Baird Parker Agar O que é, Fundação, Preparação, Use

Ele Agar Baird Parker ou ágar de gema de ovo é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi criado em 1962 para a detecção e contagem de estafilococos positivos da coagulase (Staphylococcus aureus).

É composto de caseína pancreática hidrolisada, extrato de carne, extrato de levedura, cloreto de lítio, glicina, piruvato de sódio, telurita de potássio, garra e emulsão de gema de ovo.

Colônias típicas de Staphylococcus aureus no envelhecimento de Baird Parker. Fonte: Daizy John [CC por 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenças/por/4.0)]

Baird Parker Agar é baseado na capacidade do S. aureus para reduzir o telurito e produzir lecitinase. Ambas as propriedades geram uma colônia com características específicas para esta espécie. Portanto, fornece grande eficácia na detecção deste microorganismo.

As colônias típicas de S. aureus Eles são pretos ou cinza escuro, com borda incolor e uma halo claro que os rodeia, diferenciando -se do resto dos microorganismos. Este patógeno pode ser encontrado em amostras clínicas, águas, cosméticos e alimentos crus ou cozidos.

Seu diagnóstico ou detecção é de extrema importância, devido à variedade de patologias que produz, como intoxicação alimentar, síndrome da pele escaldada, síndrome de choque tóxico, abscessos, meningite, septicemia, endocardite, entre outros.

Base

Poder nutricional

CASEINA PANCREATIC Hidrolisada, extrato de carne e extrato de levedura são as fontes de nutrientes, vitaminas e minerais necessários para o desenvolvimento geral microbiano, enquanto o piruvato e a glicina são compostos que favorecem o crescimento específico de Staphylococcus aureus.

Seletivo

O ágar Baird Parker é seletivo porque contém substâncias que inibem o crescimento da flora que a acompanha, favorecendo o desenvolvimento de S. aureus. Compostos inibitórios são cloreto de lítio e telurita de potássio.

Diferencial

Este meio permite diferenciar o S. aureus do restante da coagulase negativa estafilococos. S. aureus Ele tem a capacidade de reduzir a telurita para o teluro metálico preto, formando colônias de preto ou cinza escuro.

Da mesma forma, a gema de ovo fornece os substratos para demonstrar a presença da enzima lectinase e lipasa. S. aureus É lecitinase positiva e, portanto, um halo claro será observado ao redor da colônia, indicando que a lecitina foi hidrolisada.

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Nesse sentido, a aparência neste cólon preto ou preto ou cinza -cinza S. aureus. 

Se uma zona de precipitação for formada, é indicativo que há atividade da lipase. Algumas cepas de S. aureus Eles são positivos e outros lipase negativos.

No caso de o S. aureus Seja uma lipase positiva, uma área opaca será observada em torno da colônia preta ou cinza escura e depois a auréola clara para a ação da lecitinase.

As colônias de bactérias que não sejam S. aureus capazes de crescer neste meio, eles desenvolverão colônias incolores ou marrons, sem halo ao redor.

Você também pode observar colônias negras atípicas com ou sem borda incolor, mas sem halo claro. Essas colônias não devem ser levadas em consideração, elas não correspondem a S. aureus.

Preparação

Emulsão de gema de ovo

Um ovo de frango fresco é tomado, estava vagando bem e colocado de 2 a 3 horas em álcool 70%. Então, o ovo abre assepto e cuidadosamente separa o brilhante da gema. Posteriormente, 50 ml da gema são tomados e misturados com 50 ml de solução fisiológica estéril.

1% P/V Potassium diz

Algumas casas comerciais vendem 1% de poetássio teluro pronto para usar. É adicionado ao meio antes que os meios solidifiquem.

Para preparar esta solução em laboratório, 1.0 gr de telurita de potássio e dissolve -se em uma parte da água. Posteriormente, a quantidade de água é concluída até atingir 100 ml. A solução deve ser esterilizada pelo método de filtragem.

Preparação de meio de cultura

Pese 60 gr de meio desidratado e se dissolve em 940 ml de água destilada. Deixe a mistura de repouso por aproximadamente 10 a 10 minutos.

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Aplique calor agitando o ambiente com frequência para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto. Esterilice em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe descansar até atingir uma temperatura de 45 ° C e adicione 50 ml da emulsão de gema de ovo e 10 ml de 1% de telurita. Misture bem e sirva entre 15 a 20 ml em placas estéreis de Petri.

Deixe solidificar, pedir em um invertido em placas e salve na geladeira até usar.

O pH final do meio preparado deve ser de 6,8 ± 0,2.

Antes de semear uma amostra, você deve esperar a placa tomar a temperatura do meio ambiente. Semear as placas devido a um passeio ou superfície plantada com drigalski spatula.

A cor do meio desidratada é assada e a cor do meio preparado é âmbar leve.

Usar

Amostras clínicas

As amostras clínicas são semeadas diretamente, descarregando parte do material em uma extremidade da placa, e a partir daí se destacaram devido à exaustão. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Amostras de comida

Pesar 10 gr da amostra de alimentos e homogeneizar em 90 ml de água de peptonada a 0,1%, a partir daí eles preparam diluições, se necessário. Inocular as placas em triplicado com 0,3 ml das soluções preparadas e semear por superfície com drigalski spatula. É incuba por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.

Esta metodologia permite contar as colônias típicas obtidas e é ideal quando a presença de S. aureus acima de 10 UFC por gr/ml de amostra.

Se for suspeito de que a quantidade de S. aureus É pequeno ou há muita flora que o acompanha, é sugerido. Isso favorecerá o crescimento de S. aureus e inibir o desenvolvimento da flora que o acompanha. Os tubos tufos serão semeados em Baird Parker Agar.

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Amostras de água

Em um sistema de filtração a vácuo e esterilizado, 100 ml de água em estudo são filtrados e, em seguida, a membrana microporosa de 0,4 microns é removida com um grampo estéril e colocado em uma placa de Baird Parker. É incuba por 24 a 48 horas a 35-37 ° C. Esta técnica permite que as colônias típicas contem S. aureus.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do ágar Baird Parker, cepas conhecidas podem ser usadas, como Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 O Proteus mirabilis ATCC 43071.

No caso de cepas de S. aureus O ATCC é conhecido por reduzir a telurita e são lipase positiva e lecitinase. Portanto, deve haver um desenvolvimento satisfatório e colônias convexas com centro preto e borda incolor, com um halo opaco e outro halo mais externo claro.

Por sua parte, de S. epidermidis É esperado um desenvolvimento ruim neste meio, com colônias cinzentas ancorando em preto, sem um halo claro.

Para E. coli e P. Mirabilis Espera -se que seja total ou parcialmente inibido. Em caso de cultivo de colônias marrons sem zona opaca, ou halo claro.

Recomendações

-O meio não deve ser aquecido após adicionar a telurito e a gema de ovo.

-A preparação da emulsão de gema de ovo e seu agregado no meio é um passo muito vulnerável de contaminação. Cuidado deve ser feito.

-Se houver uma presença de colônias típicas de S. aureus Deve ser corroborado, montando um teste de coagulase para a referida tensão.

-Se houver resultados duvidosos com a coagulase, outros testes confirmatórios devem ser montados.

-Tenha cuidado para não confundir a presença de colônias típicas de S. aureus Com as colônias negras atípicas.

Referências

1. BD Laboratories. Agar Baird Parker. Disponível em: BD.com
2. Laboratórios Francisco Soria Melguizo. Agar Baird Parker. Disponível em: http: // f-soria.É/informar