Sabouraud Agar O que é, fundamento, preparação, usa

Ele Agar Sabouraud, Também conhecido como Agar Sabouraud Dextrose, é um meio de cultura sólido, especialmente enriquecido para o isolamento e desenvolvimento de fungos, como leveduras, moldes e dermatófitos.

Portanto, esse meio não pode estar faltando em um laboratório de microbiologia para investigar a presença de fungos patogênicos ou oportunistas, seja de amostras clínicas ou não clínicas. Também é ideal para o crescimento de bactérias filamentosas, como estreptômicas e nocardias. Seu uso é muito amplo, porque pode ser usado em micologia humana, animal, vegetal e industrial.

PARA. Agar Sabouraud sem porca. B. Agar Sabouraud plantado com fermento. Fonte: Fotos tiradas pelo autor MSC. Marielsa Gil

Este meio foi criado em 1896 pelo excelente dermatologista Raimond Sabouraud, que se tornou um especialista reconhecido em todo o mundo em distúrbios do couro cabeludo, causados ​​principalmente por dermatófitos.

Sua criação foi tão importante que foi usada desde então e é mantida hoje, embora com algumas modificações.

Embora seja especial para os fungos, nessas bactérias médias pode crescer, portanto, para amostras com flora mista, a inclusão de antibióticos em sua preparação é necessária e, portanto, inibe o crescimento da flora bacteriana que pode estar presente.

A escolha do antibiótico deve ser executada com cuidado e levando em consideração o tipo de fungo que você deseja recuperar, pois alguns são inibidos na presença de certas substâncias.

Base

Agar Sabouraud Dextrose é um meio significa que em sua formulação original é fracamente seletiva, devido ao seu 5 ácido pH.6 ± 0.2, no entanto, as bactérias podem ser desenvolvidas, principalmente em incubações prolongadas.

O meio contém caseína pancreática e tecidos digeráticos de tecido animal, que fornecem a fonte de carbono e nitrogênio para o desenvolvimento de microorganismos.

Ele também contém alta concentração de glicose, que atua como uma fonte de energia que favorece o crescimento de fungos acima das bactérias. Tudo isso misturado com ágar -gar, componente que oferece a consistência apropriada.

Por outro lado, o ágar Sabouraud dextrose pode ser seletivo se os antibióticos forem adicionados.

Com antibióticos, é especialmente útil em amostras de feridas, úlceras abertas ou em qualquer amostra na qual se suspeita uma grande contaminação bacteriana.

As combinações mais usadas de dextrose Sabouraud com antibióticos

-Sabouraud Agar com cloranfenicol: ideal para recuperar leveduras e fungos filamentosos.

-Sabouraud Agar com gentamicina e cloranfenicol: quase todos os fungos filamentosos e leveduras crescem nesse meio e inibe um grande número de bactérias, incluindo enterobactérias, pseudomonas e staphylococcus.

-Agar de Sabouraud com cicloheximida: é especialmente útil para amostras do trato de pele ou respiratório, desde que a suspeita seja de fungos dimórficos.

A ciclo -heximida deve ser usada com cautela; Embora seja usado para inibir o crescimento de fungos não -patogênicos ou ambientais e leveduras que podem estar presentes como poluentes em uma amostra, também inibe o crescimento de alguns fungos, como Cryptococcus neoformans,  Aspergillus Fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp e Outros fungos oportunistas.

-Agar Sabouraud com cloranfenicol mais cicloheximida: é usado principalmente para isolar dermatófitos e fungos dimórficos. Tem a inconveniência que inibe algumas espécies de fungos oportunistas, como Candida no Albicans, Aspergillus, Zigomicetos ou C. Neoformans.

-Sabouraud Agar com cloranfenicol, estreptomicina, penicilina G e cicloheximida: é ideal para amostras extremamente contaminadas com bactérias e saprófitos fungos, mas tem a inconveniência de inibir o crescimento de Actinomyces e Nocardias, Além dos fungos oportunistas mencionados acima.

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Preparação

Se eles tiverem ingredientes separados, pode ser preparado da seguinte maneira:

Sabouraud Dextrose 

Pesar:

- 40 gr de dextrose

- 10 gr de peptone

- 15 gr de ágar -gar

- Meça 1000 ml de água destilada

Todos os ingredientes são misturados, o pH é ajustado para 5.6. Os solutos são dissolvidos por ebulição, 20 ml do meio é distribuído em tubos de 25 x 150 mm, sem segurar e com tampa de algodão de preferência.

