonella paratyphi. Portanto, se você deseja isolar esses microorganismos, outras mídias devem ser usadas, como o ágar XLD, entre outros.

Base

Ágar verde brilhante

Cada um dos componentes que compõem o meio cumpre uma função específica que determina as características e propriedades do ágar.

Pluripeptons e extrato de levedura são a fonte de nutrientes onde os microorganismos tomam nitrogênio e minerais necessários para seu desenvolvimento. Lactose e sacarose são fontes de energia para microorganismos que são capazes de fermentando -os.

Verde brilhante é a substância inibidora que impede o desenvolvimento de bactérias Gram positivas e um grande número de microorganismos grama negativos.

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O cloreto de sódio fornece estabilidade osmótica ao meio ambiente. Enquanto o fenol vermelho é o indicador de pH, da mesma cor vira ao detectar a produção de ácidos da fermentação de carboidratos.

Colônias não fermentárias de lactose e sacarose crescem neste meio de uma cor branca ou transparente, em um fundo vermelho. Por exemplo, bactérias do gênero Salmonella.

Enquanto a lactose ou a sacarose fermentando bactérias capazes de crescer neste meio, elas desenvolvem cor amarela e amarelada, em um fundo amarelo esverdeado. Por exemplo, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.

Variantes de ágar verde brilhante (BGA)

Existem outras variantes do ágar verde brilhante; Girvobiocina verde verde brilhante Apar (NBG) e ganância brilhante crescer.

A glicose de ágar de ágar verde brilhante e verde (NBG)

Ele contém agricultura de soja de soja, férrico de amônio amônio.

É usado para isolar as colônias de Salmonella de amostras de fezes.

Nesse caso, o verde brilhante e a novobiocina são as substâncias inibitórias que impedem o crescimento de bactérias Gram positivas e alguns microorganismos gram -negativos.

O tiossulfato de sódio é a fonte de enxofre e o citrato férrico é a fonte de ferro, ambos necessários para revelar a produção de sulfeto de hidrogênio através da formação de um precipitado preto de sulfeto férrico.

A glicose é carboidrato fermentável e o vermelho fenol é o indicador de pH.

Neste meio, as colônias de Salmonella se desenvolvem grandes com um centro preto cercado por uma auréola avermelhada e seguida por uma área clara visível. Algumas cepas de Citrobacter Freundii produzir colônias idênticas às de Salmonella.

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Brilhante Glicerol Verde Avobiocina Lactose Glicerol (NBGL)

Este meio contém agricultura de soja de soja, citrato de amônio férrico, tiossulfato de sódio, lactose, glicerol, verde brilhante, novobiocina e água destilada.

A diferença neste meio com o anterior.

O meio também é usado para isolar as espécies de Salmonella, as colônias desenvolvem preto, pela produção de sulfeto de hidrogênio.

Somente colônias que não produzem ácido a partir de glicerol ou lactose alcançam um h₂É suficiente, porque o pH sob interfere na formação de H₂S. Isso resulta em colônias incolores para a maioria das espécies de proteus e cytrobacter.

Preparação

-Pesar 58 gramas do meio desidratado obtido comercialmente. Adicione -o em um litro de água drenada. Misture, deixe repousar por alguns minutos e enviar a preparação para uma fonte de calor até que se dissolva completamente.

-Autoclave a 121 ° C por 15 minutos, não exceda o tempo de esterilização.

-Deixe ficar em pé e servir ainda quente em placas estéreis de Petri. O pH final deve ser de 6,9 ​​± 0,2.

-Deixe solidificar e salvar na geladeira até usar. Antes de semear as placas, eles devem tomar a temperatura ambiente.

-O pó é verde e preparado leva uma cor marrom-laranja ou avermelhada, dependendo do pH e da casa comercial. Uma cor muito marrom é indicativa de que o ágar foi superaquecido.

-Uma vez que o ágar não é recomendado, não é recomendável re -construir, porque o meio se deteriora.

Usa/aplicações

Este meio é usado para a busca de tensões do gênero Salmonella amostras de fezes e alimentos lácteos, entre outros.

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Sendo um meios bastante inóspitos, é aconselhável semear um inóculo abundante se a amostra direta for usada. Caso contrário, a pré-enriquecimento e o enriquecimento das amostras deve ser feita antes de semear neste meio.

Como algumas cepas de Salmonella são inibidas ou crescem com dificuldade, é aconselhável acompanhar esse meio com outras idades seletivas para Salmonella.

Toda colônia com uma característica típica de Salmonella deve ser submetida a testes bioquímicos para identificação definitiva.

Controle de qualidade

Para testar o funcionamento adequado do ágar verde brilhante. As cepas de ATCC podem ser usadas para observar seu desenvolvimento nele.

As cepas mais frequentes usadas para controle de qualidade são: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella Flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Os três primeiros devem dar colônias brancas rosa ou transparente em um fundo vermelho. Salmonella com bom desenvolvimento e proteus com crescimento escasso ou regular.

Para Klebsiella e Escherichia, as colônias amarelas esverdeadas são esperadas com fundo amarelo e, no caso de Shigella e Staphylococcus, eles devem ser inibidos.

O meio desidratado deve ser armazenado à temperatura ambiente, em um local seco, porque o meio é muito higroscópico.

Referências

1. Laboratório da Britânia. Ágar verde brilhante. 
2. BD Laboratory. BD ágar verde brilhante.