Tubos com tampa de algodão. Fonte: Foto tirada pelo autor do MSC. Marielsa Gil

Outras medidas de tubo também podem ser usadas, de acordo com a disponibilidade.

Eles levam a autoclave por 10 minutos a uma atmosfera de pressão (121 ° C). Não deve ser excedido no tempo autoclavado. Ao sair da autoclave, os tubos são inclinados com a ajuda de um apoio até que eles se solidificam em um pico de flauta.

Outra maneira é dissolver os ingredientes aquecendo até que ferva. Na mesma Felola autoclavica por 10 minutos e depois distribui 20 ml em placas de Petri.

Se um meio de dextrose de Sabouraud estiver disponível que já contém todos os ingredientes, a quantidade especificada pela casa comercial para um litro de água é especificada. O restante das etapas é igual às descritas acima.

Agar Sabouraud Dextrose (modificação Emmons)

Pesar:

-  20 gr de dextrose

- 10 gr de peptone

-  17 gr de agar -gar

-  Meça 1000 ml de água destilada

Todos os ingredientes são misturados, o pH é ajustado para 6,9. Prosseguir da mesma maneira do caso anterior.

Existem casas comerciais que oferecem o meio com todos os ingredientes. Nesse caso, pese e prepare a maneira como a inserção descreve.

Agar Sabouraud Dextrose (modificação Emmons) com cloranfenicol

Solução mãe de cloranfenicol

- Pesando 500 mg de base de cloranfenicol

- Medir 100 ml de etanol 95%

- Misturar -se

O meio Sabouraud dextrose (Emmons) é preparado como já descrito e adicionalmente para cada litro de adição de 10 ml de solução mãe de cloranphenicol antes de autoclavic.

Sabouraud Emmons com dextrose de cicloheximida

Solução mãe de ciclo -heximida

- Pesar 5 gr de cicloheximida

- Medir 100 ml de acetona

- Misturar -se

O Sabouraud Dextrose Apoure.

Agar de Sabouraud Dextrose (Emmons) com cloranfenicol e cicloheximida

O meio de dextrose de Sabouraud (Emmons) é preparado como já descrito e adicionalmente para cada litro de adição de 10 ml de solução mãe de cloranphenicol e 10 ml de solução mãe de cicloheximida antes de autoclavada autoclavada.

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Outros antibióticos que podem ser adicionados

vinte.000 a 60.000 unidades de penicilina por litro de meio.

30 mg de estreptomicina por litro de meio.

Ambos devem ser incorporados após o meio, levemente resfriado (50-55 ° C).

0,04 g de neomicina por litro de meio.

0.04 g de gentamicina por litro de meio.

Considerações Especiais

A segurança é preferida para semear o ágar Sabouraud dextrose em tubos em forma de cunha (inclinados em um pico de flauta) e não em placas de Petri, para evitar a dispersão e a inalação de esporos.

É importante que os tubos com idades de Sabouraud sejam cobertos com algodão e não com uma tampa de fio, pois foi demonstrado que condições semi -aeróbicas inibem a formação de esporosas em algumas cepas, por exemplo de Coccidioides imitis. Além disso, a maioria dos fungos são aeróbios.

Em caso de usar uma tampa de thread, não bem fechada.

Controle de qualidade

A mídia preparada deve ser feita controle de qualidade para verificar seu funcionamento adequado. Para isso, certas cepas são semeadas.

Para Sabouraud Dextrose Candida Albicans, que deve ter um excelente crescimento. Outra placa é inoculada com cepas De Escherichia coli, deve ser completamente inibido.

Uma placa sem inocular também é incubada na qual nenhum microorganismo deve crescer.

Para Sabouraud Dextrose Agar com cloranfenicol e ciclo -hereximida  Trichophyton Mentagrophytes, deve se desenvolver bem. Outra placa é inoculada com uma tensão de Aspergillus flavus, em que deve haver um crescimento escasso ou não de crescimento. Além disso, uma placa desocculadora é incubada para demonstrar sua esterilidade.

Para Sabouraud dextrose com cicloheximida, cepas de Candida Albicans, Trichophyton Rubrum  qualquer Canis microsporum, que deve demonstrar um bom crescimento.

Da mesma forma, uma tensão de Aspergillus flavus, demonstrando crescimento escasso ou não crescimento. Finalmente incuba uma placa sem inocular para controle de esterilidade.

Formulários

Cultivo primário

Agar clássico de Sabouraud Dextrose contém 4 gr de dextrose e é excelente como um meio de isolamento primário, pois mostra a morfologia característica de cada fungo.

Também é excelente para demonstrar a produção de pigmentos. No entanto, não é o meio mais apropriado para observar a esporulação.

Nem é recomendado cultivar Blastomyces dermatitidis, que é inibido pela alta concentração da glicose presente.

Por outro lado, certas considerações devem ser lembradas.

Alguns fungos se desenvolvem melhor à temperatura ambiente, como moldes, outros se desenvolvem com sucesso a 37 ° C, como algumas leveduras, e outros podem se desenvolver em ambas as temperaturas (fungos dimórficos).

Portanto, às vezes é necessário.

Por exemplo, Sporothrix Schenckii É semeado em duas placas; Um é incuba à temperatura ambiente para obter a fase do molde e o outro é incubado a 37 ° C para obter a fase uppaduriforme, mas neste último é necessário adicionar 5% de sangue ao ambiente.

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Em outros casos, como nas amostras mythom, duas placas de ágar de Sabouraud são semeadas, uma com cloranfenicol e outra com ciclo -heteration. O primeiro permitirá o crescimento de agentes causais de mitoma de origem mítica (eumicetoma) e os segundos agentes causais de micetomas de origem bacteriana, como actinomicetomas.

Esporulação

O ágar Sabouraud Dextrose modificado por Emmons contém 2 gr de dextrose e não apenas serve para isolamento, mas também para a esporulação e conservação de fungos.

Neste meio, se você puder recuperar cepas de Blastomyces dermatitidis.

Conservação

Para conservar as culturas de fungos, eles podem ser armazenados na geladeira (2-8 ° C). O tempo de conservação pode variar entre 2 a 8 semanas. Após esse período, eles devem ser subjetivos para repetir o processo.

Alguns fungos permanecem melhores à temperatura ambiente, como Epidermophyton foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum e Microsporum Audounii.

A manutenção da tensão pode ser estendida para evitar o pleomorfismo se a dextrose do ágar for completamente eliminada e se a quantidade de ágar ao meio ambiente for reduzida para evitar a secura.

Microculturas

Para a identificação de alguns fungos filamentosos, é necessário realizar microculturas usando o ágar Sabouraud ou outros meios especiais para observar estruturas de reprodução sexual e assexual.

Em micologia humana

É usado principalmente para o diagnóstico de doenças fúngicas, especialmente aquelas que afetam a pele e seus anexos (cabelos e unhas).

Amostras podem ser secreções, exsudatos, pele, cabelos, unhas, escarro, LC ou urina. Patógenos comumente isolados são dermatófitos, fungos causando micose subcutânea e sistêmica.

Micologia animal

Os animais são frequentemente afetados por infecções fúngicas; portanto, o ágar Sabouraud é tão útil em micologia animal quanto em humano.

Por exemplo, os dermatófitos podem afetar os animais. É o caso de Canis var distortum microsporum, Isso frequentemente infecta cães, gatos, cavalos, porcos e macacos. Além disso, Microsporum Gypseum infecta cães, gatos e gado.

Pássaros como galinhas, galos e galinhas são afetados por Microsporum Gallinae.

Outros fungos, como Zymonema farciminosum, Eles também são causa de doença em animais, principalmente em cavalos, mulas e burros, produzindo uma inflamação importante em vasos linfáticos.

Sporothrix Schenkii e Histoplasma Capsulatum Eles afetam os animais nacionais e humanos.

Micologia ambiental

Muitos fungos patogênicos ou oportunistas podem se concentrar em um determinado momento em um determinado ambiente, especialmente em salas de operações e unidades de terapia intensiva (UTI) de clínicas e hospitais. Portanto, é necessário controlar o mesmo.

Outros espaços vulneráveis ​​são bibliotecas e edifícios antigos, que podem ser afetados pela concentração de fungos ambientais.

Em estudos ambientais, o ágar de dextrose Sabouraud para isolamento de fungos é usado.

Micologia industrial

Sabouraud Dextrose Agar não pode estar faltando para o estudo de fungos poluentes na produção de cosméticos, comida, bebidas, couro, têxteis, entre outros.

Planta micologia

As plantas também sofrem de doenças de fungos, afetando diferentes partes da planta, que podem até acabar com a colheita, causando grandes perdas na agricultura.

Referências

1. Laboratório Valtek. (2009). Agar de Sabouraud Dextrose com Cycloheximida. Disponível em: Andinamedica.com.
2. Navarro ou. (2013). Micologia veterinária. Universidade Agrária Nacional. Nicarágua.